KAI1基因与胰腺癌转移的关系
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中华内科杂志 2000年第9期第39卷
作者：郭晓钟 刘民培 夏玉亭 邵晓冬 李宏宇 张丹阳 陈虹
单位：110015 沈阳军区总医院消化内科
关键词：
中华内科杂志000922 癌症转移是一种复杂的分子生物学病理改变过程。研究表明，当转移及非转移的癌细胞被融合成新的细胞杂交株时，虽仍具有肿瘤源性，但不出现转移[1]；提示抑癌基因、尤其肿瘤转移抑制基因活性的丧失，是导致肿瘤扩散和转移的分子基础。为此，我们比较了KAI1基因在胰腺癌及其转移癌中的作用。
一、材料和方法
1.病例资料：正常胰腺组织13例，其中男10例，女3例，年龄为18～47岁；胰腺癌组织37例，其中男23例，女14例，年龄为32～80岁。按肿瘤TNM分类[2]：3例Ⅰ期，10例Ⅱ期，22例Ⅲ期，2例Ⅳ期。此外，尚有来自胰腺癌转移的淋巴结20例，肝转移癌15例以及相应的正常肝组织。上述组织标本均经手术和病理学证实。
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2.KAI1地高辛探针制备：将含有500 bp的人体KAI1 cDNA，连接到PCR-Ⅱ(美国Invitrogen San Diego公司)载体上，经质粒线性化后，应用Sp6和T7聚合酶等，转录成顺译的KAI1探针。此探针以地高辛标记KAI1用于原位杂交，按Cox等人的方法将探针缩短至150 bp左右[3]。
3.原位杂交分析[3]：正常胰腺、胰腺癌组织及转移癌组织予4 μm的切片，脱蜡，脱水，置0.2 mol/L盐酸液中20 min，以2×SSC缓冲液洗涤后，用30 μg/ml(德国Bochringer, Mannheim)蛋白酶K封闭， 37℃ 15 min，以上述缓冲液洗2次，切片在60℃分别预杂交和杂交，过夜，去掉杂交液，充分洗涤, 再加标记碱性磷酸酶的地高辛抗体(美国 Sigma)。同时以RNA酶处理的组织切片做为对照。结果判定依染色颗粒浓度采用半定量分析。
4.Northern blot 分析法：按文献介绍的方法[4] 进行，结果判定采用定量分析。
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5.统计学处理：实验结果采用χ2检验分析。
二、结果
正常组织中KAI1 mRNA水平低于胰腺癌组织；胰腺癌中则出现不同程度的染色，其主要位于细胞浆内，而癌旁组织的边缘、炎症细胞及纤维组织中的KAI1 mRNA 表达较低。在Ⅰ～Ⅱ期的胰腺癌中，KAI1 mRNA的表达明显高于Ⅲ～Ⅳ期胰腺癌(P<0.05)。
在同一病例中，其原发癌的KAI1 mRNA呈弱到中度表达，而相应转移的淋巴结仅有弱或无表达。在转移癌中的淋巴细胞显示中度KAI1 mRNA表达。在肝转移癌细胞中，KAI1 mRNA水平明显低于原发癌(P<0.01)，正常肝细胞与肝转移癌周边肝细胞的KAI1 mRNA均为阳性表达。通过胰腺癌病人相关临床资料比较分析发现，KAI1基因与胰腺癌分期及有无淋巴结转移有明显相关(P<0.05)，但其表达与病人的年龄、性别、发病时间及肿瘤大小之间的差异无显著性(P>0.05)。
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讨论 胰腺癌是最易发生转移的肿瘤之一，一旦确诊，约80%的病人有淋巴结和远处器官转移;即使在能手术切除的病人中，40%也可出现淋巴结的转移。由于转移的胰腺癌病人(Ⅲ～Ⅳ期)比非转移病人(Ⅰ～Ⅱ期)生存期明显缩短，故探讨此癌转移过程的有关分子机制十分重要。
本研究的结果表明，KAI1基因在非转移的原发胰腺癌中有中度到高度的表达，而转移的原发胰腺癌呈低或无表达。与原发胰腺癌相比，其相应的淋巴结及肝转移癌中的KAI1 mRNA水平明显降低(P<0.05)。这些结果提示，KAI1 mRNA水平的降低可提高胰腺癌的转移潜能。这种转移潜能与其属于跨膜4超家族(TM4SF)的糖蛋白有关，它在细胞间的接触及相互作用中起重要作用。进一步讲，TM4SF糖蛋白可影响细胞的运动和细胞与细胞间质的相互作用，而更重要的功能是与细胞浸润和转移密切相关。这已在转移的前列腺癌中的低表达与其转移抑制的关系中得以证实[5]。
综上所述，KAI1基因是影响胰腺癌细胞转移能力的一种相关基因，可能成为胰腺癌转移潜能的一种检测指标。
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基金项目：全军95第二批课题面上项目A类(98M001)
参考文献
1，Rusciano D, Burger MM. Why do cancer cells metastasize into particular organs? Bioessays, 1992, 14:185-194.
2，HermanerP, SobinL H. TNM classification of malignant tumor. 4th ed. New York：Springer, 1992.71-73.
3，Friess H, Yamanak Y, Buchler MW, et al. Enhanced expression of transforming growth factor-β isoforms in pancreatic cancer correlates with decreased survival. Gastroenterology, 1993, 105: 1846-1856.
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4，Guo XZ, Friess H, DeMola FF, et al. KAI1, a new metastasis suppressor gene, is reduced in metastatic hepatocellular carcinoma. Hepatology , 1998,28:1481-1488.
5，Dong JT, Lamb PW, Rinker-schaeffer CW ，et al. KAI1, a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome 11p11.2. Science, 1995, 268: 884-886.
(收稿日期：1999-12-23), http://www.100md.com
单位：110015 沈阳军区总医院消化内科
关键词：
中华内科杂志000922 癌症转移是一种复杂的分子生物学病理改变过程。研究表明，当转移及非转移的癌细胞被融合成新的细胞杂交株时，虽仍具有肿瘤源性，但不出现转移[1]；提示抑癌基因、尤其肿瘤转移抑制基因活性的丧失，是导致肿瘤扩散和转移的分子基础。为此，我们比较了KAI1基因在胰腺癌及其转移癌中的作用。
一、材料和方法
1.病例资料：正常胰腺组织13例，其中男10例，女3例，年龄为18～47岁；胰腺癌组织37例，其中男23例，女14例，年龄为32～80岁。按肿瘤TNM分类[2]：3例Ⅰ期，10例Ⅱ期，22例Ⅲ期，2例Ⅳ期。此外，尚有来自胰腺癌转移的淋巴结20例，肝转移癌15例以及相应的正常肝组织。上述组织标本均经手术和病理学证实。
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2.KAI1地高辛探针制备：将含有500 bp的人体KAI1 cDNA，连接到PCR-Ⅱ(美国Invitrogen San Diego公司)载体上，经质粒线性化后，应用Sp6和T7聚合酶等，转录成顺译的KAI1探针。此探针以地高辛标记KAI1用于原位杂交，按Cox等人的方法将探针缩短至150 bp左右[3]。
3.原位杂交分析[3]：正常胰腺、胰腺癌组织及转移癌组织予4 μm的切片，脱蜡，脱水，置0.2 mol/L盐酸液中20 min，以2×SSC缓冲液洗涤后，用30 μg/ml(德国Bochringer, Mannheim)蛋白酶K封闭， 37℃ 15 min，以上述缓冲液洗2次，切片在60℃分别预杂交和杂交，过夜，去掉杂交液，充分洗涤, 再加标记碱性磷酸酶的地高辛抗体(美国 Sigma)。同时以RNA酶处理的组织切片做为对照。结果判定依染色颗粒浓度采用半定量分析。
4.Northern blot 分析法：按文献介绍的方法[4] 进行，结果判定采用定量分析。
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5.统计学处理：实验结果采用χ2检验分析。
二、结果
正常组织中KAI1 mRNA水平低于胰腺癌组织；胰腺癌中则出现不同程度的染色，其主要位于细胞浆内，而癌旁组织的边缘、炎症细胞及纤维组织中的KAI1 mRNA 表达较低。在Ⅰ～Ⅱ期的胰腺癌中，KAI1 mRNA的表达明显高于Ⅲ～Ⅳ期胰腺癌(P<0.05)。
在同一病例中，其原发癌的KAI1 mRNA呈弱到中度表达，而相应转移的淋巴结仅有弱或无表达。在转移癌中的淋巴细胞显示中度KAI1 mRNA表达。在肝转移癌细胞中，KAI1 mRNA水平明显低于原发癌(P<0.01)，正常肝细胞与肝转移癌周边肝细胞的KAI1 mRNA均为阳性表达。通过胰腺癌病人相关临床资料比较分析发现，KAI1基因与胰腺癌分期及有无淋巴结转移有明显相关(P<0.05)，但其表达与病人的年龄、性别、发病时间及肿瘤大小之间的差异无显著性(P>0.05)。
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讨论 胰腺癌是最易发生转移的肿瘤之一，一旦确诊，约80%的病人有淋巴结和远处器官转移;即使在能手术切除的病人中，40%也可出现淋巴结的转移。由于转移的胰腺癌病人(Ⅲ～Ⅳ期)比非转移病人(Ⅰ～Ⅱ期)生存期明显缩短，故探讨此癌转移过程的有关分子机制十分重要。
本研究的结果表明，KAI1基因在非转移的原发胰腺癌中有中度到高度的表达，而转移的原发胰腺癌呈低或无表达。与原发胰腺癌相比，其相应的淋巴结及肝转移癌中的KAI1 mRNA水平明显降低(P<0.05)。这些结果提示，KAI1 mRNA水平的降低可提高胰腺癌的转移潜能。这种转移潜能与其属于跨膜4超家族(TM4SF)的糖蛋白有关，它在细胞间的接触及相互作用中起重要作用。进一步讲，TM4SF糖蛋白可影响细胞的运动和细胞与细胞间质的相互作用，而更重要的功能是与细胞浸润和转移密切相关。这已在转移的前列腺癌中的低表达与其转移抑制的关系中得以证实[5]。
综上所述，KAI1基因是影响胰腺癌细胞转移能力的一种相关基因，可能成为胰腺癌转移潜能的一种检测指标。
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基金项目：全军95第二批课题面上项目A类(98M001)
参考文献
1，Rusciano D, Burger MM. Why do cancer cells metastasize into particular organs? Bioessays, 1992, 14:185-194.
2，HermanerP, SobinL H. TNM classification of malignant tumor. 4th ed. New York：Springer, 1992.71-73.
3，Friess H, Yamanak Y, Buchler MW, et al. Enhanced expression of transforming growth factor-β isoforms in pancreatic cancer correlates with decreased survival. Gastroenterology, 1993, 105: 1846-1856.
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4，Guo XZ, Friess H, DeMola FF, et al. KAI1, a new metastasis suppressor gene, is reduced in metastatic hepatocellular carcinoma. Hepatology , 1998,28:1481-1488.
5，Dong JT, Lamb PW, Rinker-schaeffer CW ，et al. KAI1, a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome 11p11.2. Science, 1995, 268: 884-886.
(收稿日期：1999-12-23), http://www.100md.com