比索洛尔胶囊与片剂的生物等效性研究
作者：陈鹭颖 刘锡钧 杨正管 王庆彪 刘 莹 裴仁九 翁东明
单位：南京军区福州总医院
关键词：比索洛尔；高效液相色谱法；生物等效性；相对生物利用度
摘要 本研究对比观察比索洛尔胶囊摘要 本研究对比观察比索洛尔胶囊(A)和片剂(B)在10名中国男性健康志愿者体内的相对生物利用度及其有关主要参数均值，以判定两者是否生物等效。采用二期交叉设计，血药浓度用HPLC法测定。结果表明A/B的平均相对生物利用度为100.1±18.7%，采用方差及双单侧t检验进行统计学分析，两者的AUC，Tmax，Cmax均无显著性差异(P>0.05)，故上述两种制剂具有生物等效性。结果也提示不同个体对比索洛尔的吸收存在较大的个体差异。
Study on the Bioequivalence of Bisoprolol Capsules and
, http://www.100md.com
Tablets in Healthy Volunteers
Chen Luying，Liu Xijun,Yang Zhengguang，Wang Qingbiao，Liu Ying，Pei Renjiu，Weng Dongming
(Department of Clinical Pharmacology，Fuzhou General
Hospital of Armyed Forces of Nanjing，Fuzhou)
Abstract The bioequivalence of bisoprolol capsules and tablets was studied in 10 Chinese healthy vo-lunteers.A randomized two-way crossover study design was adopted in the study.Bisoprolol concentrations in plasma were detected by HPLC.The results showed that the relative bioavailability of tested bisoprolol was 100.1±18.7%.The relult of statistical analysis showed that the two products were bioequivalent.The study also indicated that an inter-subject variability for absorption of the drug exists.
, 百拇医药
Key words Bisoprolol HPLC Bioequivalence Bioavailability
比索洛尔(Bisoprolol)是继美托洛尔、阿替洛尔和普萘洛尔之后的又一新型β-受体阻滞剂，它具有药理作用强、毒副反应小及药效持续时间长等优点，目前国外已广泛用于高血压、心绞痛及心动过速的治疗，国内原料和片剂已获卫生部新药证书，胶囊也已研制成功。国内不同制剂间的差异，尚未见报道。为此本文在建立高效液相色谱-荧光检测法测定比索洛尔血药浓度的基础上，对国产比索洛尔胶囊和片剂的生物等效性进行研究。以期为临床用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 比索洛尔标准品(含量99.5%)，比索洛尔胶囊，批号980205，均由西安有生医药研究所提供。比索洛尔片，批号961106，北京四环制药厂产品。内标催醒胺，军事医学科学院提供；乙腈为色谱纯；甲醇，乙醚，氢氧化钠，磷酸均为分析纯。
, 百拇医药
1.2 仪器 Waters高效液相色谱系统(包括510型高压梯度泵，470型可变波长荧光检测器；U6K型手动进样阀，MillenniumTM2010色谱专家系统及数据处理软件)；XW-80旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)；HH.S112电热恒温水浴(江苏省医疗器械厂)。
1.3 受试者与试验方法 10名男性健康志愿受试者，体重60.6±5.25 kg，年龄21～25岁，经生化检验未见肝、肾功能异常，心电图检查无异常。实验前1周及整个实验过程中禁服其它药物，实验期间统一饮食并禁烟、酒、茶和咖啡。10名受试者随机分为两组，采用随机自身交叉服用胶囊和片剂。中间药物清洗期为1周。受试者空腹12 h后，于次日早晨6∶00服用胶囊(2.5 mg×4粒)或片剂(5 mg×2片)，200 ml温开水送服，服药2 h后统一进食。分别于服药前及服药后0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，10.0，13.0，18.0，24.0和35.0 h，由肘静脉取血5 ml于肝素化试管中，离心，取2 ml血浆置-40℃冰箱中待测。
, 百拇医药
1.4 HPLC测定方法 流动相为乙腈：甲醇：0.09 mol.L-1磷酸∶水(34∶10∶6∶50 v/v)，流速0.9 ml.min-1，色谱柱为Nova-pak C18 4.0 mm×15 cm4 μm分析柱和C1810 μm预柱，柱温25℃，荧光检测波长232/300 nm(Ex/Em)。肝素化血浆2 ml，加内标0.025 ml(19.69 mg.L-1，碱化乙醚提取，氮气吹干，流动相重组，进样[1]。
血浆中比索洛尔线性方程为H＝-0.3108+0.6999 C(n＝6，r＝0.9998)。日内和日间变异系数分别为2.70±1.74%，7.93±1.92%，3种浓度的方法回收率分别为105.43±3.64%，95.81±4.07%，98.34±5.05%。最小检测限为2 μg.L-1(N/S＝3)。
, 百拇医药
1.5 数据处理[2，3]将血药浓度-时间数据在半对数图上作图，显示二房室特征，用PKBP-N\-1程序(南京军区南京总医院药理科提供)按二房室模型在IBM-486微机上进行曲线拟合。参数求算采用对各个体分别进行曲线拟合，取均值±SD。非房室模型性参数(no-compartmental parameters) 采用统计矩方法分析。
生物利用度估算 本实验估算的是比索洛尔胶囊的相对生物利用度，以北京四环制药厂生产的比索洛尔片为参比。最后结果取10名受试者的生物利用度均值±SD，生物利用度计算公式为：
F＝AUC胶囊/AUC片×100%
统计学处理 采用交叉实验设计的方差分析法对实验结果进行统计分析。对Cmax和AUC先进行对数转换，再进行统计学处理。
, 百拇医药 2 结 果
2.1 血药浓度 10名志愿者单剂量口服比索洛尔胶囊和片剂后的平均血药浓度-时间变化曲线(见图1)。
图1 10名健康志愿者口服比索洛尔后平均药-时曲线
由图1可见，单剂量口服10 mg比索洛尔胶囊，与片剂比较，血药浓度达峰较快，吸收速率常数较大，这可能由于片剂存在一个崩解时间而使其吸收比胶囊剂稍慢的缘故，胶囊剂和片剂的峰浓度(Cmax之间没有显著差异。
2.2 比索洛尔胶囊药代动力学及其相对生物利用度 按一级吸收二房室模型估算的单剂量口服10 mg比索洛尔胶囊和10 mg比索洛尔片剂的药代动力学参数(见表1)。
, http://www.100md.com
表1 健康志愿者口服比索洛尔后的药代动力学参数
(均值±SD，n＝10)
Pharameters
Capsule
Tablet
Cmax(μg.L-1)
63.27±16.05
57.49±10.49
Tmax(h)
2.05±1.89
2.20±1.75
, http://www.100md.com
T1/2α(h)
2.49±3.34
2.97±1.78
T1/2β(h)
12.79±2.86
13.11±3.93
T1/2Ka(h)
0.71±1.12
0.44±0.29
V.C/F(L)
138.46±47.09
, 百拇医药
153.32±31.60
AUC(S0)(μg.h.L-1
788.50±105.02
795.22±111.56
2.3 方差分析及双单侧检验 分别对Cmax，AUC0～∞，AUC0～35和AUC35～∞进行方差分析(见表2～5)。
表2 Cmax 方 差 分 析 统 计 结 果
方差来源
自由度(df)
, http://www.100md.com
SS
MS
F
F0.05(df，df误)
受试者
9
0.702
0.078
5.387
3.388
周期间
1
0.069
, 百拇医药
0.069
4.793
5.318\+*
处方间
1
0.035
0.035
2.435
5.318\+*
误 差
8
0.116
0.014
, 百拇医药
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异
上限＝1.202，下限＝0.984
结论：因胶囊Cmax的90%可信区间落在片剂Cmax的70%～145%之间，故两者为等效产品。
表3 AUC0～∞方差分析统计结果
方差来源
自由度(df)
, 百拇医药
SS
MS
F
F0.05(df，df误)
受试者
9
0.206
0.023
1.290
3.388*
周期间
1
0.034
, 百拇医药
0.034
1.937
5.318*
处方间
1
0.001
0.001
0.060
5.318*
误 差
8
0.142
0.018
, 百拇医药
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异双单侧检验
T1＝6.232 T2＝5.991 t1-0.05(df误差)＝0.065
结论：因T1>t1-0.05(df误差)且T2>t1-0.05(df误差)，故片剂与胶囊等效。
90%可信区间 上限＝1.134，下限＝0.908
结论：因胶囊AUC0～∞的90%可信区间落在片剂AUC0～∞的80%～125%之间，故两者为等效产品。
表4 AUC0～35方 差 分 析 统 计 结 果
, 百拇医药
方差来源
自由度(df)
SS
MS
F
F0.05(df，df误)
受试者
9
0.257
0.029
1.674
3.388*
周期间
, 百拇医药
1
0.038
0.038
2.208
5.318*
处方间
1
0.002
0.002
0.127
5.318*
误 差
8
, 百拇医药
0.136
0.017
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异
表5 AUC35～∞方 差 分 析 统 计 结 果
方差来源
自由度(df)
SS
MS
MS
F0.05(df，df误)
, http://www.100md.com
受试者
9
0.922
0.102
0.566
3.388*
周期间
1
0.020
0.020
0.108
5.318*
处方间
, 百拇医药
1
0.073
0.073
0.403
5.318*
误 差
8
1.448
0.181
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异3 讨论
由上述统计可见，体内主要药动学参数Cmax和AUC0～∞二者之间没有明显差异，经对Cmax(实际测定值)、AUC0～35和AUC35～∞作方差分析，除受试者间有显著差异外(服用片剂和胶囊的受试者间均有统计学差异，这可能与比索洛尔的亲脂性较强，呈现开放二室处置模型有关)，周期间和处方间无统计学差异；对Cmax和AUC0～∞方差分析后再行双单侧检验，结果Cmax的可信区间上限为120.2%下限为98.4%，落在片剂Cmax的70%～145%之间，AUC0～∞的可信区间上限为113.4%下限为90.8%，落在片剂AUC0～∞的80%～125%之间，二者为生物等效。
, 百拇医药
实验结果提示，受试者服用片剂和胶囊剂后，经方差分析的统计学处理均存在个体差异，说明比索洛尔口服后对不同的个体其最大峰浓度值有明显的差异，临床应用该药治疗高血压等疾病时，需要根据临床疗效，调整合适的剂量，尽量做到治疗的个体化。
参考文献
1.陈鹭颖等：RP-HPLC法测定人血浆中富马酸比索洛尔的浓度 海峡药学1999；11(1)∶39
2.黄圣凯等：生物等效性评价的统计方法 中国药学杂志1994；29(5)：312
3.韩可勤等：生物等效性评价中数据对数变换后的一些统计问题 中国临床药理学杂志1994；10(2)：1, 百拇医药
单位：南京军区福州总医院
关键词：比索洛尔；高效液相色谱法；生物等效性；相对生物利用度
摘要 本研究对比观察比索洛尔胶囊摘要 本研究对比观察比索洛尔胶囊(A)和片剂(B)在10名中国男性健康志愿者体内的相对生物利用度及其有关主要参数均值，以判定两者是否生物等效。采用二期交叉设计，血药浓度用HPLC法测定。结果表明A/B的平均相对生物利用度为100.1±18.7%，采用方差及双单侧t检验进行统计学分析，两者的AUC，Tmax，Cmax均无显著性差异(P>0.05)，故上述两种制剂具有生物等效性。结果也提示不同个体对比索洛尔的吸收存在较大的个体差异。
Study on the Bioequivalence of Bisoprolol Capsules and
, http://www.100md.com
Tablets in Healthy Volunteers
Chen Luying，Liu Xijun,Yang Zhengguang，Wang Qingbiao，Liu Ying，Pei Renjiu，Weng Dongming
(Department of Clinical Pharmacology，Fuzhou General
Hospital of Armyed Forces of Nanjing，Fuzhou)
Abstract The bioequivalence of bisoprolol capsules and tablets was studied in 10 Chinese healthy vo-lunteers.A randomized two-way crossover study design was adopted in the study.Bisoprolol concentrations in plasma were detected by HPLC.The results showed that the relative bioavailability of tested bisoprolol was 100.1±18.7%.The relult of statistical analysis showed that the two products were bioequivalent.The study also indicated that an inter-subject variability for absorption of the drug exists.
, 百拇医药
Key words Bisoprolol HPLC Bioequivalence Bioavailability
比索洛尔(Bisoprolol)是继美托洛尔、阿替洛尔和普萘洛尔之后的又一新型β-受体阻滞剂，它具有药理作用强、毒副反应小及药效持续时间长等优点，目前国外已广泛用于高血压、心绞痛及心动过速的治疗，国内原料和片剂已获卫生部新药证书，胶囊也已研制成功。国内不同制剂间的差异，尚未见报道。为此本文在建立高效液相色谱-荧光检测法测定比索洛尔血药浓度的基础上，对国产比索洛尔胶囊和片剂的生物等效性进行研究。以期为临床用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 比索洛尔标准品(含量99.5%)，比索洛尔胶囊，批号980205，均由西安有生医药研究所提供。比索洛尔片，批号961106，北京四环制药厂产品。内标催醒胺，军事医学科学院提供；乙腈为色谱纯；甲醇，乙醚，氢氧化钠，磷酸均为分析纯。
, 百拇医药
1.2 仪器 Waters高效液相色谱系统(包括510型高压梯度泵，470型可变波长荧光检测器；U6K型手动进样阀，MillenniumTM2010色谱专家系统及数据处理软件)；XW-80旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)；HH.S112电热恒温水浴(江苏省医疗器械厂)。
1.3 受试者与试验方法 10名男性健康志愿受试者，体重60.6±5.25 kg，年龄21～25岁，经生化检验未见肝、肾功能异常，心电图检查无异常。实验前1周及整个实验过程中禁服其它药物，实验期间统一饮食并禁烟、酒、茶和咖啡。10名受试者随机分为两组，采用随机自身交叉服用胶囊和片剂。中间药物清洗期为1周。受试者空腹12 h后，于次日早晨6∶00服用胶囊(2.5 mg×4粒)或片剂(5 mg×2片)，200 ml温开水送服，服药2 h后统一进食。分别于服药前及服药后0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，10.0，13.0，18.0，24.0和35.0 h，由肘静脉取血5 ml于肝素化试管中，离心，取2 ml血浆置-40℃冰箱中待测。
, 百拇医药
1.4 HPLC测定方法 流动相为乙腈：甲醇：0.09 mol.L-1磷酸∶水(34∶10∶6∶50 v/v)，流速0.9 ml.min-1，色谱柱为Nova-pak C18 4.0 mm×15 cm4 μm分析柱和C1810 μm预柱，柱温25℃，荧光检测波长232/300 nm(Ex/Em)。肝素化血浆2 ml，加内标0.025 ml(19.69 mg.L-1，碱化乙醚提取，氮气吹干，流动相重组，进样[1]。
血浆中比索洛尔线性方程为H＝-0.3108+0.6999 C(n＝6，r＝0.9998)。日内和日间变异系数分别为2.70±1.74%，7.93±1.92%，3种浓度的方法回收率分别为105.43±3.64%，95.81±4.07%，98.34±5.05%。最小检测限为2 μg.L-1(N/S＝3)。
, 百拇医药
1.5 数据处理[2，3]将血药浓度-时间数据在半对数图上作图，显示二房室特征，用PKBP-N\-1程序(南京军区南京总医院药理科提供)按二房室模型在IBM-486微机上进行曲线拟合。参数求算采用对各个体分别进行曲线拟合，取均值±SD。非房室模型性参数(no-compartmental parameters) 采用统计矩方法分析。
生物利用度估算 本实验估算的是比索洛尔胶囊的相对生物利用度，以北京四环制药厂生产的比索洛尔片为参比。最后结果取10名受试者的生物利用度均值±SD，生物利用度计算公式为：
F＝AUC胶囊/AUC片×100%
统计学处理 采用交叉实验设计的方差分析法对实验结果进行统计分析。对Cmax和AUC先进行对数转换，再进行统计学处理。
, 百拇医药 2 结 果
2.1 血药浓度 10名志愿者单剂量口服比索洛尔胶囊和片剂后的平均血药浓度-时间变化曲线(见图1)。
图1 10名健康志愿者口服比索洛尔后平均药-时曲线
由图1可见，单剂量口服10 mg比索洛尔胶囊，与片剂比较，血药浓度达峰较快，吸收速率常数较大，这可能由于片剂存在一个崩解时间而使其吸收比胶囊剂稍慢的缘故，胶囊剂和片剂的峰浓度(Cmax之间没有显著差异。
2.2 比索洛尔胶囊药代动力学及其相对生物利用度 按一级吸收二房室模型估算的单剂量口服10 mg比索洛尔胶囊和10 mg比索洛尔片剂的药代动力学参数(见表1)。
, http://www.100md.com
表1 健康志愿者口服比索洛尔后的药代动力学参数
(均值±SD，n＝10)
Pharameters
Capsule
Tablet
Cmax(μg.L-1)
63.27±16.05
57.49±10.49
Tmax(h)
2.05±1.89
2.20±1.75
, http://www.100md.com
T1/2α(h)
2.49±3.34
2.97±1.78
T1/2β(h)
12.79±2.86
13.11±3.93
T1/2Ka(h)
0.71±1.12
0.44±0.29
V.C/F(L)
138.46±47.09
, 百拇医药
153.32±31.60
AUC(S0)(μg.h.L-1
788.50±105.02
795.22±111.56
2.3 方差分析及双单侧检验 分别对Cmax，AUC0～∞，AUC0～35和AUC35～∞进行方差分析(见表2～5)。
表2 Cmax 方 差 分 析 统 计 结 果
方差来源
自由度(df)
, http://www.100md.com
SS
MS
F
F0.05(df，df误)
受试者
9
0.702
0.078
5.387
3.388
周期间
1
0.069
, 百拇医药
0.069
4.793
5.318\+*
处方间
1
0.035
0.035
2.435
5.318\+*
误 差
8
0.116
0.014
, 百拇医药
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异
上限＝1.202，下限＝0.984
结论：因胶囊Cmax的90%可信区间落在片剂Cmax的70%～145%之间，故两者为等效产品。
表3 AUC0～∞方差分析统计结果
方差来源
自由度(df)
, 百拇医药
SS
MS
F
F0.05(df，df误)
受试者
9
0.206
0.023
1.290
3.388*
周期间
1
0.034
, 百拇医药
0.034
1.937
5.318*
处方间
1
0.001
0.001
0.060
5.318*
误 差
8
0.142
0.018
, 百拇医药
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异双单侧检验
T1＝6.232 T2＝5.991 t1-0.05(df误差)＝0.065
结论：因T1>t1-0.05(df误差)且T2>t1-0.05(df误差)，故片剂与胶囊等效。
90%可信区间 上限＝1.134，下限＝0.908
结论：因胶囊AUC0～∞的90%可信区间落在片剂AUC0～∞的80%～125%之间，故两者为等效产品。
表4 AUC0～35方 差 分 析 统 计 结 果
, 百拇医药
方差来源
自由度(df)
SS
MS
F
F0.05(df，df误)
受试者
9
0.257
0.029
1.674
3.388*
周期间
, 百拇医药
1
0.038
0.038
2.208
5.318*
处方间
1
0.002
0.002
0.127
5.318*
误 差
8
, 百拇医药
0.136
0.017
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异
表5 AUC35～∞方 差 分 析 统 计 结 果
方差来源
自由度(df)
SS
MS
MS
F0.05(df，df误)
, http://www.100md.com
受试者
9
0.922
0.102
0.566
3.388*
周期间
1
0.020
0.020
0.108
5.318*
处方间
, 百拇医药
1
0.073
0.073
0.403
5.318*
误 差
8
1.448
0.181
总变异
19
* P>0.05与片剂相比无统计学差异3 讨论
由上述统计可见，体内主要药动学参数Cmax和AUC0～∞二者之间没有明显差异，经对Cmax(实际测定值)、AUC0～35和AUC35～∞作方差分析，除受试者间有显著差异外(服用片剂和胶囊的受试者间均有统计学差异，这可能与比索洛尔的亲脂性较强，呈现开放二室处置模型有关)，周期间和处方间无统计学差异；对Cmax和AUC0～∞方差分析后再行双单侧检验，结果Cmax的可信区间上限为120.2%下限为98.4%，落在片剂Cmax的70%～145%之间，AUC0～∞的可信区间上限为113.4%下限为90.8%，落在片剂AUC0～∞的80%～125%之间，二者为生物等效。
, 百拇医药
实验结果提示，受试者服用片剂和胶囊剂后，经方差分析的统计学处理均存在个体差异，说明比索洛尔口服后对不同的个体其最大峰浓度值有明显的差异，临床应用该药治疗高血压等疾病时，需要根据临床疗效，调整合适的剂量，尽量做到治疗的个体化。
参考文献
1.陈鹭颖等：RP-HPLC法测定人血浆中富马酸比索洛尔的浓度 海峡药学1999；11(1)∶39
2.黄圣凯等：生物等效性评价的统计方法 中国药学杂志1994；29(5)：312
3.韩可勤等：生物等效性评价中数据对数变换后的一些统计问题 中国临床药理学杂志1994；10(2)：1, 百拇医药