鼻腔无色素性恶性黑色素瘤的免疫组化研究
作者：刘艳红 奚剑敏 周建华 蒋海鹰 傅春燕
单位：湖南医科大学病理学教研室(长沙 410078)
关键词：鼻肿瘤；黑色素瘤；免疫组织化学；诊断
湖南医学990608 搞要 目的 研究鼻腔无色素性恶性黑色素瘤组织中HMB45和S-100表达及其意义。方法 应用HMB45，S-100，Keratin,LCA,F8,NSE系列抗体对12例鼻腔无色素性恶性黑色素瘤进行SP免疫组化法分析。结果 12例肿瘤组织HMB45阳性率100%(12/12)，S-100 91.67%(11/12)，而Keratin,LCA,F8,NSE均呈阴性。结论 HMB45是无色素性恶性黑色素瘤的一种特异性标记物；免疫组化检测有助于恶性黑色素瘤的确诊和鉴别诊断。
, 百拇医药
Amelanotic Malignant Melanoma in Nasal Cavity：
An Immunohistochemical Study
LIU Yanhong,XI Jianming,ZHOU Jianhua,et al
Department of Pathology,Hunan Medical University,Changsha,410078
(①The Second Affiliated Hospital,Hunan College of Traditional Chinese Medicine,Changsha,410005
②The County People′s Hospital of Anhua,Anhua,413500)
, 百拇医药
Abstract Objective To study the expressions of HMB45 and S-100 as well as their significances in amelanotic malignant melanoma (AMM) of nasal cavity. Methods A series of antibodies including HMB45，S-100,keratin,LCA,F8 and NSE were used on paraffin sections in 12 cases of AMM by SP immunohistochemical methods.Results Positive rates of HMB45 and S-100 staining were 100% (12/12) and 91.67% (11/12) respectively,while none showed immunoreactivity with keratin,LCA,F8 and NSE.Conclusions HMB45 might be a specific marker for amelanotic malignant melanoma.Immunohistochemical detection is helpful for its confirmed diagnosis and differentiation.
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Key words nose neoplasms;melanoma;immunohistochemistry;diagnosis
鼻腔原发性恶性黑色素瘤少见，其临床表现无特异性，尤其是无色素性恶性黑色素瘤病例易与其它一些小细胞肿瘤混淆，易造成误诊，影响治疗。作者应用免疫组化技术SP法对鼻腔12例无色素性恶性黑色素瘤进行免疫表型标记分析，旨在探讨其抗原表达在本病的诊断和鉴别诊断中的价值。
1 材料与方法
1.1 临床资料 本组12例，男性9例，女性3例，平均年龄54(16～72)岁，发病至就诊时间1年至1年半，平均6个月。就诊时主要临床表现为鼻塞、涕中带血，头痛(6例)或鼻塞、血涕(4例)仅鼻塞(2例)。检查见鼻腔内肿块呈结节状、菜花状、息肉状，肿瘤小者约蚕豆样大小，大者充满整个鼻腔。肿块颜色呈蓝黑色、灰白色或淡红色。临床诊断为恶性黑色素瘤4例，鼻息肉5例，低分化癌2例，嗅神经母细胞瘤1例。
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1.2 标本来源 本组12例选自1990年以来本室、湖南省中医学院附属二院及安化县人民医院的病理标本。复习全部病例的临床资料，并用鼻腔的6例色素型恶性黑色素瘤，2例未分化癌，2例恶性淋巴瘤，2例嗅神经母细胞瘤，1例血管肉瘤及皮肤色素痣4例(皮内痣和交界痣各2例)作为免疫组化染色对照。
1.3 方法 全部组织均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片7张，厚4 μm，其中1张作HE染色，其余作免疫组化用。免疫组化检测病例采用SP法染色。所用抗体包括：黑色素瘤相关抗原(HMB45)，S-100蛋白(S-100)，角蛋白(Keratin)，白细胞共同抗原(LCA)，第Ⅷ因子相关抗原(F8)及神经特异性烯醇化酶(NSE)。所用试剂由福州迈新生物技术开发公司提供。
2 结果
2.1 病理组织学特点 12例瘤细胞胞浆内均未见黑色素颗粒。瘤细胞形态和结构多样，从多角形大上皮样细胞、梭形细胞、到小圆形痣细胞(小上皮样细胞)，瘤细胞排列成巢状或漩涡状。12例中，上皮样细胞为主型2例，梭形细胞为主型1例，小痣细胞为主型8例及混合型1例。由于瘤细胞形态变化多样，胞浆中未见黑色素颗粒及部分病例瘤组织较少、坏死、感染较重，仅5例病理诊断为恶性黑色素瘤，另7例分别误诊为嗅神经母细胞瘤3例、小细胞性恶性淋巴瘤2例、低分化腺癌1例及血管肉瘤1例。
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2.2 免疫组化标记 HMB45阳性产物定位于瘤细胞胞浆内；S-100阳性产物存在于胞浆和胞核。12例无色素型恶性黑色素瘤HMB45全部阳性(封四图1)，S-100呈11例阳性(封四图2)，而NSE，Keratin，LCA及F8均呈阴性；6例色素型HMB45均呈阳性，S-100呈5例阳性；4例皮肤的色素痣HMB45，S-100均呈弱阳性；其余对照病例均呈HMB45、S-100阴性，嗅神经母细胞瘤、恶性淋巴瘤、未分化癌及血管肉瘤分别呈NSE，LCA，Keratin及F8阳性。经系列抗体联合标记结合组织学特点确诊了光镜下病理诊断困难或误诊的7例。
图1 恶性黑色素瘤瘤细胞呈HMB45胞浆强阳性(SP法×400)
, 百拇医药
图2 恶性黑色素瘤瘤细胞呈S-100胞浆及胞核强阳性(SP法×400)
3 讨论
恶性黑色素瘤一般认为来源于能够产生黑色素的神经鞘细胞，是由于神经鞘细胞发生变异，色素生成和酪氨酸代谢发生异常所致。鼻腔本瘤主要表现为鼻塞、鼻衄，有时可以伴有嗅觉减退、头痛、耳鸣等症状。含色素多的肿瘤外观呈蓝黑色，结节状，菜花状，这种含色素多的肿瘤容易诊断。含色素少的或无色素的肿瘤则呈灰白色、淡红色或息肉状，这类病人在临床上很难与其它疾病如鼻息肉、血管瘤、嗅神经母细胞瘤等鉴别。本组有8例分别误诊为息肉(5例)，低分化癌(2例)，嗅神经母细胞瘤(1例)，而对照组色素型病例仅2例分别误诊为血管瘤、鼻息肉。本病的确诊主要靠病理学检查。
病理形态学上，瘤组织形态和结构变化多样。有关本病的组织学型尚无一致意见，通常根据瘤细胞形态的不同分为上皮细胞型、梭形细胞型及混合型；也可以根据瘤细胞胞浆中是否含有黑色素分为色素型和无色素型两类。色素型病例常因肿瘤外观颜色，光镜下细胞内含有黑色素等特点诊断较容易；而无色素型恶性黑色素瘤病理诊断则较困难。本瘤常因小痣样瘤细胞易与未分化癌、恶性淋巴瘤、嗅神经母细胞瘤相似，容易误诊；上皮样瘤细胞易误诊为鳞癌；瘤组织排列成腺泡状容易误诊为低分化腺癌、腺泡状横纹肌肉瘤等。本组材料中，有7例光镜下误诊为嗅神经母细胞瘤，恶性淋巴瘤，低分化腺癌及血管肉瘤，均经免疫组化检测得以确诊。对个别疑难病例或无色素型恶性黑色素瘤，则须免疫组化检测或电镜检查。电镜检查有助于本病明确诊断[1]。但基层医院较难以常规开展电镜检查项目，主要借助免疫组化检测手段。
, 百拇医药
有关恶性黑色素瘤的免疫组化研究已有一些文献报道[2～4]，多数学者认为HMB45是本病的特异性标志产物，有助于本瘤的确诊。也有报道乳腺和部分上皮组织及肿瘤可表达HMB45，这可能为假阳性[5]。对鼻腔无色素型黑色素瘤的有关报道较少，张欣等[6]报道17例鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤中，5例无色素型病例HMB45均呈阳性，S-100 3例阳性。谷化平等[7]用HMB45检测54例非鼻腔部位的恶性黑色素瘤其阳性率为100%(54/54)，无色素型病例免疫组化染色强于色素型病例。本组资料12例无色素型病例均呈HMB45阳性，S-100呈11例阳性；6例色素型病例HMB45、S-100分别是6例、5例阳性；皮肤色素痣均呈弱阳性，这与文献报道一致。S-100蛋白主要存在于神经组织、恶性黑色素瘤中，徐纪为等[4]用S-100标记诊断本病，其阳性率及特异性均低于HMB45。本组资料及文献报道均表明S-100非本瘤的特异性标记物。
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本研究还显示恶性黑色素瘤均呈LCA，Keratin，F8及NSE阴性反应，而嗅神经母细胞瘤、恶性淋巴瘤、未分化癌及血管肉瘤分别呈较为特异性标记物NSE，LCA，Keratin及F8阳性反应。因此，可认为HMB45是鼻腔恶性黑色素瘤的特异性标记物，尤其是有助于无色素型病例的确诊。
参考文献
1 姜加维，肖 欣，李德中.鼻中隔恶性黑色素瘤电镜观察.中华耳鼻咽喉科杂志，1989，24(1)：14
2 Ordonez NG,JiXL,Hickey RC.Comparison of HMB45 monoclonal antibody and S-100 protein in the immunohistochemical diagnosis of melanoma.Am J Clin Pathol,1988,90:385～387
, 百拇医药
3 Leong AS-Y,Millos J.An assessment of a melanoma-specific antibody (HMB45) and other immunohistochemical markers of malignant melanoma in paraffin-embedded tissues.Surg Pathol,1989,2:137～138
4 徐纪为，陈丽华，王培基，等.原发性鼻粘膜恶性黑色素瘤病理和免疫组化观察.中华耳鼻咽喉科杂志，1995，30(4)：98～100
5 Bonetti F.Breast carcinoma positive for melanoma marker (HMB45):HMB45 immunoreactivity in normal and neoplastic breast.Am J Clin Pathol,1989,92:92～93
6 张 欣，周建华，肖健云，等.鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤的免疫组化研究与临床观察.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志，1999，5(1)：32～34
7 谷化平，苏 红，李春光，等.HMB45单克隆抗体在恶性黑色素瘤诊断中的应用.中华皮肤科杂志，1996，29(10)：52～53
(19990614 收稿), 百拇医药
单位：湖南医科大学病理学教研室(长沙 410078)
关键词：鼻肿瘤；黑色素瘤；免疫组织化学；诊断
湖南医学990608 搞要 目的 研究鼻腔无色素性恶性黑色素瘤组织中HMB45和S-100表达及其意义。方法 应用HMB45，S-100，Keratin,LCA,F8,NSE系列抗体对12例鼻腔无色素性恶性黑色素瘤进行SP免疫组化法分析。结果 12例肿瘤组织HMB45阳性率100%(12/12)，S-100 91.67%(11/12)，而Keratin,LCA,F8,NSE均呈阴性。结论 HMB45是无色素性恶性黑色素瘤的一种特异性标记物；免疫组化检测有助于恶性黑色素瘤的确诊和鉴别诊断。
, 百拇医药
Amelanotic Malignant Melanoma in Nasal Cavity：
An Immunohistochemical Study
LIU Yanhong,XI Jianming,ZHOU Jianhua,et al
Department of Pathology,Hunan Medical University,Changsha,410078
(①The Second Affiliated Hospital,Hunan College of Traditional Chinese Medicine,Changsha,410005
②The County People′s Hospital of Anhua,Anhua,413500)
, 百拇医药
Abstract Objective To study the expressions of HMB45 and S-100 as well as their significances in amelanotic malignant melanoma (AMM) of nasal cavity. Methods A series of antibodies including HMB45，S-100,keratin,LCA,F8 and NSE were used on paraffin sections in 12 cases of AMM by SP immunohistochemical methods.Results Positive rates of HMB45 and S-100 staining were 100% (12/12) and 91.67% (11/12) respectively,while none showed immunoreactivity with keratin,LCA,F8 and NSE.Conclusions HMB45 might be a specific marker for amelanotic malignant melanoma.Immunohistochemical detection is helpful for its confirmed diagnosis and differentiation.
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Key words nose neoplasms;melanoma;immunohistochemistry;diagnosis
鼻腔原发性恶性黑色素瘤少见，其临床表现无特异性，尤其是无色素性恶性黑色素瘤病例易与其它一些小细胞肿瘤混淆，易造成误诊，影响治疗。作者应用免疫组化技术SP法对鼻腔12例无色素性恶性黑色素瘤进行免疫表型标记分析，旨在探讨其抗原表达在本病的诊断和鉴别诊断中的价值。
1 材料与方法
1.1 临床资料 本组12例，男性9例，女性3例，平均年龄54(16～72)岁，发病至就诊时间1年至1年半，平均6个月。就诊时主要临床表现为鼻塞、涕中带血，头痛(6例)或鼻塞、血涕(4例)仅鼻塞(2例)。检查见鼻腔内肿块呈结节状、菜花状、息肉状，肿瘤小者约蚕豆样大小，大者充满整个鼻腔。肿块颜色呈蓝黑色、灰白色或淡红色。临床诊断为恶性黑色素瘤4例，鼻息肉5例，低分化癌2例，嗅神经母细胞瘤1例。
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1.2 标本来源 本组12例选自1990年以来本室、湖南省中医学院附属二院及安化县人民医院的病理标本。复习全部病例的临床资料，并用鼻腔的6例色素型恶性黑色素瘤，2例未分化癌，2例恶性淋巴瘤，2例嗅神经母细胞瘤，1例血管肉瘤及皮肤色素痣4例(皮内痣和交界痣各2例)作为免疫组化染色对照。
1.3 方法 全部组织均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片7张，厚4 μm，其中1张作HE染色，其余作免疫组化用。免疫组化检测病例采用SP法染色。所用抗体包括：黑色素瘤相关抗原(HMB45)，S-100蛋白(S-100)，角蛋白(Keratin)，白细胞共同抗原(LCA)，第Ⅷ因子相关抗原(F8)及神经特异性烯醇化酶(NSE)。所用试剂由福州迈新生物技术开发公司提供。
2 结果
2.1 病理组织学特点 12例瘤细胞胞浆内均未见黑色素颗粒。瘤细胞形态和结构多样，从多角形大上皮样细胞、梭形细胞、到小圆形痣细胞(小上皮样细胞)，瘤细胞排列成巢状或漩涡状。12例中，上皮样细胞为主型2例，梭形细胞为主型1例，小痣细胞为主型8例及混合型1例。由于瘤细胞形态变化多样，胞浆中未见黑色素颗粒及部分病例瘤组织较少、坏死、感染较重，仅5例病理诊断为恶性黑色素瘤，另7例分别误诊为嗅神经母细胞瘤3例、小细胞性恶性淋巴瘤2例、低分化腺癌1例及血管肉瘤1例。
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2.2 免疫组化标记 HMB45阳性产物定位于瘤细胞胞浆内；S-100阳性产物存在于胞浆和胞核。12例无色素型恶性黑色素瘤HMB45全部阳性(封四图1)，S-100呈11例阳性(封四图2)，而NSE，Keratin，LCA及F8均呈阴性；6例色素型HMB45均呈阳性，S-100呈5例阳性；4例皮肤的色素痣HMB45，S-100均呈弱阳性；其余对照病例均呈HMB45、S-100阴性，嗅神经母细胞瘤、恶性淋巴瘤、未分化癌及血管肉瘤分别呈NSE，LCA，Keratin及F8阳性。经系列抗体联合标记结合组织学特点确诊了光镜下病理诊断困难或误诊的7例。
图1 恶性黑色素瘤瘤细胞呈HMB45胞浆强阳性(SP法×400)
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图2 恶性黑色素瘤瘤细胞呈S-100胞浆及胞核强阳性(SP法×400)
3 讨论
恶性黑色素瘤一般认为来源于能够产生黑色素的神经鞘细胞，是由于神经鞘细胞发生变异，色素生成和酪氨酸代谢发生异常所致。鼻腔本瘤主要表现为鼻塞、鼻衄，有时可以伴有嗅觉减退、头痛、耳鸣等症状。含色素多的肿瘤外观呈蓝黑色，结节状，菜花状，这种含色素多的肿瘤容易诊断。含色素少的或无色素的肿瘤则呈灰白色、淡红色或息肉状，这类病人在临床上很难与其它疾病如鼻息肉、血管瘤、嗅神经母细胞瘤等鉴别。本组有8例分别误诊为息肉(5例)，低分化癌(2例)，嗅神经母细胞瘤(1例)，而对照组色素型病例仅2例分别误诊为血管瘤、鼻息肉。本病的确诊主要靠病理学检查。
病理形态学上，瘤组织形态和结构变化多样。有关本病的组织学型尚无一致意见，通常根据瘤细胞形态的不同分为上皮细胞型、梭形细胞型及混合型；也可以根据瘤细胞胞浆中是否含有黑色素分为色素型和无色素型两类。色素型病例常因肿瘤外观颜色，光镜下细胞内含有黑色素等特点诊断较容易；而无色素型恶性黑色素瘤病理诊断则较困难。本瘤常因小痣样瘤细胞易与未分化癌、恶性淋巴瘤、嗅神经母细胞瘤相似，容易误诊；上皮样瘤细胞易误诊为鳞癌；瘤组织排列成腺泡状容易误诊为低分化腺癌、腺泡状横纹肌肉瘤等。本组材料中，有7例光镜下误诊为嗅神经母细胞瘤，恶性淋巴瘤，低分化腺癌及血管肉瘤，均经免疫组化检测得以确诊。对个别疑难病例或无色素型恶性黑色素瘤，则须免疫组化检测或电镜检查。电镜检查有助于本病明确诊断[1]。但基层医院较难以常规开展电镜检查项目，主要借助免疫组化检测手段。
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有关恶性黑色素瘤的免疫组化研究已有一些文献报道[2～4]，多数学者认为HMB45是本病的特异性标志产物，有助于本瘤的确诊。也有报道乳腺和部分上皮组织及肿瘤可表达HMB45，这可能为假阳性[5]。对鼻腔无色素型黑色素瘤的有关报道较少，张欣等[6]报道17例鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤中，5例无色素型病例HMB45均呈阳性，S-100 3例阳性。谷化平等[7]用HMB45检测54例非鼻腔部位的恶性黑色素瘤其阳性率为100%(54/54)，无色素型病例免疫组化染色强于色素型病例。本组资料12例无色素型病例均呈HMB45阳性，S-100呈11例阳性；6例色素型病例HMB45、S-100分别是6例、5例阳性；皮肤色素痣均呈弱阳性，这与文献报道一致。S-100蛋白主要存在于神经组织、恶性黑色素瘤中，徐纪为等[4]用S-100标记诊断本病，其阳性率及特异性均低于HMB45。本组资料及文献报道均表明S-100非本瘤的特异性标记物。
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本研究还显示恶性黑色素瘤均呈LCA，Keratin，F8及NSE阴性反应，而嗅神经母细胞瘤、恶性淋巴瘤、未分化癌及血管肉瘤分别呈较为特异性标记物NSE，LCA，Keratin及F8阳性反应。因此，可认为HMB45是鼻腔恶性黑色素瘤的特异性标记物，尤其是有助于无色素型病例的确诊。
参考文献
1 姜加维，肖 欣，李德中.鼻中隔恶性黑色素瘤电镜观察.中华耳鼻咽喉科杂志，1989，24(1)：14
2 Ordonez NG,JiXL,Hickey RC.Comparison of HMB45 monoclonal antibody and S-100 protein in the immunohistochemical diagnosis of melanoma.Am J Clin Pathol,1988,90:385～387
, 百拇医药
3 Leong AS-Y,Millos J.An assessment of a melanoma-specific antibody (HMB45) and other immunohistochemical markers of malignant melanoma in paraffin-embedded tissues.Surg Pathol,1989,2:137～138
4 徐纪为，陈丽华，王培基，等.原发性鼻粘膜恶性黑色素瘤病理和免疫组化观察.中华耳鼻咽喉科杂志，1995，30(4)：98～100
5 Bonetti F.Breast carcinoma positive for melanoma marker (HMB45):HMB45 immunoreactivity in normal and neoplastic breast.Am J Clin Pathol,1989,92:92～93
6 张 欣，周建华，肖健云，等.鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤的免疫组化研究与临床观察.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志，1999，5(1)：32～34
7 谷化平，苏 红，李春光，等.HMB45单克隆抗体在恶性黑色素瘤诊断中的应用.中华皮肤科杂志，1996，29(10)：52～53
(19990614 收稿), 百拇医药