丙谷胺对人结肠癌裸鼠移植瘤的作用
作者：赵言明 何双梧 侯宪典
单位：赵言明 侯宪典 中国人民解放军152中心医院普外科 河南省平顶山市 467000；何双梧 中国人民解放军第三军医大学大坪医院普外科 重庆市 400042
关键词：丙谷胺；结肠肿瘤；肿瘤移植
世界华人消化杂志990924 中国图书馆分类号 R 735.34
Subject headings proglumide; colonic neoplasms; neoplasm transplantation
我们利用人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型，研究促胃液素及丙谷胺对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响，旨在为结肠癌的内分泌治疗提供实验依据.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 人结肠癌细胞株SW480(美国纪念斯隆—凯特林癌症中心制备，重庆医科大学病理生理教研室提供)，经用BALB/ C-nu/ nu裸鼠(第三军医大学实验动物中心提供)稳定传代后，移植瘤剪成1 mm3瘤块，经套管针接种20只裸鼠. 裸鼠体质量18 g～22 g，鼠龄4 wk～6 wk，雌雄兼用.
1.2 方法 将20只裸鼠随机分为4组. 对照组：生理盐水0.4 mL，2次/ d. 五肽促胃液素(PG)组：PG 4 μg，2次/ d. 丙谷胺(PGL)组：PGL 10 mg，2次/ d. PG+PGL组：PG4 μg+PGL 10 mg，2次/ d. 各组均于接种移植瘤后次日皮下给药，用药36 d，末次用药后24 h内照相，处死荷瘤鼠并留取移植瘤标本. 采用Oscieka et al[1]描述的方法计算移植瘤的体积，求每组肿瘤的平均体积. 瘤质量：处死裸鼠后剥出移植瘤称质量. 流式细胞术[2]测定移植瘤细胞DNA，蛋白质的相对含量，并进行细胞周期分析.
, http://www.100md.com
统计学处理 数据终值以均数±标准差(
±s)表示，按未配对资料作团体比较，t检验. P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异非常显著.
2 结果
2.1 移植瘤的体积及瘤质量 PG组较对照组均有明显增加(P<0.05)，PGL组移植瘤的体积和质量与对照组比较均无明显差异，但PGL+PG组移植瘤体积，质量较PG组明显减少(P<0.01)，而与对照组比较差异不明显(表1).
2.2 移植瘤细胞DNA及蛋白质含量 PG组与对照组比较，明显高于对照组(P<0.01)；PGL组移植瘤细胞内DNA及蛋白质含量与对照组比较，差异不明显；但PGL+PG组瘤细胞内DNA及蛋白质含量与PG组比较有显著差异(P<0.01)，与对照组比较差异不明显(表2).
, http://www.100md.com
2.3 移植瘤细胞周期及增殖指数 PG组移植瘤G0/ G1期细胞数明显低于对照组(P<0.01)，S，G2M期细胞数则比对照组明显升高(P<0.05)，增殖指数(PI)对照组为35.1，而PG组为40.8，二者相差显著(P<0.01). PGL组对移植瘤细胞周期无明显影响. 但PGL+PG组对移植瘤G0/ G1期细胞数较PG组显著升高(P<0.01)；而S期及G2M期细胞数显著降低(P<0.05)，PI值为32.4，亦低于PG组，二者比较差异显著(P<0.01，表3).
表1 PG及PGL对人结肠癌裸鼠移植瘤体积，瘤质量的影响 (n=5,±s) 组别
体积(V/ mm3)
瘤质量(m/ g)
, http://www.100md.com
对照组
1766±36
3.04±0.13
PG组
1926±98a
3.37±0.21a
PGL组
1750±53
2.98±0.16
PG+PGL组
1708±59d
, http://www.100md.com 2.91±0.23d
aP<0.05 vs 对照组；dP<0.01 vs PG组.表2 PG及PGL对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞DNA及蛋白质含量的影响 (n=5,±s) 组别
DNA(道)
蛋白质(道)
对照组
947±16
364±12
PG组
, http://www.100md.com 1004±17b
675±18b
PGL组
940±21
356±8.0
PG+PGL组
940±26d
369±14d
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs PG组.
表3 PG及PGL对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞周期及增殖指数的影响 (n=5,±s)
, 百拇医药
组别
G0/ G1
S
G2M
PI
对照组
64.9±1.7
18.2±1.2
16.8±2.4
35.1±1.7
PG组
59.2±1.2b
, 百拇医药
20.2±1.1a
20.6±2.1a
40.8±1.8b
PGL组
67.2±2.2
18.0±1.4
14.8±1.1
32.8±2.3
PG+PGL组
67.4±2.4d
18.1±1.4c
, 百拇医药
14.3±0.7c
32.2±2.4d
aP<0.05, bP<0.01，vs 对照组；cP<0.05，dP<0.01 vs PG组.3 讨论
促胃液素是一种多肽类胃肠激素，具有刺激胃壁细胞分泌胃酸及促进胃肠粘膜生长的功能. 促胃液素促进靶组织生长的作用，使人们推测其与某些肿瘤生长有关，如结肠癌[3]. 五肽促胃液素(PG)是一种人工合成的促胃液素类似物，具有促胃液素的生物活性功能. 我们用人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型，观察PG对移植瘤生长的影响. 实验表明，PG组移植瘤的体积，质量明显高于对照组，PG促进了结肠癌移植瘤的增殖. Winsett et al[4]应用鼠MC-26结肠癌裸鼠移植瘤模型，发现PG具有促进移植瘤生长的作用，每日PG 125 μg/ kg，肿瘤增长最快. 手术或药物诱发的内源性高促胃液素血症也使致癌剂诱发的鼠结肠癌发生的数目、体积和质量增加[5]. 流式细胞术测定结果表明，PG组DNA及蛋白质含量，PI值也明显高于对照组，提示促胃液素具有促进移植瘤细胞合成DNA和蛋白质的功能，从而促进瘤细胞分裂和增殖，使肿瘤体积和质量增加.
, 百拇医药
丙谷胺是促胃液素受体特异性竞争性抑制剂，可以用来拮抗促胃液素促进结肠肿瘤生长的作用. 实验表明，单用PGL不影响结肠癌移植瘤的生长，但PGL和PG合用，PGL可以拮抗PG促进移植瘤生长的作用，从而使移植瘤体积和质量增加缓慢. 流式细胞术表明PGL+PG合用，移植瘤细胞G0/ G1期细胞数较PG组显著增加(P<0.01)，而S，G2M期细胞数则明显减少(P<0.05)，移植瘤细胞DNA，蛋白质含量亦低于PG组. PGL抑制了促胃液素促进结肠癌细胞DNA及蛋白质合成的作用，从而抑制移植瘤体积和质量的增加. 其机制可能有二：丙谷胺首先竞争性地抑制了促胃液素和其受体结合，其次丙谷胺降低了结肠癌细胞膜上促胃液素受体的含量[6]. 促胃液素在体内促进结肠癌细胞的生长是通过与结肠癌细胞膜上的受体结合而实现的. 本实验结果表明，丙谷胺抑制了促胃液素促结肠癌移植瘤生长的作用. Kameyama et al[7]报道，结肠癌肝转移灶切除术后，7例患者每天po丙谷胺1200 mg及5-DFUR 800 mg，2 a，同时行肝动脉插管化疗1 a，平均随访37 mo，结果肝内再发率仅为14%(1/ 7)，而对照组为52%(14/ 26)，认为化疗-内分泌治疗可防止结肠癌肝移灶切除术后复发. 我们认为对结肠癌患者，尤其是血清促胃液素水平较高的患者进行术后化疗时，同时进行内分泌治疗，可能会提高化疗效果.
, 百拇医药
通讯作者 赵言明
4 参考文献
1 Oscieka R, Houchens DP, Goldin A. Chemotherapy of human colon cancer xenografts in athymic nude mice. Cancer, 1977;40:2640-2650
2 张胜本，张连阳编. 肿瘤化学治疗敏感性与抗药性. 第1版. 四川成都：四川科学技术出版社，1995：89-99
3 Nemeth J, Taylor B, Pauwel S, Varro A, Dockray GJ. Identification of progastrin derived peptide in colorectal carcinoma extracts. Gut, 1993;34:90-95
, 百拇医药
4 Winsett OE, Townsend CMJr, Glass EJ, Thompson JC. Gastrin stimulates growth of calon cancer. Surgery, 1986;99:302-307
5 Kalin DA, McBath M, Jones RD, Elwyn KE, Romsdahl MM. Hypergastrinemia and colorectal carcinogenesis in the rats. Cancer Lett, 1985;29:73-78
6 Beauchamp K, Townsend CMJr, Singh P, Glass EJ, Thompson JC. Proglumide, A gastrin receptor antagonist, inhibits growth of colon cance and enhances survival in mice. Ann Surg, 1985;9:303-307
7 Kameyama M, Sasaki Y, Kabuto T, Yasuda T, Nakano H, Ohigashi H. Adjuvant chemoendocrine chemotherapy with gastrin antagonist after resection of liver metastasis in colorectal cancer. Gan To Kagaku Ryoho, 1994；21：2169-2171
收稿日期 1999-03-05 修回日期 1999-04-28, http://www.100md.com
单位：赵言明 侯宪典 中国人民解放军152中心医院普外科 河南省平顶山市 467000；何双梧 中国人民解放军第三军医大学大坪医院普外科 重庆市 400042
关键词：丙谷胺；结肠肿瘤；肿瘤移植
世界华人消化杂志990924 中国图书馆分类号 R 735.34
Subject headings proglumide; colonic neoplasms; neoplasm transplantation
我们利用人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型，研究促胃液素及丙谷胺对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响，旨在为结肠癌的内分泌治疗提供实验依据.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 人结肠癌细胞株SW480(美国纪念斯隆—凯特林癌症中心制备，重庆医科大学病理生理教研室提供)，经用BALB/ C-nu/ nu裸鼠(第三军医大学实验动物中心提供)稳定传代后，移植瘤剪成1 mm3瘤块，经套管针接种20只裸鼠. 裸鼠体质量18 g～22 g，鼠龄4 wk～6 wk，雌雄兼用.
1.2 方法 将20只裸鼠随机分为4组. 对照组：生理盐水0.4 mL，2次/ d. 五肽促胃液素(PG)组：PG 4 μg，2次/ d. 丙谷胺(PGL)组：PGL 10 mg，2次/ d. PG+PGL组：PG4 μg+PGL 10 mg，2次/ d. 各组均于接种移植瘤后次日皮下给药，用药36 d，末次用药后24 h内照相，处死荷瘤鼠并留取移植瘤标本. 采用Oscieka et al[1]描述的方法计算移植瘤的体积，求每组肿瘤的平均体积. 瘤质量：处死裸鼠后剥出移植瘤称质量. 流式细胞术[2]测定移植瘤细胞DNA，蛋白质的相对含量，并进行细胞周期分析.
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统计学处理 数据终值以均数±标准差(
±s)表示，按未配对资料作团体比较，t检验. P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异非常显著.2 结果
2.1 移植瘤的体积及瘤质量 PG组较对照组均有明显增加(P<0.05)，PGL组移植瘤的体积和质量与对照组比较均无明显差异，但PGL+PG组移植瘤体积，质量较PG组明显减少(P<0.01)，而与对照组比较差异不明显(表1).
2.2 移植瘤细胞DNA及蛋白质含量 PG组与对照组比较，明显高于对照组(P<0.01)；PGL组移植瘤细胞内DNA及蛋白质含量与对照组比较，差异不明显；但PGL+PG组瘤细胞内DNA及蛋白质含量与PG组比较有显著差异(P<0.01)，与对照组比较差异不明显(表2).
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2.3 移植瘤细胞周期及增殖指数 PG组移植瘤G0/ G1期细胞数明显低于对照组(P<0.01)，S，G2M期细胞数则比对照组明显升高(P<0.05)，增殖指数(PI)对照组为35.1，而PG组为40.8，二者相差显著(P<0.01). PGL组对移植瘤细胞周期无明显影响. 但PGL+PG组对移植瘤G0/ G1期细胞数较PG组显著升高(P<0.01)；而S期及G2M期细胞数显著降低(P<0.05)，PI值为32.4，亦低于PG组，二者比较差异显著(P<0.01，表3).
表1 PG及PGL对人结肠癌裸鼠移植瘤体积，瘤质量的影响 (n=5,
±s) 组别体积(V/ mm3)
瘤质量(m/ g)
, http://www.100md.com
对照组
1766±36
3.04±0.13
PG组
1926±98a
3.37±0.21a
PGL组
1750±53
2.98±0.16
PG+PGL组
1708±59d
, http://www.100md.com 2.91±0.23d
aP<0.05 vs 对照组；dP<0.01 vs PG组.表2 PG及PGL对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞DNA及蛋白质含量的影响 (n=5,
±s) 组别DNA(道)
蛋白质(道)
对照组
947±16
364±12
PG组
, http://www.100md.com 1004±17b
675±18b
PGL组
940±21
356±8.0
PG+PGL组
940±26d
369±14d
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs PG组.
表3 PG及PGL对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞周期及增殖指数的影响 (n=5,
±s), 百拇医药
组别
G0/ G1
S
G2M
PI
对照组
64.9±1.7
18.2±1.2
16.8±2.4
35.1±1.7
PG组
59.2±1.2b
, 百拇医药
20.2±1.1a
20.6±2.1a
40.8±1.8b
PGL组
67.2±2.2
18.0±1.4
14.8±1.1
32.8±2.3
PG+PGL组
67.4±2.4d
18.1±1.4c
, 百拇医药
14.3±0.7c
32.2±2.4d
aP<0.05, bP<0.01，vs 对照组；cP<0.05，dP<0.01 vs PG组.3 讨论
促胃液素是一种多肽类胃肠激素，具有刺激胃壁细胞分泌胃酸及促进胃肠粘膜生长的功能. 促胃液素促进靶组织生长的作用，使人们推测其与某些肿瘤生长有关，如结肠癌[3]. 五肽促胃液素(PG)是一种人工合成的促胃液素类似物，具有促胃液素的生物活性功能. 我们用人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型，观察PG对移植瘤生长的影响. 实验表明，PG组移植瘤的体积，质量明显高于对照组，PG促进了结肠癌移植瘤的增殖. Winsett et al[4]应用鼠MC-26结肠癌裸鼠移植瘤模型，发现PG具有促进移植瘤生长的作用，每日PG 125 μg/ kg，肿瘤增长最快. 手术或药物诱发的内源性高促胃液素血症也使致癌剂诱发的鼠结肠癌发生的数目、体积和质量增加[5]. 流式细胞术测定结果表明，PG组DNA及蛋白质含量，PI值也明显高于对照组，提示促胃液素具有促进移植瘤细胞合成DNA和蛋白质的功能，从而促进瘤细胞分裂和增殖，使肿瘤体积和质量增加.
, 百拇医药
丙谷胺是促胃液素受体特异性竞争性抑制剂，可以用来拮抗促胃液素促进结肠肿瘤生长的作用. 实验表明，单用PGL不影响结肠癌移植瘤的生长，但PGL和PG合用，PGL可以拮抗PG促进移植瘤生长的作用，从而使移植瘤体积和质量增加缓慢. 流式细胞术表明PGL+PG合用，移植瘤细胞G0/ G1期细胞数较PG组显著增加(P<0.01)，而S，G2M期细胞数则明显减少(P<0.05)，移植瘤细胞DNA，蛋白质含量亦低于PG组. PGL抑制了促胃液素促进结肠癌细胞DNA及蛋白质合成的作用，从而抑制移植瘤体积和质量的增加. 其机制可能有二：丙谷胺首先竞争性地抑制了促胃液素和其受体结合，其次丙谷胺降低了结肠癌细胞膜上促胃液素受体的含量[6]. 促胃液素在体内促进结肠癌细胞的生长是通过与结肠癌细胞膜上的受体结合而实现的. 本实验结果表明，丙谷胺抑制了促胃液素促结肠癌移植瘤生长的作用. Kameyama et al[7]报道，结肠癌肝转移灶切除术后，7例患者每天po丙谷胺1200 mg及5-DFUR 800 mg，2 a，同时行肝动脉插管化疗1 a，平均随访37 mo，结果肝内再发率仅为14%(1/ 7)，而对照组为52%(14/ 26)，认为化疗-内分泌治疗可防止结肠癌肝移灶切除术后复发. 我们认为对结肠癌患者，尤其是血清促胃液素水平较高的患者进行术后化疗时，同时进行内分泌治疗，可能会提高化疗效果.
, 百拇医药
通讯作者 赵言明
4 参考文献
1 Oscieka R, Houchens DP, Goldin A. Chemotherapy of human colon cancer xenografts in athymic nude mice. Cancer, 1977;40:2640-2650
2 张胜本，张连阳编. 肿瘤化学治疗敏感性与抗药性. 第1版. 四川成都：四川科学技术出版社，1995：89-99
3 Nemeth J, Taylor B, Pauwel S, Varro A, Dockray GJ. Identification of progastrin derived peptide in colorectal carcinoma extracts. Gut, 1993;34:90-95
, 百拇医药
4 Winsett OE, Townsend CMJr, Glass EJ, Thompson JC. Gastrin stimulates growth of calon cancer. Surgery, 1986;99:302-307
5 Kalin DA, McBath M, Jones RD, Elwyn KE, Romsdahl MM. Hypergastrinemia and colorectal carcinogenesis in the rats. Cancer Lett, 1985;29:73-78
6 Beauchamp K, Townsend CMJr, Singh P, Glass EJ, Thompson JC. Proglumide, A gastrin receptor antagonist, inhibits growth of colon cance and enhances survival in mice. Ann Surg, 1985;9:303-307
7 Kameyama M, Sasaki Y, Kabuto T, Yasuda T, Nakano H, Ohigashi H. Adjuvant chemoendocrine chemotherapy with gastrin antagonist after resection of liver metastasis in colorectal cancer. Gan To Kagaku Ryoho, 1994；21：2169-2171
收稿日期 1999-03-05 修回日期 1999-04-28, http://www.100md.com