κ阿片受体介导100 Hz电针对吗啡戒断大鼠心动过速的缓解作用
作者：喻允国 崔彩莲 于吉人 韩济生
单位：北京医科大学神经科学研究所；崔彩莲：组织学与胚胎学系；于吉人：生理学系，北京 100083
关键词：电针；受体，阿片样；κ；物质禁断综合征；康复；吗啡；副作用；心动过率；治疗
北京医科大学学报990101 摘 要 目的:研究100 Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的受体机制。方法:在吗啡戒断18～24 h的大鼠模型上，腹腔注射阿片受体拮抗剂纳络酮(naloxone, NX)或侧脑室注射κ阿片受体拮抗剂nor-binaltorphimine (nor-BNI)，给予100 Hz电针刺激，记录吗啡戒断大鼠清醒状态下的心率和血压。结果：100 Hz电针的作用可被腹腔注射NX 1 mg.kg-1完全翻转、被侧脑室注射Nor-BNI 12 nmol完全阻断。结论：100 Hz电针抑制吗啡戒断大鼠心动过速的作用主要是通过中枢κ阿片受体介导的。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R245.1
100 Hz electroacupuncture amelioration of tachycardia of morphine withdrawal rats mediated by κ-opioid receptor in central nervous system
YU Yun-Guo＃， CUI Cai-Lian， YU Ji-Ren， HAN Ji-Sheng
(＃Neuroscience Research Institute, Beijing Medical University, Beijing 100083)
MeSH Electroacupuncture Receptors, opioid, kappa Substance withdrawal syndrome/rehabil
, 百拇医药
Morphine/adv eff Tachycardia/ther
ABSTRACT Objective: To study the receptor mechanism of 100 Hz electroacupuncture (EA) amelioration of tachycardia of morphine withdrawal rats. Methods: Morphine dependence was induced in Wistar rats using 8-day-morphine-injection regime. Heart rate and blood pressure of the rats were recorded after 18-24 h of morphine abstinence, and 100 Hz EA stimulation was then given. Results: Tachycardia of the rats was ameliorated by 100 Hz EA, those effect was reversed by injecting opioid-receptor antagonist naloxone (i.p. at 1 mg.kg-1), or by administrating selective κ-opioid receptor antagonist nor-BNI (intracerebro-ventricular injection i.c.v. at 12 nmol). Conclusion:The effect of 100 EA in ameliorating tachycardia during morphine abstinence was mediated by κ-opioid receptors in CNS.
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(J Beijing Med Univ, 1999,31：1-4)
本研究所以往的实验证实100 Hz的电针(electroacupuncture, EA)或者经皮电刺激(transcutaneous electrical nerve stimulation, TENS)产生镇痛作用主要是通过促进动物和人脊髓释放强啡肽(dynorphin, Dyn)而实现的[1，2]。其后又将100 Hz电针用于治疗动物和人的吗啡戒断症状均取得了显著疗效[3，4]。在临床观察中发现，阿片成瘾者在戒断综合征发作时，心动过速是最容易进行客观记录的指标之一。给这些患者施以100 Hz电针治疗时，戒断症状被抑制，而心动过速的缓解尤为明显，在初次治疗时就可见心率迅速而平稳地恢复至接近正常水平[5]。本实验采用无创性心率/血压记录仪，观察清醒大鼠心率/血压，发现吗啡戒断大鼠也出现明显的心动过速。100 Hz电针刺激可使心动过速明显缓解。在该模型上，我们观察阿片受体拮抗剂纳络酮(naloxone， NX)和高选择性κ阿片受体拮抗剂nor-binaltorphine(nor-BNI)对100 Hz电针作用的影响,以期阐明100 Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的受体机制。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 吗啡依赖大鼠模型
雄性Wistar大鼠，体重230～280 g，每两只饲养在一笼中，给自然照明，自由摄入水和饲料。皮下注射(subcutaneous，s.c.)逐日递增量盐酸吗啡溶液。递增法：在第1天至第8天吗啡的每次注射剂量分别为5、10、20、40、50、60、70、80 mg*kg-1，每日3次，分别在7 am、3 pm、11 pm注射。第8天7 am、3 pm各注射一次吗啡后停止给药。在最后一次注药后18～24 h进行下列实验。
1.2 实验仪器
无创性心率/血压记录仪(IITC，USA，型号-69A)，示波器(Techtronix, USA，型号：5A18N)，韩氏(HANS)恒流电针仪(Healthronix, Singapore, 型号：LH257)，大鼠立体定位仪(Narishige, Japan, 型号：SN-2)，恒温控制仪(上海)。
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1.3 侧脑室插管
大鼠在水合氯醛(350 mg*kg-1)腹腔注射(intraperitoneal, i.p.)麻醉下，按照Paxinos & Watson大鼠脑立体定位图谱要求，在AP-0.8, L+1.5, V+3.6 mm部位钻孔。将预先制作好的不锈钢套管(直径0.8 mm)垂直插入，用牙托粉固定，套管内插入内套管(即注射管，直径0.5 mm)后加盖密封管口。术后肌肉注射氯霉素预防感染。
1.4 心率、血压测定方法
将吗啡戒断18～24 h内的动物小心轻柔地固定在特制的固定器内，剪去大鼠尾根部的毛(接受电针的大鼠用体积分数为75%的酒精擦洗消毒)，在双侧后肢足三里(St36，胫骨前结节外侧5mm)和三阴交(Sp6，胫骨后内踝上部3mm)分别插入不锈钢针灸针，将动物放置于自动温控的恒温装置内，温度控制在(28±1) ℃。将鼠尾穿过心率检测仪的光敏转换器,通过该转换器将动脉搏动的压力信号转变为电信号，并输入到放大器中。保持安静20 min后，打开记录仪，走纸速度设定为5 mm.s-1，每10 min记录1次，每次记录持续1 min，以每分心搏次数表示心率；以舒张压+1/3×脉压差为平均动脉压(kPa, 10 kPa=75 mmHg)。电针时接通HANS仪，用示波器监测电流的输出，刺激信号为方波，波宽为0.3 ms，频率100 Hz，强度为1mA，刺激持续时间为30 min，在测定心率和血压时暂停电针刺激。电刺激后继续观察30min。接受电针或注射药物的大鼠，均测定心率和血压9次。以给药或电针前3次测定的平均值作为基础心率/血压；给药后测定6次，于电针中和电针后分别测定3次，以每3次测定的平均值作为该30min的心率/血压值。在检测期间尽量避免刺激动物，保持环境安静。
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1.5 注射药物
测定基础心率、血压后，腹腔注射NX，剂量分别为1、5、10 mg.kg-1，按照上述方法记录心率和血压。侧脑室注射nor-BNI：用微量进样器从预先放置的内管注入，注射管的头端超出套管头端1mm。注射体积为10μl，之后按照上述方法记录心率和血压。实验结束后在套管内注射体积分数为10%的苯胺黑10μl，立即断头处死动物，体积分数为10%福尔马林固定鼠脑组织，切片，观察插管部位，如果插管偏离侧脑室部位，该动物不在数据统计之列。
1.6 实验数据处理
数据以
±s表示。统计学分析采用ANOVA，继之以Newman-Keul test检验组间差异。
, 百拇医药 2 结果
2.1 NX对吗啡戒断大鼠心率的影响(表1)
表1 NX对吗啡戒断大鼠心率和血压的影响(±s)
Table 1 Effect of NX on the heart rate and mean blood pressure of
morphine withdrawal rats (±s) Group
n
Before
, 百拇医药
injection
0～30 min
31～60 min
f/min-1
Normal rats+NS
7
383±5
375±7
366±8
MW+NS
8
453±8
, 百拇医药
430±8
420±11
MW+NX 1 mg.kg-1
8
462±4
439±7
426±12
MW+NX 5 mg.kg-1
8
455±6
453±8*
, 百拇医药
445±11*
MW+NX 10 mg.kg-1
8
452±5
462±7*
455±11*
p/mmHg
Normal rats+NS
7
119±4
118±7
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117±6
MW+NS
8
116±4
115±6
117±6
MW+NX 1 mg.kg-1
8
116±4
119±5
121±6
MW+NX 5 mg.kg-1
, 百拇医药
8
122±5
121±7
122±6
MW+NX 10 mg.kg-1
8
123±4
119±6
118±5
NS， normal saline; normal rats + NS, rats receiving s.c. NS injection and i.p. NS 1 ml.kg-1; MW+NS, morphine withdrawal rats receiving i.p. injection NS 1 ml.kg-1; MW+NX, morphine withdrawal rats receiving injection of naloxone i.p at 1, 5, 10 mg.kg-1. *P<0.05, compared with MW+NS group in the same period, using ANOVA followed by Newman-Keul test; f,heart rate; p,blood pressure.
, 百拇医药
对照组正常大鼠，在整个实验过程中，心率波动在366～383min-1的范围内，平均为375min-1，在注射后60min的观察期内心率降低了4.4%。4个吗啡戒断组电针前的心率在452～462 min-1的范围，总平均455min-1，较盐水对照组心率，平均383min-1)增高19%(P<0.01)。血压无显著变化。
可见给吗啡戒断大鼠注射NX 1 mg.kg-1并不能进一步加强心动过速，接受5mg.kg-1 NX注射后，大鼠心率较NS对照组提高5.3%～6.0%；将NX剂量进一步增大到10 mg*kg-1，也不能使大鼠心率显著提高(与5mg.kg-1组比较P>0.05)。
2.2 NX对100 Hz电针作用的影响(表2)
, 百拇医药
表2 NX对接受100 Hz电针的吗啡戒断大鼠心率的影响(±s)
Table 2 Effect of NX on heart rate in morphine withdrawal rats
receiving 100 Hz EA stimulation(±s) Group
n
f/min-1
Before EA
During EA
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After EA
Normal rats
7
384±5
375± 7
365± 8
MW+NS+needle
6
455±5
412± 9
381± 5
MW+NS+EA
, http://www.100md.com
6
455±5
380± 6＃
384± 5
MW+NX 1 mg.kg-1+EA
6
453±8
430±13*
420±11*
MW+NX 5 mg.kg-1+EA
, 百拇医药
6
463±4
440± 7*
417±11*
Annotation is same as in table 1. Needle: inserting needle into acupoint without electrical stimulation. ＃P<0.05， compared with MW+NS+needle group; *P<0.05， compared with MW+NS+EA group in the same period; f,heart rate.
吗啡戒断大鼠心率较对照组升高18%～21%，心动过速的情况与表1所列结果极为相似，表示实验结果有较好的重复性；插针而不通电组，似乎也能使心动过速的程度有所缓解，但无统计学显著性，100Hz电针30min，使戒断大鼠的心动过速完全消失；电针对吗啡戒断大鼠心动过速的治疗作用可以被1mg.kg-1 NX完全翻转，有显著的统计学意义(P<0.05)；增加NX剂量到5mg.kg-1，结果与1mg.kg-1组相似；上述各项措施下，吗啡戒断大鼠血压相对平稳，变化幅度在-3%～3%之间，无统计学显著性(结果未列出)。
, 百拇医药
2.3 nor-BNI对100 Hz电针作用的影响
100 Hz电针对吗啡戒断大鼠的心动过速的缓解作用能被NX阻断，表明阿片受体起作用。为检验κ阿片受体参与的可靠性，我们用特异性κ阿片受体拮抗剂nor-BNI进行实验。将动物随机分为6组，在动物开始注射吗啡之前，在侧脑室埋置不锈钢管。待动物苏醒并恢复正常后注射吗啡使之产生依赖，继之产生戒断症状。实验时先测定大鼠的基础心率/血压，然后用微量注射器经注射管向脑室内分别推注nor-BNI溶液3、12、48nmol或10μl生理盐水，继之以100 Hz电针30 min。结果见表3。
表3 Nor-BNI对接受100 Hz电针的
吗啡戒断大鼠心率的影响(±s)
, http://www.100md.com Table 3 Effect of nor-BNI on heart rate in morphine withdrawal rats
receiving 100 Hz EA stimulation (±s) Group
n
f/min-1
Before EA
During EA
After EA
MW+NS+needle
, 百拇医药
8
419±10
414±10
408±14
MW+NB 12 nmol+needle
6
412±10
418±14
422±14
MW+NS+EA
8
423± 9
, 百拇医药
368± 8
358±13
MW+NB 3nmol+EA
8
421± 4
376± 8＃
374± 7＃
MW+NB 12nmol+EA
6
411±10
402±13*
, 百拇医药
382±14*
MW+NB 48nmol+EA
6
411± 5
409±8*
402± 6*
Annotation is same as in table 1. NB， nor-BNI. #P<0.05, compared with MW+NS+needle group; *P<0.05, compared with MW+NS+EA group in the same period; f,heart rate.
吗啡戒断大鼠的6个组在电针前心率都在411min-1以上，各组之间波动保持在-2%～+1%之间，表示实验的重复性很好；nor-BNI 12nmol并不能使心率进一步加快，表明这一剂量的κ拮抗剂不能诱使戒断症状加重；100Hz电针30 min使心动过速完全消失，心率恢复到正常对照水平；电针的作用不能被小剂量(3nmol)的nor-BNI阻断，但可被12nmol nor-BNI阻断(P<0.05)；加大nor-BNI剂量到48nmol则不仅可完全阻断电针的即时效应，也可以完全阻断电针的后效应。经上述各项处理后，各组动物的血压无显著变化。
, 百拇医药
3 讨论
本研究表明，100 Hz电针可以抑制吗啡戒断大鼠的心动过速，而i.p.阿片受体拮抗剂NX或侧脑室注射(intracerebro-ventricular, i.c.v.)选择性κ阿片受体拮抗剂nor-BNI可翻转100Hz电针的作用。表明100 Hz电针对戒断症状的治疗作用主要是通过中枢κ阿片受体介导的。
实验设计中有一点值得注意，NX 1 mg.kg-1 s.c.可以翻转100Hz电针对吗啡戒断大鼠心动过速的治疗作用(表2)，是否可能由于NX加重了戒断症状，而不是因为它取消了电针的作用。对此问题的回答是否定的。因为单纯应用1mg.kg-1 NX并不能使心动过速加剧，必须用5mg.kg-1或10 mg.kg-1 NX才能有此效应(表1)。
, 百拇医药
同样12 nmol nor-BNI并不能使心动过速加剧，但可以翻转100 Hz电针对吗啡戒断大鼠心动过速的治疗作用(表3)，故100 Hz电针的降心率作用是通过κ阿片受体介导的。
100 Hz电针通过脑内κ受体翻转戒断症状之一的心动过速，与100 Hz电针选择性促进中枢强啡肽释放的事实一致[6]。Tulunay等[7]i.c.v. Dyn A-(1-13)可抑制NX催瘾的吗啡依赖大鼠的戒断症状。Green等[8]进一步证明强啡肽抑制吗啡戒断症状的作用部位主要是在脊髓。本工作i.c.v. κ阿片受体拮抗剂nor-BNI，可以翻转100 Hz电针对戒断症状的治疗作用。这有两个可能，一是i.c.v. 的药液可能有一部分进入脊髓，虽然这一可能性很小；二是脑内释放的强啡肽也可以抑制吗啡戒断症状的发生。已有实验表明，侧脑室多次注射Dyn A-(1-13)可显著抑制吗啡依赖大鼠的戒断症状[9]，与本结果一致。
, 百拇医药
文献中所指的阿片戒断症状，绝大多数是指湿狗样抖动、逃跑、打斗、咬牙、修饰等躯体行为，以及腹泻、流涎等植物性神经活动；Delle等[10，11]发现，清醒的吗啡戒断大鼠在NX催瘾后肾交感神经、心率及血压呈双相变化，小剂量NX时肾交感神经和心率升高，而血压未见显著变化，当NX剂量加大时肾交感神经活动和心率下降，而血压上升；但迄今未见在自然戒断时清醒的吗啡戒断大鼠的心率、血压等心血管活动指标变化的报道。吴鎏桢等[5]在观察韩氏穴位神经刺激仪(HANS)治疗海洛因成瘾者的戒断症状时发现，心率加快是戒断症状中一个极恒定的表现。当用HANS仪治疗时，在20min内心率由平均110min-1降至80～90min-1，其它戒断症状也相应减弱。这一现象在大鼠身上得到很好的重复。本工作进一步提示，这可能是100Hz电刺激促进了脑内内源性κ受体配基强啡肽释放所引起的结果。
关于中枢强啡肽对血压的调控，冯越和韩济生曾报道，给大鼠侧脑室或脊髓蛛网膜下腔注射选择性κ受体激动剂U50,488H可引起剂量相关的血压降低和心率减慢。其中血压降低可被大剂量NX(5，10mg.kg-1，s.c.)所阻断，1mg.kg-1 NX无效；而心率的降低仅用1mg.kg-1 NX即可完全翻转，提示U50488H的中枢降压作用通过κ受体，而降心率作用可能是通过一种迄今未知的对NX有较高亲和力的κ受体亚型介导。这一发现在本工作中得到验证。100Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的作用可被1mg.kg-1 NX完全翻转(表2)，而一般来说，1mg.kg-1 NX的剂量是不能完全阻断κ受体的功能的[12]。
, 百拇医药
必须指出，阿片戒断时出现如此明确的心动过速，而血压无显著变化，这是值得注意的。因为根据目前的认识，吗啡戒断时蓝斑放电增加，而电刺激蓝斑可以引起交感下行系统兴奋，引起血压升高，心率加快。因此，这一现象还需进一步的研究来阐明。
综上所述，100 Hz电针确能抑制吗啡戒断大鼠的心动过速。这一作用主要是通过脑内κ阿片受体所介导的。
* 国家自然科学基金(39570682)资助项目。
参考文献
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2 Han JS, Chen XH, Sun SL, et al. Effect of low and high frequency TENS on met-enkephlin-Arg-Phe and dynorphin A immmunoreac- tivity in human lumbar CSF. Pain, 1991,47:291-298
3 Han JS, Zhang RL. Suppression of morphine abstinence syndrome by body electroacupuncture of different frequencies in rats. Drug Alcohol depend, 1993,31:169-175
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5 吴鎏桢，崔彩莲，韩济生. 韩氏穴位刺激仪(HANS)治疗阿片戒断综合征的临床研究. 中国疼痛医学杂志, 1995,1:130-138
6 Han JS, Wang Q. Mobilization of specific neuropeptides by peripheral stimulation of identified frequencies. News Physiol Sci, 1992,7:176-169
7 Tulunay FC, Jen MF, Chang JK, et al. Possible regulatory role of dynorphin on morphine and endophin-dependent analgesia. J Pharmacol Exp Ther, 1981, 219:296-298
8 Green PG, Lee NM. Dynorphin A-(1-13) attenuates withdrawal in morphine-dependent rats: effect of route administration. Eur J Pharmacol, 1988, 145:267-272
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9 Hooke LP, He L, Lee NM. Dynorphin A modulates acute and chronic opioid effect. J Pharmacol Exp Ther, 1995,273:292-297
10 Delle M, Ricksten SE, Thoren P. Renal sympathetic nerve activity during morphine abstinence in sino-aortic baroreceptor-denervated rats. Acta Physiol Scand, 1988,134:479-491
11 Delle M, Thoren P. Changes in sympathetic nerve activity during morphine abstinence in the rat. Acta Physiol Scand, 1987,130:47-54
12 James IF, Chavkin C, Goldstein A. Preparation of brain membranes containing a single type of opioid receptor highly selective for dynorphin. Proc Natl Acad Sci USA, 1982,79:7570-7574
(1998-04-20收稿)
(本文编辑：王 蕾), 百拇医药
单位：北京医科大学神经科学研究所；崔彩莲：组织学与胚胎学系；于吉人：生理学系，北京 100083
关键词：电针；受体，阿片样；κ；物质禁断综合征；康复；吗啡；副作用；心动过率；治疗
北京医科大学学报990101 摘 要 目的:研究100 Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的受体机制。方法:在吗啡戒断18～24 h的大鼠模型上，腹腔注射阿片受体拮抗剂纳络酮(naloxone, NX)或侧脑室注射κ阿片受体拮抗剂nor-binaltorphimine (nor-BNI)，给予100 Hz电针刺激，记录吗啡戒断大鼠清醒状态下的心率和血压。结果：100 Hz电针的作用可被腹腔注射NX 1 mg.kg-1完全翻转、被侧脑室注射Nor-BNI 12 nmol完全阻断。结论：100 Hz电针抑制吗啡戒断大鼠心动过速的作用主要是通过中枢κ阿片受体介导的。
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中国图书资料分类法分类号 R245.1
100 Hz electroacupuncture amelioration of tachycardia of morphine withdrawal rats mediated by κ-opioid receptor in central nervous system
YU Yun-Guo＃， CUI Cai-Lian， YU Ji-Ren， HAN Ji-Sheng
(＃Neuroscience Research Institute, Beijing Medical University, Beijing 100083)
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Morphine/adv eff Tachycardia/ther
ABSTRACT Objective: To study the receptor mechanism of 100 Hz electroacupuncture (EA) amelioration of tachycardia of morphine withdrawal rats. Methods: Morphine dependence was induced in Wistar rats using 8-day-morphine-injection regime. Heart rate and blood pressure of the rats were recorded after 18-24 h of morphine abstinence, and 100 Hz EA stimulation was then given. Results: Tachycardia of the rats was ameliorated by 100 Hz EA, those effect was reversed by injecting opioid-receptor antagonist naloxone (i.p. at 1 mg.kg-1), or by administrating selective κ-opioid receptor antagonist nor-BNI (intracerebro-ventricular injection i.c.v. at 12 nmol). Conclusion:The effect of 100 EA in ameliorating tachycardia during morphine abstinence was mediated by κ-opioid receptors in CNS.
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(J Beijing Med Univ, 1999,31：1-4)
本研究所以往的实验证实100 Hz的电针(electroacupuncture, EA)或者经皮电刺激(transcutaneous electrical nerve stimulation, TENS)产生镇痛作用主要是通过促进动物和人脊髓释放强啡肽(dynorphin, Dyn)而实现的[1，2]。其后又将100 Hz电针用于治疗动物和人的吗啡戒断症状均取得了显著疗效[3，4]。在临床观察中发现，阿片成瘾者在戒断综合征发作时，心动过速是最容易进行客观记录的指标之一。给这些患者施以100 Hz电针治疗时，戒断症状被抑制，而心动过速的缓解尤为明显，在初次治疗时就可见心率迅速而平稳地恢复至接近正常水平[5]。本实验采用无创性心率/血压记录仪，观察清醒大鼠心率/血压，发现吗啡戒断大鼠也出现明显的心动过速。100 Hz电针刺激可使心动过速明显缓解。在该模型上，我们观察阿片受体拮抗剂纳络酮(naloxone， NX)和高选择性κ阿片受体拮抗剂nor-binaltorphine(nor-BNI)对100 Hz电针作用的影响,以期阐明100 Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的受体机制。
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1 材料与方法
1.1 吗啡依赖大鼠模型
雄性Wistar大鼠，体重230～280 g，每两只饲养在一笼中，给自然照明，自由摄入水和饲料。皮下注射(subcutaneous，s.c.)逐日递增量盐酸吗啡溶液。递增法：在第1天至第8天吗啡的每次注射剂量分别为5、10、20、40、50、60、70、80 mg*kg-1，每日3次，分别在7 am、3 pm、11 pm注射。第8天7 am、3 pm各注射一次吗啡后停止给药。在最后一次注药后18～24 h进行下列实验。
1.2 实验仪器
无创性心率/血压记录仪(IITC，USA，型号-69A)，示波器(Techtronix, USA，型号：5A18N)，韩氏(HANS)恒流电针仪(Healthronix, Singapore, 型号：LH257)，大鼠立体定位仪(Narishige, Japan, 型号：SN-2)，恒温控制仪(上海)。
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1.3 侧脑室插管
大鼠在水合氯醛(350 mg*kg-1)腹腔注射(intraperitoneal, i.p.)麻醉下，按照Paxinos & Watson大鼠脑立体定位图谱要求，在AP-0.8, L+1.5, V+3.6 mm部位钻孔。将预先制作好的不锈钢套管(直径0.8 mm)垂直插入，用牙托粉固定，套管内插入内套管(即注射管，直径0.5 mm)后加盖密封管口。术后肌肉注射氯霉素预防感染。
1.4 心率、血压测定方法
将吗啡戒断18～24 h内的动物小心轻柔地固定在特制的固定器内，剪去大鼠尾根部的毛(接受电针的大鼠用体积分数为75%的酒精擦洗消毒)，在双侧后肢足三里(St36，胫骨前结节外侧5mm)和三阴交(Sp6，胫骨后内踝上部3mm)分别插入不锈钢针灸针，将动物放置于自动温控的恒温装置内，温度控制在(28±1) ℃。将鼠尾穿过心率检测仪的光敏转换器,通过该转换器将动脉搏动的压力信号转变为电信号，并输入到放大器中。保持安静20 min后，打开记录仪，走纸速度设定为5 mm.s-1，每10 min记录1次，每次记录持续1 min，以每分心搏次数表示心率；以舒张压+1/3×脉压差为平均动脉压(kPa, 10 kPa=75 mmHg)。电针时接通HANS仪，用示波器监测电流的输出，刺激信号为方波，波宽为0.3 ms，频率100 Hz，强度为1mA，刺激持续时间为30 min，在测定心率和血压时暂停电针刺激。电刺激后继续观察30min。接受电针或注射药物的大鼠，均测定心率和血压9次。以给药或电针前3次测定的平均值作为基础心率/血压；给药后测定6次，于电针中和电针后分别测定3次，以每3次测定的平均值作为该30min的心率/血压值。在检测期间尽量避免刺激动物，保持环境安静。
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1.5 注射药物
测定基础心率、血压后，腹腔注射NX，剂量分别为1、5、10 mg.kg-1，按照上述方法记录心率和血压。侧脑室注射nor-BNI：用微量进样器从预先放置的内管注入，注射管的头端超出套管头端1mm。注射体积为10μl，之后按照上述方法记录心率和血压。实验结束后在套管内注射体积分数为10%的苯胺黑10μl，立即断头处死动物，体积分数为10%福尔马林固定鼠脑组织，切片，观察插管部位，如果插管偏离侧脑室部位，该动物不在数据统计之列。
1.6 实验数据处理
数据以
±s表示。统计学分析采用ANOVA，继之以Newman-Keul test检验组间差异。, 百拇医药 2 结果
2.1 NX对吗啡戒断大鼠心率的影响(表1)
表1 NX对吗啡戒断大鼠心率和血压的影响(
±s)Table 1 Effect of NX on the heart rate and mean blood pressure of
morphine withdrawal rats (
±s) Groupn
Before
, 百拇医药
injection
0～30 min
31～60 min
f/min-1
Normal rats+NS
7
383±5
375±7
366±8
MW+NS
8
453±8
, 百拇医药
430±8
420±11
MW+NX 1 mg.kg-1
8
462±4
439±7
426±12
MW+NX 5 mg.kg-1
8
455±6
453±8*
, 百拇医药
445±11*
MW+NX 10 mg.kg-1
8
452±5
462±7*
455±11*
p/mmHg
Normal rats+NS
7
119±4
118±7
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117±6
MW+NS
8
116±4
115±6
117±6
MW+NX 1 mg.kg-1
8
116±4
119±5
121±6
MW+NX 5 mg.kg-1
, 百拇医药
8
122±5
121±7
122±6
MW+NX 10 mg.kg-1
8
123±4
119±6
118±5
NS， normal saline; normal rats + NS, rats receiving s.c. NS injection and i.p. NS 1 ml.kg-1; MW+NS, morphine withdrawal rats receiving i.p. injection NS 1 ml.kg-1; MW+NX, morphine withdrawal rats receiving injection of naloxone i.p at 1, 5, 10 mg.kg-1. *P<0.05, compared with MW+NS group in the same period, using ANOVA followed by Newman-Keul test; f,heart rate; p,blood pressure.
, 百拇医药
对照组正常大鼠，在整个实验过程中，心率波动在366～383min-1的范围内，平均为375min-1，在注射后60min的观察期内心率降低了4.4%。4个吗啡戒断组电针前的心率在452～462 min-1的范围，总平均455min-1，较盐水对照组心率，平均383min-1)增高19%(P<0.01)。血压无显著变化。
可见给吗啡戒断大鼠注射NX 1 mg.kg-1并不能进一步加强心动过速，接受5mg.kg-1 NX注射后，大鼠心率较NS对照组提高5.3%～6.0%；将NX剂量进一步增大到10 mg*kg-1，也不能使大鼠心率显著提高(与5mg.kg-1组比较P>0.05)。
2.2 NX对100 Hz电针作用的影响(表2)
, 百拇医药
表2 NX对接受100 Hz电针的吗啡戒断大鼠心率的影响(
±s)Table 2 Effect of NX on heart rate in morphine withdrawal rats
receiving 100 Hz EA stimulation(
±s) Groupn
f/min-1
Before EA
During EA
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After EA
Normal rats
7
384±5
375± 7
365± 8
MW+NS+needle
6
455±5
412± 9
381± 5
MW+NS+EA
, http://www.100md.com
6
455±5
380± 6＃
384± 5
MW+NX 1 mg.kg-1+EA
6
453±8
430±13*
420±11*
MW+NX 5 mg.kg-1+EA
, 百拇医药
6
463±4
440± 7*
417±11*
Annotation is same as in table 1. Needle: inserting needle into acupoint without electrical stimulation. ＃P<0.05， compared with MW+NS+needle group; *P<0.05， compared with MW+NS+EA group in the same period; f,heart rate.
吗啡戒断大鼠心率较对照组升高18%～21%，心动过速的情况与表1所列结果极为相似，表示实验结果有较好的重复性；插针而不通电组，似乎也能使心动过速的程度有所缓解，但无统计学显著性，100Hz电针30min，使戒断大鼠的心动过速完全消失；电针对吗啡戒断大鼠心动过速的治疗作用可以被1mg.kg-1 NX完全翻转，有显著的统计学意义(P<0.05)；增加NX剂量到5mg.kg-1，结果与1mg.kg-1组相似；上述各项措施下，吗啡戒断大鼠血压相对平稳，变化幅度在-3%～3%之间，无统计学显著性(结果未列出)。
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2.3 nor-BNI对100 Hz电针作用的影响
100 Hz电针对吗啡戒断大鼠的心动过速的缓解作用能被NX阻断，表明阿片受体起作用。为检验κ阿片受体参与的可靠性，我们用特异性κ阿片受体拮抗剂nor-BNI进行实验。将动物随机分为6组，在动物开始注射吗啡之前，在侧脑室埋置不锈钢管。待动物苏醒并恢复正常后注射吗啡使之产生依赖，继之产生戒断症状。实验时先测定大鼠的基础心率/血压，然后用微量注射器经注射管向脑室内分别推注nor-BNI溶液3、12、48nmol或10μl生理盐水，继之以100 Hz电针30 min。结果见表3。
表3 Nor-BNI对接受100 Hz电针的
吗啡戒断大鼠心率的影响(
±s), http://www.100md.com Table 3 Effect of nor-BNI on heart rate in morphine withdrawal rats
receiving 100 Hz EA stimulation (
±s) Groupn
f/min-1
Before EA
During EA
After EA
MW+NS+needle
, 百拇医药
8
419±10
414±10
408±14
MW+NB 12 nmol+needle
6
412±10
418±14
422±14
MW+NS+EA
8
423± 9
, 百拇医药
368± 8
358±13
MW+NB 3nmol+EA
8
421± 4
376± 8＃
374± 7＃
MW+NB 12nmol+EA
6
411±10
402±13*
, 百拇医药
382±14*
MW+NB 48nmol+EA
6
411± 5
409±8*
402± 6*
Annotation is same as in table 1. NB， nor-BNI. #P<0.05, compared with MW+NS+needle group; *P<0.05, compared with MW+NS+EA group in the same period; f,heart rate.
吗啡戒断大鼠的6个组在电针前心率都在411min-1以上，各组之间波动保持在-2%～+1%之间，表示实验的重复性很好；nor-BNI 12nmol并不能使心率进一步加快，表明这一剂量的κ拮抗剂不能诱使戒断症状加重；100Hz电针30 min使心动过速完全消失，心率恢复到正常对照水平；电针的作用不能被小剂量(3nmol)的nor-BNI阻断，但可被12nmol nor-BNI阻断(P<0.05)；加大nor-BNI剂量到48nmol则不仅可完全阻断电针的即时效应，也可以完全阻断电针的后效应。经上述各项处理后，各组动物的血压无显著变化。
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3 讨论
本研究表明，100 Hz电针可以抑制吗啡戒断大鼠的心动过速，而i.p.阿片受体拮抗剂NX或侧脑室注射(intracerebro-ventricular, i.c.v.)选择性κ阿片受体拮抗剂nor-BNI可翻转100Hz电针的作用。表明100 Hz电针对戒断症状的治疗作用主要是通过中枢κ阿片受体介导的。
实验设计中有一点值得注意，NX 1 mg.kg-1 s.c.可以翻转100Hz电针对吗啡戒断大鼠心动过速的治疗作用(表2)，是否可能由于NX加重了戒断症状，而不是因为它取消了电针的作用。对此问题的回答是否定的。因为单纯应用1mg.kg-1 NX并不能使心动过速加剧，必须用5mg.kg-1或10 mg.kg-1 NX才能有此效应(表1)。
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同样12 nmol nor-BNI并不能使心动过速加剧，但可以翻转100 Hz电针对吗啡戒断大鼠心动过速的治疗作用(表3)，故100 Hz电针的降心率作用是通过κ阿片受体介导的。
100 Hz电针通过脑内κ受体翻转戒断症状之一的心动过速，与100 Hz电针选择性促进中枢强啡肽释放的事实一致[6]。Tulunay等[7]i.c.v. Dyn A-(1-13)可抑制NX催瘾的吗啡依赖大鼠的戒断症状。Green等[8]进一步证明强啡肽抑制吗啡戒断症状的作用部位主要是在脊髓。本工作i.c.v. κ阿片受体拮抗剂nor-BNI，可以翻转100 Hz电针对戒断症状的治疗作用。这有两个可能，一是i.c.v. 的药液可能有一部分进入脊髓，虽然这一可能性很小；二是脑内释放的强啡肽也可以抑制吗啡戒断症状的发生。已有实验表明，侧脑室多次注射Dyn A-(1-13)可显著抑制吗啡依赖大鼠的戒断症状[9]，与本结果一致。
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文献中所指的阿片戒断症状，绝大多数是指湿狗样抖动、逃跑、打斗、咬牙、修饰等躯体行为，以及腹泻、流涎等植物性神经活动；Delle等[10，11]发现，清醒的吗啡戒断大鼠在NX催瘾后肾交感神经、心率及血压呈双相变化，小剂量NX时肾交感神经和心率升高，而血压未见显著变化，当NX剂量加大时肾交感神经活动和心率下降，而血压上升；但迄今未见在自然戒断时清醒的吗啡戒断大鼠的心率、血压等心血管活动指标变化的报道。吴鎏桢等[5]在观察韩氏穴位神经刺激仪(HANS)治疗海洛因成瘾者的戒断症状时发现，心率加快是戒断症状中一个极恒定的表现。当用HANS仪治疗时，在20min内心率由平均110min-1降至80～90min-1，其它戒断症状也相应减弱。这一现象在大鼠身上得到很好的重复。本工作进一步提示，这可能是100Hz电刺激促进了脑内内源性κ受体配基强啡肽释放所引起的结果。
关于中枢强啡肽对血压的调控，冯越和韩济生曾报道，给大鼠侧脑室或脊髓蛛网膜下腔注射选择性κ受体激动剂U50,488H可引起剂量相关的血压降低和心率减慢。其中血压降低可被大剂量NX(5，10mg.kg-1，s.c.)所阻断，1mg.kg-1 NX无效；而心率的降低仅用1mg.kg-1 NX即可完全翻转，提示U50488H的中枢降压作用通过κ受体，而降心率作用可能是通过一种迄今未知的对NX有较高亲和力的κ受体亚型介导。这一发现在本工作中得到验证。100Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的作用可被1mg.kg-1 NX完全翻转(表2)，而一般来说，1mg.kg-1 NX的剂量是不能完全阻断κ受体的功能的[12]。
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必须指出，阿片戒断时出现如此明确的心动过速，而血压无显著变化，这是值得注意的。因为根据目前的认识，吗啡戒断时蓝斑放电增加，而电刺激蓝斑可以引起交感下行系统兴奋，引起血压升高，心率加快。因此，这一现象还需进一步的研究来阐明。
综上所述，100 Hz电针确能抑制吗啡戒断大鼠的心动过速。这一作用主要是通过脑内κ阿片受体所介导的。
* 国家自然科学基金(39570682)资助项目。
参考文献
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(1998-04-20收稿)
(本文编辑：王 蕾), 百拇医药