中药复方962对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶和乙酰胆碱酯酶活性的影响
作者：李海玲 李林 李斌 叶翠飞 李宗信 何士大 左萍萍
单位：李海玲 李林 李斌 叶翠飞 李宗信 何士大(首都医科大学宣武医院；北京市脑老化重点实验室)；左萍萍(中国医学科学院基础医学研究所)
关键词：中药复方962；老龄大鼠；胆碱乙酰转移酶；乙酰胆碱酯酶
首都医科大学学报000303 提要：为研究中药复方962胶囊对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响，将22月龄和24月龄Wistar大鼠分为青年对照组、老年模型组、阳性对照脑复康组(0.56 g/kg)、962中剂量组(0.9 g/kg)和962大剂量组(1.8 g/kg)5组，分别灌胃给药1～2个月后处死大鼠。用Fonnun法和羟胺比色法分别测定5组大鼠皮质的ChAT和AchE的活性。结果：中药复方962大剂量(1.8 g/kg)对老龄大鼠皮质ChAT活性有提高作用(P<0.05)，但对AchE无显著影响。提示：中药复方962可能通过影响老龄大鼠中枢胆碱能神经系统而改善其衰老的变化。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5； R592
Effects of Traditional Chinese Compound
962 on Choline Acetyltransferase
and Acetylcholinesterase in
Cerebral Cortex of Aged Rats
Li Hailing，Li Lin，Li Bin，Ye Cuifei，Li Zongxin，He Shida
(Beijing Key Laboratory for Brain Aging, Xuanwu Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences)
, 百拇医药
Zuo Pingping
(Chinese Academy of Medical Sciences)
Abstract: In order to determine the effect of the compound 962 capsule on the choline acetyltransferase and acetylcholinesterase in cerebral cortex of aged rats, and to probe the anti-agedness mechanism from the view of choline energy nerve. Male and female aged rats( 22-month old and 24-month old) were classified into five groupsyoung control group, old model group, piracetem group (0.56 g/kg), 962 middle dose group (0.9 g/kg) and 962 high dose group (1.8 g/kg). All test drug was administrated for 1～2 months by ig. The choline acetyltransferase and acetylcholinesterase activity were measured by Fonnun and hydroxylamine colorimetry method. Results: Compound 962 improved the activity of choline acetyltransferase (P<0.05), but it had little effect on the acetylcholinesterase in cerebral cortex of aged rats. This indicated that by affecting the central nervous system in aged rats, compound 962 capsule could improve the aging process.
, 百拇医药
Key words: traditional Chinese compound 962; aged rat; choline acetyltransferase； acetylcholinesterase
老年性痴呆是导致老年人残疾的最严重的疾病之一。随着人口的老龄化，老年性痴呆的发病人数不断增加，将给家庭和社会带来沉重的负担。因此，研究预防和治疗老年性痴呆的有效药物是一个紧迫的课题。在总结我院防治老年性痴呆经验的基础上，结合现代药理研究成果，我们研制成中药复方制剂“962”[1，2]，并于1999年2～9月，观察了该药对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响，并与阳性对照药脑复康进行了比较。
1 材料和方法
1.1 动物
Wistar 大鼠，老龄雄性大鼠为24月龄，体质量450～660 g；青年雄性大鼠为5月龄，体质量310～390 g；老龄雌性大鼠为22月龄，体质量235～390 g；青年雌性大鼠为5月龄，体质量229～366 g。以上所有实验动物均由卫生部药品生物制品检定所提供。
, 百拇医药
1.2 药品
中药复方962胶囊，含何首乌、石菖蒲等6味中药(具体成分保密)，由北京第四制药厂提供，批号：980515，每克干粉含生药8.16 g。实验时采用水溶解，中剂量每毫升含干粉0.09 g，大剂量每毫升含干粉0.18 g。灌胃量按10 mL/kg。脑复康(piracetam)由北京市曙光制药厂提供，批号：970618，实验时用水溶解配成0.056 g/ mL。
1.3 方法
分为青年对照组、老年模型组、阳性对照脑复康组(0.56 g/kg)、962中剂量组(0.9 g/kg)和962大剂量组(1.8 g/kg)5组。每日灌胃给药1次，雄性大鼠连续灌胃1个月、雌性大鼠连续灌胃2个月后处死，立即取出全脑，分离大脑皮质，制成匀浆。
ChAT活性测定采用Fonnun法[3] ，AchE活性测定采用羟胺比色法[4]。
, 百拇医药
1.4 统计学方法
实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS软件进行统计学处理，用方差分析法和最小显著差法(LSD)进行两两比较。
2 结果
2.1 中药复方962对老龄大鼠皮质ChAT活性的影响
老年模型组较青年对照组ChAT活力有下降趋势。中药复方962可以提高老龄雄性、老龄雌性大鼠皮质ChAT的活力，其中962大剂量组对雌性大鼠ChAT活力的提高有显著意义(P<0.05)；且老龄雄性大鼠皮质ChAT活力略高于老龄雌性大鼠(表1)。
2.2 962对老龄大鼠皮质AchE活性的影响
由表2可见，中药复方962对老龄雄性、老龄雌性大鼠皮质AchE的活性无明显的影响。同样，老龄雄性大鼠皮质AchE的活力略高于老龄雌性大鼠。
, 百拇医药
表1 962胶囊对老龄大鼠皮质ChAT活性的影响 组别
雄性
雌性
n
ChAT活性/(fmol.s-1)
n
ChAT活性/(fmol*s-1)
青年对照组
10
14.29±3.50*
9
, 百拇医药
10.34±1.22
老年模型组
7
11.34±2.34
5
9.45±1.95
脑复康组
9
13.18±1.39
6
9.29±1.11
962中剂量组
, 百拇医药 7
12.57±3.22
5
10.12±1.45
962大剂量组
8
13.51±1.33
7
11.06±0.89*
*与老年模型组比较P<0.05 表2 962胶囊对老龄大鼠皮质AchE活性的影响 组别
雄性
雌性
, 百拇医药
n
AchE活性/(pmol.s-1)
n
AchE活性/(pmol*s-1)
青年对照组
10
296.11±73.33
9
228.34±71.11
老年模型组
7
, http://www.100md.com 261.11±79.45
5
201.11±97.78
脑复康组
9
281.67±76.11
6
225.00±42.22
962中剂量组
7
279.45±87.78
5
, 百拇医药 211.67±98.13
962大剂量组
8
298.34±91.67
7
237.78±68.89
3 讨论
乙酰胆碱(Ach)是中枢胆碱能神经系统重要的神经递质，它由胆碱乙酰转移酶(ChAT)催化合成，由乙酰胆碱酯酶(AchE)催化分解，通过Ach受体发挥生物学效应，ChAT 和AchE共同维持着Ach的动态平衡。老年性痴呆(Alzheimer病)是以进行性痴呆为主要临床表现的大脑变性性疾病。虽然AD中有多种神经递质的不足，但以胆碱能的不足与病变最为相关。
, 百拇医药
目前，治疗AD的方法之一是应用胆碱酯酶抑制剂，但由于其不良反应大,长期用药疗效不佳,使其应用受到限制。而中药往往有多方面的作用[5]。
我们以补肾益气、开窍化瘀为治则组成中药复方962胶囊，观察了中药复方962对老龄雌性、老龄雄性大鼠ChAT和AchE的影响。实验表明：中药复方962大剂量(1.8 g/kg)对雌性老龄大鼠皮质ChAT活性有显著提高作用(P<0.05)，但对AchE无明显影响。以往的研究表明该药有改善老龄大鼠的学习记忆功能，因此该药可能通过提高ChAT活性而改善学习记忆功能，从而对治疗老年性痴呆具有一定的应用前景。
北京市重点科技实验室项目(951890600)、北京市自然科学基金资助项目(7982006)
参考文献
1，李斌,李林,李宗信,等. 补肾健脑1号合剂对小鼠学习记忆及抗疲劳能力的影响. 中国中药杂志,1999,24(2):10
, 百拇医药
2，刘汇波,李林,李斌,等. 正交t值法在中药方剂961的主药分析中的应用. 中国临床药理与治疗学杂志,1998,3(2):89
3，Fonnum F. A rapid radiochemical method for the determination of choline acetyltransferase. J Neurochem, 1975,24:407
4，颜传珍. 神经衰老研究方法. 见：陈勤主编. 抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社,1996.111～113
5，李林. 老年痴呆治疗药物研究进展. 见：盛树力主编. 老年性痴呆：从分子生物学到临床诊治. 北京：科学文献出版社，1998. 93～125
收稿日期：1999-10-22, http://www.100md.com
单位：李海玲 李林 李斌 叶翠飞 李宗信 何士大(首都医科大学宣武医院；北京市脑老化重点实验室)；左萍萍(中国医学科学院基础医学研究所)
关键词：中药复方962；老龄大鼠；胆碱乙酰转移酶；乙酰胆碱酯酶
首都医科大学学报000303 提要：为研究中药复方962胶囊对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响，将22月龄和24月龄Wistar大鼠分为青年对照组、老年模型组、阳性对照脑复康组(0.56 g/kg)、962中剂量组(0.9 g/kg)和962大剂量组(1.8 g/kg)5组，分别灌胃给药1～2个月后处死大鼠。用Fonnun法和羟胺比色法分别测定5组大鼠皮质的ChAT和AchE的活性。结果：中药复方962大剂量(1.8 g/kg)对老龄大鼠皮质ChAT活性有提高作用(P<0.05)，但对AchE无显著影响。提示：中药复方962可能通过影响老龄大鼠中枢胆碱能神经系统而改善其衰老的变化。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5； R592
Effects of Traditional Chinese Compound
962 on Choline Acetyltransferase
and Acetylcholinesterase in
Cerebral Cortex of Aged Rats
Li Hailing，Li Lin，Li Bin，Ye Cuifei，Li Zongxin，He Shida
(Beijing Key Laboratory for Brain Aging, Xuanwu Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences)
, 百拇医药
Zuo Pingping
(Chinese Academy of Medical Sciences)
Abstract: In order to determine the effect of the compound 962 capsule on the choline acetyltransferase and acetylcholinesterase in cerebral cortex of aged rats, and to probe the anti-agedness mechanism from the view of choline energy nerve. Male and female aged rats( 22-month old and 24-month old) were classified into five groupsyoung control group, old model group, piracetem group (0.56 g/kg), 962 middle dose group (0.9 g/kg) and 962 high dose group (1.8 g/kg). All test drug was administrated for 1～2 months by ig. The choline acetyltransferase and acetylcholinesterase activity were measured by Fonnun and hydroxylamine colorimetry method. Results: Compound 962 improved the activity of choline acetyltransferase (P<0.05), but it had little effect on the acetylcholinesterase in cerebral cortex of aged rats. This indicated that by affecting the central nervous system in aged rats, compound 962 capsule could improve the aging process.
, 百拇医药
Key words: traditional Chinese compound 962; aged rat; choline acetyltransferase； acetylcholinesterase
老年性痴呆是导致老年人残疾的最严重的疾病之一。随着人口的老龄化，老年性痴呆的发病人数不断增加，将给家庭和社会带来沉重的负担。因此，研究预防和治疗老年性痴呆的有效药物是一个紧迫的课题。在总结我院防治老年性痴呆经验的基础上，结合现代药理研究成果，我们研制成中药复方制剂“962”[1，2]，并于1999年2～9月，观察了该药对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响，并与阳性对照药脑复康进行了比较。
1 材料和方法
1.1 动物
Wistar 大鼠，老龄雄性大鼠为24月龄，体质量450～660 g；青年雄性大鼠为5月龄，体质量310～390 g；老龄雌性大鼠为22月龄，体质量235～390 g；青年雌性大鼠为5月龄，体质量229～366 g。以上所有实验动物均由卫生部药品生物制品检定所提供。
, 百拇医药
1.2 药品
中药复方962胶囊，含何首乌、石菖蒲等6味中药(具体成分保密)，由北京第四制药厂提供，批号：980515，每克干粉含生药8.16 g。实验时采用水溶解，中剂量每毫升含干粉0.09 g，大剂量每毫升含干粉0.18 g。灌胃量按10 mL/kg。脑复康(piracetam)由北京市曙光制药厂提供，批号：970618，实验时用水溶解配成0.056 g/ mL。
1.3 方法
分为青年对照组、老年模型组、阳性对照脑复康组(0.56 g/kg)、962中剂量组(0.9 g/kg)和962大剂量组(1.8 g/kg)5组。每日灌胃给药1次，雄性大鼠连续灌胃1个月、雌性大鼠连续灌胃2个月后处死，立即取出全脑，分离大脑皮质，制成匀浆。
ChAT活性测定采用Fonnun法[3] ，AchE活性测定采用羟胺比色法[4]。
, 百拇医药
1.4 统计学方法
实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS软件进行统计学处理，用方差分析法和最小显著差法(LSD)进行两两比较。
2 结果
2.1 中药复方962对老龄大鼠皮质ChAT活性的影响
老年模型组较青年对照组ChAT活力有下降趋势。中药复方962可以提高老龄雄性、老龄雌性大鼠皮质ChAT的活力，其中962大剂量组对雌性大鼠ChAT活力的提高有显著意义(P<0.05)；且老龄雄性大鼠皮质ChAT活力略高于老龄雌性大鼠(表1)。
2.2 962对老龄大鼠皮质AchE活性的影响
由表2可见，中药复方962对老龄雄性、老龄雌性大鼠皮质AchE的活性无明显的影响。同样，老龄雄性大鼠皮质AchE的活力略高于老龄雌性大鼠。
, 百拇医药
表1 962胶囊对老龄大鼠皮质ChAT活性的影响 组别
雄性
雌性
n
ChAT活性/(fmol.s-1)
n
ChAT活性/(fmol*s-1)
青年对照组
10
14.29±3.50*
9
, 百拇医药
10.34±1.22
老年模型组
7
11.34±2.34
5
9.45±1.95
脑复康组
9
13.18±1.39
6
9.29±1.11
962中剂量组
, 百拇医药 7
12.57±3.22
5
10.12±1.45
962大剂量组
8
13.51±1.33
7
11.06±0.89*
*与老年模型组比较P<0.05 表2 962胶囊对老龄大鼠皮质AchE活性的影响 组别
雄性
雌性
, 百拇医药
n
AchE活性/(pmol.s-1)
n
AchE活性/(pmol*s-1)
青年对照组
10
296.11±73.33
9
228.34±71.11
老年模型组
7
, http://www.100md.com 261.11±79.45
5
201.11±97.78
脑复康组
9
281.67±76.11
6
225.00±42.22
962中剂量组
7
279.45±87.78
5
, 百拇医药 211.67±98.13
962大剂量组
8
298.34±91.67
7
237.78±68.89
3 讨论
乙酰胆碱(Ach)是中枢胆碱能神经系统重要的神经递质，它由胆碱乙酰转移酶(ChAT)催化合成，由乙酰胆碱酯酶(AchE)催化分解，通过Ach受体发挥生物学效应，ChAT 和AchE共同维持着Ach的动态平衡。老年性痴呆(Alzheimer病)是以进行性痴呆为主要临床表现的大脑变性性疾病。虽然AD中有多种神经递质的不足，但以胆碱能的不足与病变最为相关。
, 百拇医药
目前，治疗AD的方法之一是应用胆碱酯酶抑制剂，但由于其不良反应大,长期用药疗效不佳,使其应用受到限制。而中药往往有多方面的作用[5]。
我们以补肾益气、开窍化瘀为治则组成中药复方962胶囊，观察了中药复方962对老龄雌性、老龄雄性大鼠ChAT和AchE的影响。实验表明：中药复方962大剂量(1.8 g/kg)对雌性老龄大鼠皮质ChAT活性有显著提高作用(P<0.05)，但对AchE无明显影响。以往的研究表明该药有改善老龄大鼠的学习记忆功能，因此该药可能通过提高ChAT活性而改善学习记忆功能，从而对治疗老年性痴呆具有一定的应用前景。
北京市重点科技实验室项目(951890600)、北京市自然科学基金资助项目(7982006)
参考文献
1，李斌,李林,李宗信,等. 补肾健脑1号合剂对小鼠学习记忆及抗疲劳能力的影响. 中国中药杂志,1999,24(2):10
, 百拇医药
2，刘汇波,李林,李斌,等. 正交t值法在中药方剂961的主药分析中的应用. 中国临床药理与治疗学杂志,1998,3(2):89
3，Fonnum F. A rapid radiochemical method for the determination of choline acetyltransferase. J Neurochem, 1975,24:407
4，颜传珍. 神经衰老研究方法. 见：陈勤主编. 抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社,1996.111～113
5，李林. 老年痴呆治疗药物研究进展. 见：盛树力主编. 老年性痴呆：从分子生物学到临床诊治. 北京：科学文献出版社，1998. 93～125
收稿日期：1999-10-22, http://www.100md.com