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编号:10281792
复方咳喘停治疗蛔虫变应原致喘豚鼠后血液流变性的动态变化
http://www.100md.com 《微循环学杂志》 2000年第1期
     作者:林雪怡 刘志刚 卢瑜 方勇 林忠清 刘玉琳

    单位:林雪怡(中国人民解放军解放军福州医学高等专科学校病理教研室, 邮政编码 福 州350003);刘志刚(江西医学院变态反应学研究室);卢瑜(中国人民解放军解放军福州医学高等专科学校病理教研室, 邮政编码 福 州350003);方勇(江西医学院变态反应学研究室);林忠清(中国人民解放军解放军福州医学高等专科学校病理教研室, 邮政编码 福 州350003);刘玉琳(江西医学院变态反应学研究室)

    关键词:蛔虫;变应原;哮喘;动物模型;中药;治疗;血液流变学

    微循环学杂志000112 目的: 观察蛔虫变应原致喘豚鼠后及平喘中药治疗后血液流变性的动态变化。 方法: 把豚鼠分为阴性对照、 阳性激发和复方咳喘停中药治疗组。 用蛔虫变应原诱发哮喘后, 观察各组血液流变性的动态变化。 结果: 阳性激发组的血浆粘度、 红细胞聚集指数及高切还原粘度增高, 显著高于阴性组(P<0.01); 中药组上述指标显著低于阳性激发组(P<0.01), 与阴性组相比无显著性差异(P>0.05)。 各组红细胞压积均无明显变化。 结论: 蛔虫变应原致喘豚鼠后, 血液出现高粘滞状态; 咳喘停能有效改善局部微循环、 恢复流态。
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    Dynamic Changes of Hemorheology on Asthma Model of Guinea Pigs Immunized and Challenged with Ascaris Allergen after Cured with Compound Kechuanting

    Lin Xueyi, Liu Zhigang, Lu Yu

    (Fuzhou Medical Higher Training School of Chinese PLA, Fuzhou 350003)

    Objective: The dynamic changes of hemorheology at different times of the asthma model of the guinea pigs immunized and challenged with Ascaris allergen after cured with compound herb Kechuanting were observed. Method: Guinea pigs were divided into three groups, negative control group, positive group and cured group. After guinea pigs were challenged with Ascaris allergen, the dynamic changes of hemorreology after challenge were examined. Results: In positive challenge group, the viscosity of blood plasma, congregate index of red cell and highness shear revivification viscosity of blood increased significantly, compared with those in negative control group(P<0.01). But in cured group, these three indexes decreased markedly compared with positive control group(P<0.01. But these were no differences in hematocrit in three groups. Conclusion: These results suggested that high conglutination could be induced in asthma model after challenged by Ascaris allergen. And compound Kechuanting could effetely ameliorate the situation of local tiny circulation, get right of stream of blood.
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    Key words:Ascaris; Allergen; Asthma; Animal model; Chinese traditional medicine; Cure

    外源性哮喘是临床上的常见病和多发病, 在儿童中上升尤其迅速, 我国儿童哮喘发病率约1% ~3%左右, 而其中大部分为外源性哮喘(过敏性哮喘)。 在众多的变应原(过敏原)之中, 蛔虫是一种重要的变应原[1]。 蛔虫变应原能刺激IgE生成并能在已致敏的豚鼠体 内诱发介质释放引起变态反应(过敏反应)。

    随着临床血液流变学的发展, 国内学者在研究肺癌、 肺心病、 肺结核时都发现有血液流 变性方面的改变[2]。 另一方面祖国传统中医认为哮喘发病主要由于宿痰伏肺, 遇感引触, 痰气搏结, 壅塞气道所致[3]。 中医治疗哮喘的历史源远流长, 其 效果好, 副作用少, 日益受到人们的关注, 因而从血液流变学角度入手将有助于探讨中 药防喘治喘治疗的机理。 为此, 我们对国内外未见的有关蛔虫变应原致喘豚鼠的血液流变 性变化以及复方中药咳喘停的疗效进行了研究。
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    1 材料与方法

    1.1蛔虫变应原的收集与制备

    1.1.1 收集: 在江西省农村小学, 选用抗虫灵(双羟萘酸噻嘧啶, 30 mg /kg, 顿服)驱虫。 收集人新鲜蛔虫后, 用生理盐水清洗数次, 保存在培养液中。

    1.1.2 人蛔虫全虫抗原的制备: 人全虫(雌雄各半)剪碎后, 用pH 7.4 的PBS缓冲液在组织匀浆器中冰浴条件下分别匀浆, 尔后用振幅为20 m超声处理5 min, 反复3次, 每次间歇5 min(Soniprep: 150 SE, 超声粉碎仪)。 然后在4 ℃条件下, 15 000 r/min离心30 min, 弃去上层脂质, 上清液即为人蛔虫全虫抗原。

    1.1.3 人蛔虫全虫抗原蛋白质含量的测定: 用紫外吸收法测定抗原中的蛋 白质含量, 并将蛔虫抗原调整至8 mg/ml。 -20 ℃低温冰箱中保存备用。
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    1.2 动物分组与免疫接种

    1.2.1 实验动物与分组: 选用健康短毛豚鼠45只(由中山医科大学实验动 物部提供), 3~4个月, 体重350~450 g, 雌雄兼用。 45只豚鼠在用人蛔虫变应原免疫 接种后, 随机分为三组: 生理盐水对照组(A组, n=15)、 人蛔虫变应原阳性激发组( B组, n=15)和中药治疗组(C组, n=15)。

    1.2.2 免疫接种: 按常规方法制备佛氏完全佐剂(FCA)和不完全佐剂(FIA) , 置4 ℃保存。 人工免疫接种前, 按每只豚鼠用8 mg/ml人蛔虫全虫抗原0.75 ml与 等量佐剂充分混匀成油包水乳剂。 第一次接种采用佛氏完全佐剂加变应原, 于四肢(腋下 、 腹股沟)多点皮内注射和腹腔内注射, 共计1.5 ml。 二周后改为佛氏不完全佐剂, 以同样方式每周一次, 连续免疫接种2次[4]。 而生理盐水对照组免疫接种过程 同上, 但没有加入蛔虫变应原, 只用生理盐水代替蛔虫变应原进行免疫接种。
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    1.2.3 中药制成及治疗: 牡荆子50 g, 桔梗50 g, 陈皮30 g, 甘草20 g, 黄芩20 g, 杏仁30 g。 中药共煎煮二次, 每次在煮沸后用小火再煮1 h, 中药原液 共约800 ml; 经高压灭菌后, 加入猪脾转移因子约200 ml, 在无菌室中分装。

    中药治疗组治疗方案: 在哮喘激发前对中药治疗组的豚鼠通过口服法给药, 每次约5 ml, 2次/日, 连续给药5天; 而阳性激发组则每天通过口服法给生理盐水5 ml, 2次/日。

    1.2.4 雾化激发: 豚鼠免疫接种后第4周进行抗原特异性激发。 使用WH- 96超声雾化器(广东汕头市华医疗器械厂)及雾化装置(自制)。 用0.25%蛔虫变应原, 对A、 B、 C三组豚鼠进行雾化吸入约10 min。

    1.3 血液流变学的检测

    激发后, 对阴性对照组、 阳性激发组和中药治疗组的各个时段, 即1 h、 24 h和72 h组 , 各取5只豚鼠用2%戊巴比妥钠按40 mg/kg(体重)的标准腹腔麻醉。 心脏穿刺抽出血液4 m l, 经肝素抗凝后, 应用LG-R-20型血液粘度测试仪(北京世帝科学仪器公司生产), 参 照文献介绍的血液流变学检测方法[5], 共测定4项指标: 即血浆粘度、 红细胞 聚集指数、 红细胞压积、 高切还原粘度。
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    1.4 数据统计

    采用EPI5统计软件进行数据统计, 组间采用t检验。 2 结 果

    2.1血浆粘度的变化

    表 1 蛔虫变应原致喘豚鼠后血浆粘 度的

    动态变化(n均=5, mPa*s, ±s) 分 组

    时 相

    1 h

    24 h

    72 h

    阴性对照组
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    4.52±0.19

    4.68±0.20

    4.52±0.19

    中药治疗组

    5.24±0.151)3)

    4.85±0.212)3)4)

    4.67±0. 082)4)

    阳性激发组

    6.62±0.281)

    5.14±0.111)4)
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    4.86±0.23 2)4)

    注: 与阴性对照组比较: 1) P<0.05, 2) P<0.05 ; 3) 与阳性激发组比较: P<0.01; 4) 与自身1 h时相 比较: P<0.01

    表1显示1 h激发阳性组和中药治疗组的血浆粘度升高, 显著高于阴性对照组(P<0.01 ), 而中药治疗组则显著低于阳性激发组(P<0.01); 至24 h, 阳性和治疗组血浆粘度 均较1 h时的值显著降低(P均<0.01), 但与阴性对照组相比, 仍呈明显升高趋势( P<0.01~0.05); 至72 h, 阳性组和治疗组的血浆粘度趋于正常, 但与阴性 组相比仍有差异(P<0.05)。

    2.2 红细胞聚集指数的变化

, 百拇医药     表 2 蛔虫变应原致喘豚鼠后红细胞 聚集指数的

    动态变化(n均=5, ±s) 分 组

    时 相

    1 h

    24 h

    72 h

    阴性对照组

    4.30±0.16

    4.34±0.11

    4.28±0.17

    中药治疗组
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    4.66±0.111)2)

    4.44±0.102)

    4.43±0.17 2)

    阳性激发组

    4.92±0.141)

    4.80±0.151)

    4.61±0.081)

    注: 1) 与阴性对照组比较: P<0.01; 2) 与阳性对照组 比较: P<0.01

    表2显示, 在激发后1 h, 阳性激发组与中药治疗组的红细胞聚集指数均显著高于阴性对照 组(P均<0.01); 与此同时, 中药治疗组的红细胞聚集指数又低于阳性激发组(P <0.01)。 在激发后24 h, 阳性激发组的数值仍显著高于阴性对照组; 而中药治疗 组数值虽高于阴性对照组, 但无显著性意义; 激发后72 h, 阳性激发组的数值均高于阴 性对照组和中药治疗组(P均<0.01), 而中药治疗组和阴性对照组之间无显著性差 异(P>0.05)。
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    2.3 红细胞压积的变化

    表 3 蛔虫变应原致喘豚鼠后红细胞 压积的

    动态变化(n均=5, %, ±s) 分 组

    时 相

    1 h

    24 h

    72 h

    阴性对照组

    42.4±2.5

    43.3±4.0

    42.4±3.6
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    中药治疗组

    43.3±2.7

    42.4±3.1

    43.6±2.7

    阳性激发组

    44.4±3.2

    45.0±2.8

    43.1±3.4

    由表3可以看出, 各组实验动物在不同的时间段内, 其红细胞压积无明显变化, 各组数值 之间无显著性差异。

    2.4 高切还原粘度的变化表 4 蛔虫变应原致喘豚鼠全血高切 (200 s-1)还原粘度
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    动态变化(n 均=5, ±s) 分 组

    时 相

    1 h

    24 h

    72 h

    阴性对照组

    7.42±0.38

    7.30±0.41

    7.44±0.30

    中药治疗组

    8.40±0.111)2)
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    7.90±0.392)

    7.48±0.35 2)

    阳性激发组

    9.84±0.591)

    9.02±0.501)3)

    8.78±0.41 1)3)

    注: 1) 与阴性对照组比较: P<0.01; 2) 与阳性对照组 比较: P<0.01; 3) 与自身1 h时相比较: P<0.05

    由表4可以看出, 全血高切还原粘度也出现了异常。 在激发后1 h, 与阴性对照组相比, 阳性激发组和中药治疗组的粘度指数明显升高(P<0.01); 且二者间也有显著性差 异(P<0.01)。 在24、 72 h组, 阳性激发组的值仍明显高于阴性对照组(P< 0.01), 而中药治疗组与阴性对照组相比, 已无显著性差异(P>0.05)。 而阳性 激发组24 h、 72 h的值较1 h有所下降(P<0.05)。
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    3 讨 论

    正常人体内的血液粘度是一种动态平衡、 相对稳定的状态, 其变化受多种因素的影响和制 约。 本实验研究证实, 用蛔虫变应原致喘豚鼠后, 其血液流变性出现异常, 动物的血浆 粘度、 红细胞聚集指数、 全血高切还原粘度显著性增高, 尤其是在激发后1 h升高最为明 显。 结果表明, 蛔虫变应原致喘豚鼠在哮喘早期存在着高粘倾向。

    根据中医“久病入络”、 “久病必有瘀”之理论, 可以视瘀血亦为哮喘发病的一个重要中 间环节[6], 因此在治疗上采用活血化瘀、 减轻炎症至关重要。 在病变过程 中, 宿痰伏肺不仅影响肺气的宣降, 痰阻气机, 还可影响肺的血液运行, 以致血行瘀滞 肺络。 瘀血既是哮喘发作的病理因素, 又是再次发作持续不解的症结所在, 这必然会影 响到其血液流变状态。 本实验从理论上为哮喘的诊断提供了新的理论依据, 即哮喘发作早 期存在血液流变性异常。

, http://www.100md.com     本研究所采用的中药, 如黄芩中有效成分黄芩甙, 可通过抑制过敏介质(白三烯、 组胺) 的释放和过敏性炎症中的血管通透性增加, 而发挥其抗炎、 抗变态反应的作用[7] 。 甘草中含有Lx成分, 对Swiss鼠过敏性休克有保护效应, 能降低哮喘体内IgE水平, 拮抗LTD4[8]; 而转移因子能有效增强免疫力。 其它几味中药也共同发挥抗过敏 作用。 总之, 咳喘停可改善炎症病灶、 减轻局部瘀血, 有利于哮喘的治疗。

    对一些哮喘患者的急性期及缓解期采用中西医结合治疗, 将现代医学的各种治疗性用药和 中药的治本措施有机地结合起来, 可以取得比单用西药或中药更好的疗效[9]。 但这仍迫切需要开展对治疗哮喘中药有效成分的提取并进行进一步的药理学研究[10]

    江西省自然科学基金(974024)和卫生部优秀中青年人才基金共同资助项目
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    本文作者简介:林雪怡(1941~), 女, 汉族, 教授

    参考文献

    1,赵慰先主编. 人体寄生虫学. 第三版. 北京: 人民卫生出版社, 1993. 127.

    2,韩福才, 康金秀, 阎建文, 等. 肺癌病人的血液流变学变化. 肿癌研究与临 床, 1994, 6(2):81~83.

    3,李志刚, 吴世善, 王云峰, 等. 肺结核患者血液流变学指标临床分析. 中华 结核和呼吸杂志, 1994, 17(5):290.

    4,Hideya I. Brochoalveoiar lavage and histologic characterization of lat e asthmatic response in guinea pigs. Am Rev Respir Dis, 1987, 136:922.
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    5,翁维良, 吴云鹏. 血液流变学研究方法及其应用. 北京: 科学技术出版社, 1 989. 208.

    6,李明华, 解泽玲. 支气管哮喘的新概述与中西医结合的思路. 中国中西医结合 杂志, 1991, 11(1):620~621.

    7,王淑静. 近十年中药抗过敏反应研究概况(综述). 中国中医药科技, 1997, 4( 6):387~388.

    8,李明华. 支气管哮喘的现代免疫学和中药免疫药理学研究进展. 中国中西医结合 杂志, 1997, 17(4):199~200.

    9,许建中. 支气管哮喘中西医结合研究进展(综述). 中国中西医结合杂志, 1997 , 17(4):197~198.

    10,许德金, 王琦, 许爱兰, 等. 治喘合剂治疗支气管哮喘的临床和实验研究. 江苏中医, 1995, 16(5):44~45.

    本文1999-07-30收到, 2000-01-09接受, http://www.100md.com