p16，CD15的表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系及意义
作者：刘国清 华颂文
单位：刘国清(湖南医科大学附第二属医院，中国湖南 长沙 410011)；华颂文(湖南医科大学附第二属医院，中国湖南 长沙 410011)
关键词：结肠肿瘤/病理学；抗原，CD15 ；基因，抑制，肿瘤
湖南医学000507[摘要]目的研究p16和CD15在结肠癌组织中的表达与结肠 癌侵袭和转移行为的关系及意义。方法应用免疫组织化学法(SP法)检测10例慢性结肠炎 粘膜组织(对照组)和31例结肠癌组织中p16及CD15的表达。结果31例结肠癌p 16阳性表达率(41%)，明显低于对照组(90%)；CD15阳性表达率为67.74%，明显高于对 照组(40%)，差异均有显著性(P<0.05)。31例结肠癌中，p16表达在侵犯和转移者(B组) 为31.58%低于无侵犯无转移者(A组)的50%，而CD15表达则高于无侵犯无转移者(A 组)(73.68 vs 58.33)，差异均有显著性(P<0.05)。结论p16低表达和CD15 高表达与结肠癌的侵袭和转移密切相关；术前检测p16、CD15在结肠癌活检组织中的 表达，对估计结肠癌侵袭和转移情况，指导手术决策，以及估计预后有重要的临床应用价值 。
, 百拇医药
[中图分类号] R735.35 [文献标识码] A [文章编号]1001-9421(2000)05-0334-02
Relationship Between the Expression of p16,CD15 and Invasiveness and Metastasis of Colon Cancer
Liu Guo-qing, Hua Shen-wen
(Department of General Surgery, the Second Affiliated Hospital of Hun an Medical
University, Changsha, 410011, China)
[Abstract]Objects To study the relationship between the expression of p1 6,CD15 and invasiveness and Metastasis of colon cancer as well as its clinical significance. Methods Using immunohistochemical method (SP metho d), p16 and CD15 expressions were detected in ten cases of chronic col onitis (control group) and 31 cases of colon cancer, including 12 cases witho ut invasion and metastasis (Group A) and 19 cases with invasion and metastas is (Group B). Results The positive expression rate of p16 in 31 cases of colon cancer was 41%, evidently lower than that of control group (90%)(P< 0.05); while their positive expression rate of CD15 was 67.74%, evidentl y higher than that of control group (40%)(P<0.05). Among 31 cases, posit ive expression rate of p16 in Group B was 31.58%, significantly lower than tha t of Group A (50%)(P<0.05); whereas the positive expression rate of CD1 5 in Group B was 73.68%, significantly higher than that in Group A (58.33%)( P<0.05). Conclusions Low expression of p16 and high expression of CD 15 are closely correlated with invasion and metastasis of colon cance r. Detection of p16 and CD15 expression in biopsied tissues of colon cancer before operation shows important value of clinical application in the p rediction of its invasiveness and metastasis, in guidance upon decision of operation and appraisal of its prognosis.
, 百拇医药
[Key words] colonic neoplasms/PA; antigens,CD15 genes,suppressor,tumor
结肠癌是一常见消化道恶性肿瘤，近年来发现其发生发展与多基因多分子水 平变化相关。作者等采用免疫组化法对31例结肠癌组织进行p16和CD15检测，探讨 其与结肠癌侵袭转移的关系及意义。
1 临床资料
1.1 一般资料 取本院1999年10月至2000年1月间手术切除结肠癌标本31例 ，男性20例，女性11例，平均年龄56(26～82)岁，粘液腺癌6例，腺癌Ⅰ级2例，腺癌Ⅱ级11 例，腺癌Ⅱ～Ⅲ级12例；Dukes B期3例，Dukes C1期9例, Dukes C2期14例,Du kes D期7例，标本经10%甲醛固定石蜡包埋切片(厚4～5μm)，HE染色证实为结肠腺癌。
, http://www.100md.com
1.2 分组处理 根据Dukes分期及病理组织学检验结果，将本组31例分成无 肠外侵犯无转移组(A组)12例，肠外侵犯转移组(B组)19例。B组中合并淋巴转移17例，合并 远处转移7例。另将10例慢性结肠炎粘膜组织作为对照。
1.3 免疫组化染色 检测p16及CD15采用链霉亲和素-生物素-辣根过 氧化物酶(SP)法。MTS1/p16多克隆抗体由美国Maxim生物技术公司生产，SP试剂盒购自Dako 公司。石蜡切片常规脱蜡，3%双氧水10 min，10%山羊血清15 min，一抗(1:50)6 min，生物 素标记二抗(1:50)15 min，SP(1:50)15 min。以上各步骤间均以PBS缓冲液洗3次，每次5 mi n，DAB显色苏木精复染，透明封固。已知阳性切片作为阳性对照。PBS代替一抗作为阳性对 照，结果判定以细胞呈清晰棕色为p16阳性表达；细胞膜或(和)细胞质有棕色染色为CD1 5阳性表达。
, http://www.100md.com 1.4 统计分析 采用直接概率法。
2 结果
2.1 p16、CD15在结肠癌和慢性结肠炎中的表达 结肠癌组p16阳性 表达率为41.93%，明显低于对照组(90%)，差异具显著性(P<0.05)；结肠癌组CD1 5阳性表达率为67.74%，明显高于对照组，差异有显著性(P<0.05)。详见表1。
表1 p16、CD15在结肠癌和慢性结肠炎中的表达 组别
n
p16
CD15
结肠癌组
, 百拇医药
31
13(41.93)
21(67.74)
对照组
10
9(90.00)
4(40.00)
2.2 p16、CD15表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系 详见表2。表2 p16、CD15表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系(例 ，%) 组别
n
p16
CD15
, http://www.100md.com
A组
12
6(50.00)
7(58.33)
B组
19
6(31.58)
14(73.68)
p16的表达A组明显高于B组，差异具显著性(P<0.05)；CD15的表 达则A组明显低于B组，差异亦具有显著性(P<0.05)。
3 讨论
3.1 p16表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系 p16基因是重要的抑癌基因 之一，其编码产物p16蛋白通过与周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)结合，抑制CDK4/周期蛋白的D 复合物的催化活性，从而抑制细胞增生和恶性转化。p16基因的缺失及p16蛋白低表达，使得 细胞增殖程序失控，在恶性肿瘤的发生和发展中起着极为重要的作用[1～4]。本研 究结果显示，p16在结肠癌中，尤其在有侵犯、与转移等恶性生物学行为的病例中呈低水平 表达，提示p16基因的缺失及p16低表达与结肠癌的侵袭和转移行为密切相关；p16表达越低 ，发生侵犯和转移的可能性越大，预后越差。
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3.2 CD15表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系 CD15是一种糖 蛋白，又叫粒细胞相关抗原，被选择素所识别。已有研究表明，CD15参与细胞间的信 息传递或为细胞内第2信使，可将细胞外信息传到细胞质和细胞核，调控基因表达，与肿瘤 发生及发展相关[5～7]。本结果表明CD15在有侵犯和转移的病例中呈现高表 达。提示CD15与结肠癌的侵袭和转移行为密切相关；CD15表达越高，发生侵犯 和转移的可能性越大，预后越差。
术前检测p16和CD15在结肠癌活检组织中的表达，对估计结肠癌侵袭和转移情况，指 导手术决策，以及估计预后有重要的临床应用价值。
[作者简介] 刘国清(1957-)，男，湖南 益阳人，副主任医师，主要从事普通外科工作。
, http://www.100md.com
[参 考 文 献]
[1] Nobori T. Detection of the cyclin depended kinase-A inhib itor gene in multiple human cancer[J].Nature, 1994，36:753.
[2] Kamb A, Graus NA, Weaver-Feldhans J, et al. A cell cycle regul ator potentially involved in genesis of many tumor types[J]. Science, 1994 ，264:436.
[3] Thomas Y, Walter S, Casscaudra B, et al. Increased p16 levels correlate with prob alterations in human urothelial cells[J].Cancer Research , 1995，55:493.
, 百拇医药
[4] Guan RJ, Fu Y, Holt PR, et al. Association of K-ras mutations with p16 methylation in human colon cancer[J]. Gastroenterology, 1999，116 (5):1063-1071.
[5] Brooks SA, eathem AJC. Expression of the CD15 antigen (lewis x) in breast Cancer[J]. Histochem J, 1995，27(9):689.
[6] 宋长玲. 细胞粘附分子研究的某些进展[J]. 生命科学, 1994，6( 3):27.
[7] Nakamori S, Kameyama M, Tmaoka S, et al. Involvement of carbohydrate antigen sialyl lewis (x) in colorectal cancer metastasis[J]. Dis Colon Rectum, 1997，40(4):420-431.
[收稿日期]2000-02-20, http://www.100md.com
单位：刘国清(湖南医科大学附第二属医院，中国湖南 长沙 410011)；华颂文(湖南医科大学附第二属医院，中国湖南 长沙 410011)
关键词：结肠肿瘤/病理学；抗原，CD15 ；基因，抑制，肿瘤
湖南医学000507[摘要]目的研究p16和CD15在结肠癌组织中的表达与结肠 癌侵袭和转移行为的关系及意义。方法应用免疫组织化学法(SP法)检测10例慢性结肠炎 粘膜组织(对照组)和31例结肠癌组织中p16及CD15的表达。结果31例结肠癌p 16阳性表达率(41%)，明显低于对照组(90%)；CD15阳性表达率为67.74%，明显高于对 照组(40%)，差异均有显著性(P<0.05)。31例结肠癌中，p16表达在侵犯和转移者(B组) 为31.58%低于无侵犯无转移者(A组)的50%，而CD15表达则高于无侵犯无转移者(A 组)(73.68 vs 58.33)，差异均有显著性(P<0.05)。结论p16低表达和CD15 高表达与结肠癌的侵袭和转移密切相关；术前检测p16、CD15在结肠癌活检组织中的 表达，对估计结肠癌侵袭和转移情况，指导手术决策，以及估计预后有重要的临床应用价值 。
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[中图分类号] R735.35 [文献标识码] A [文章编号]1001-9421(2000)05-0334-02
Relationship Between the Expression of p16,CD15 and Invasiveness and Metastasis of Colon Cancer
Liu Guo-qing, Hua Shen-wen
(Department of General Surgery, the Second Affiliated Hospital of Hun an Medical
University, Changsha, 410011, China)
[Abstract]Objects To study the relationship between the expression of p1 6,CD15 and invasiveness and Metastasis of colon cancer as well as its clinical significance. Methods Using immunohistochemical method (SP metho d), p16 and CD15 expressions were detected in ten cases of chronic col onitis (control group) and 31 cases of colon cancer, including 12 cases witho ut invasion and metastasis (Group A) and 19 cases with invasion and metastas is (Group B). Results The positive expression rate of p16 in 31 cases of colon cancer was 41%, evidently lower than that of control group (90%)(P< 0.05); while their positive expression rate of CD15 was 67.74%, evidentl y higher than that of control group (40%)(P<0.05). Among 31 cases, posit ive expression rate of p16 in Group B was 31.58%, significantly lower than tha t of Group A (50%)(P<0.05); whereas the positive expression rate of CD1 5 in Group B was 73.68%, significantly higher than that in Group A (58.33%)( P<0.05). Conclusions Low expression of p16 and high expression of CD 15 are closely correlated with invasion and metastasis of colon cance r. Detection of p16 and CD15 expression in biopsied tissues of colon cancer before operation shows important value of clinical application in the p rediction of its invasiveness and metastasis, in guidance upon decision of operation and appraisal of its prognosis.
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[Key words] colonic neoplasms/PA; antigens,CD15 genes,suppressor,tumor
结肠癌是一常见消化道恶性肿瘤，近年来发现其发生发展与多基因多分子水 平变化相关。作者等采用免疫组化法对31例结肠癌组织进行p16和CD15检测，探讨 其与结肠癌侵袭转移的关系及意义。
1 临床资料
1.1 一般资料 取本院1999年10月至2000年1月间手术切除结肠癌标本31例 ，男性20例，女性11例，平均年龄56(26～82)岁，粘液腺癌6例，腺癌Ⅰ级2例，腺癌Ⅱ级11 例，腺癌Ⅱ～Ⅲ级12例；Dukes B期3例，Dukes C1期9例, Dukes C2期14例,Du kes D期7例，标本经10%甲醛固定石蜡包埋切片(厚4～5μm)，HE染色证实为结肠腺癌。
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1.2 分组处理 根据Dukes分期及病理组织学检验结果，将本组31例分成无 肠外侵犯无转移组(A组)12例，肠外侵犯转移组(B组)19例。B组中合并淋巴转移17例，合并 远处转移7例。另将10例慢性结肠炎粘膜组织作为对照。
1.3 免疫组化染色 检测p16及CD15采用链霉亲和素-生物素-辣根过 氧化物酶(SP)法。MTS1/p16多克隆抗体由美国Maxim生物技术公司生产，SP试剂盒购自Dako 公司。石蜡切片常规脱蜡，3%双氧水10 min，10%山羊血清15 min，一抗(1:50)6 min，生物 素标记二抗(1:50)15 min，SP(1:50)15 min。以上各步骤间均以PBS缓冲液洗3次，每次5 mi n，DAB显色苏木精复染，透明封固。已知阳性切片作为阳性对照。PBS代替一抗作为阳性对 照，结果判定以细胞呈清晰棕色为p16阳性表达；细胞膜或(和)细胞质有棕色染色为CD1 5阳性表达。
, http://www.100md.com 1.4 统计分析 采用直接概率法。
2 结果
2.1 p16、CD15在结肠癌和慢性结肠炎中的表达 结肠癌组p16阳性 表达率为41.93%，明显低于对照组(90%)，差异具显著性(P<0.05)；结肠癌组CD1 5阳性表达率为67.74%，明显高于对照组，差异有显著性(P<0.05)。详见表1。
表1 p16、CD15在结肠癌和慢性结肠炎中的表达 组别
n
p16
CD15
结肠癌组
, 百拇医药
31
13(41.93)
21(67.74)
对照组
10
9(90.00)
4(40.00)
2.2 p16、CD15表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系 详见表2。表2 p16、CD15表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系(例 ，%) 组别
n
p16
CD15
, http://www.100md.com
A组
12
6(50.00)
7(58.33)
B组
19
6(31.58)
14(73.68)
p16的表达A组明显高于B组，差异具显著性(P<0.05)；CD15的表 达则A组明显低于B组，差异亦具有显著性(P<0.05)。
3 讨论
3.1 p16表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系 p16基因是重要的抑癌基因 之一，其编码产物p16蛋白通过与周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)结合，抑制CDK4/周期蛋白的D 复合物的催化活性，从而抑制细胞增生和恶性转化。p16基因的缺失及p16蛋白低表达，使得 细胞增殖程序失控，在恶性肿瘤的发生和发展中起着极为重要的作用[1～4]。本研 究结果显示，p16在结肠癌中，尤其在有侵犯、与转移等恶性生物学行为的病例中呈低水平 表达，提示p16基因的缺失及p16低表达与结肠癌的侵袭和转移行为密切相关；p16表达越低 ，发生侵犯和转移的可能性越大，预后越差。
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3.2 CD15表达与结肠癌侵袭和转移行为的关系 CD15是一种糖 蛋白，又叫粒细胞相关抗原，被选择素所识别。已有研究表明，CD15参与细胞间的信 息传递或为细胞内第2信使，可将细胞外信息传到细胞质和细胞核，调控基因表达，与肿瘤 发生及发展相关[5～7]。本结果表明CD15在有侵犯和转移的病例中呈现高表 达。提示CD15与结肠癌的侵袭和转移行为密切相关；CD15表达越高，发生侵犯 和转移的可能性越大，预后越差。
术前检测p16和CD15在结肠癌活检组织中的表达，对估计结肠癌侵袭和转移情况，指 导手术决策，以及估计预后有重要的临床应用价值。
[作者简介] 刘国清(1957-)，男，湖南 益阳人，副主任医师，主要从事普通外科工作。
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[参 考 文 献]
[1] Nobori T. Detection of the cyclin depended kinase-A inhib itor gene in multiple human cancer[J].Nature, 1994，36:753.
[2] Kamb A, Graus NA, Weaver-Feldhans J, et al. A cell cycle regul ator potentially involved in genesis of many tumor types[J]. Science, 1994 ，264:436.
[3] Thomas Y, Walter S, Casscaudra B, et al. Increased p16 levels correlate with prob alterations in human urothelial cells[J].Cancer Research , 1995，55:493.
, 百拇医药
[4] Guan RJ, Fu Y, Holt PR, et al. Association of K-ras mutations with p16 methylation in human colon cancer[J]. Gastroenterology, 1999，116 (5):1063-1071.
[5] Brooks SA, eathem AJC. Expression of the CD15 antigen (lewis x) in breast Cancer[J]. Histochem J, 1995，27(9):689.
[6] 宋长玲. 细胞粘附分子研究的某些进展[J]. 生命科学, 1994，6( 3):27.
[7] Nakamori S, Kameyama M, Tmaoka S, et al. Involvement of carbohydrate antigen sialyl lewis (x) in colorectal cancer metastasis[J]. Dis Colon Rectum, 1997，40(4):420-431.
[收稿日期]2000-02-20, http://www.100md.com