不明原因早期自然流产患者蜕膜巨噬细胞及白细胞介素1活性的研究
作者：崔澂 王慧贤 杨彦忠 王惠兰 郝淑维
单位：崔澂050081 石家庄，解放军白求恩医学高等专科学校微生物及寄生虫学教研室；王慧贤 河北医科大学基础医学院微生物及免疫学教研室；杨彦忠，王惠兰 第二医院；郝淑维 第四医院
关键词：
中华妇产科杂志/991120 正常妊娠尤其是孕12周内，蜕膜中由各种细胞因子、激素及蛋白类物质构成的旁分泌或自分泌网络系统的平衡，对胚胎的生长发育极其重要，一旦其独特的免疫微环境遭到破坏，就可能导致流产等不良后果[1]。本研究通过观察正常孕妇及不明原因早期自然流产患者蜕膜中巨噬细胞数量及诱生白细胞介素1(IL-1)活性的变化，探讨疾病的免疫学发病机理。
一、资料与方法
1.研究对象：对照组：健康早孕妇女，未使用任何激素类药物，宫颈、阴道无急性及慢性炎症，未放置宫内节育器，无异常孕育史，要求人工流产者，共25例。自然流产组：排除各种临床致病因素，3个月内未使用任何激素类药物，未放置宫内节育器，无异常孕育史的早期自然流产患者，共25例。两组孕妇年龄 25～35岁。均取其蜕膜组织检查。
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2.标本采集及细胞分离：无菌条件下刮取蜕膜，立即用冷 Hanks液仔细冲洗，剪碎并加入含0.25%胰蛋白酶、0.1%胶原酶、0.1%透明质酸酶的消化液，经37℃水浴2小时收集混合单个细胞悬液，再以淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，台盼蓝排除法测细胞活力>95%后，加入常规RPMI-1640完全培养液，调整细胞浓度为2×106/ml，37℃、5%二氧化碳温箱中斜置贴壁孵育1小时。
3.光镜观察：每组随机抽取 10个标本，将混合单个细胞的悬液离心涂片，经苏木精-伊红染色，油镜下观察蜕膜中的细胞类型，计数200个细胞，计算巨噬细胞所占百分率。
4. IL-1的诱生及其活性检测[2]：应用脂多糖刺激贴壁细胞，按小鼠胸腺细胞增殖及3H-TdR掺入法检测诱生IL-1活性，以 FJ-2115型自动β闪烁液计数仪测定掺入3H-TdR的每分脉冲数(counts per minute,cpm)。根据cpm值判定样品中IL-1活性。
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5. 统计学处理：所有数据均以
±s表示；进行方差齐性检验后，采用成组设计两样本均数比较的t或t′检验。
二、结果
1.蜕膜中巨噬细胞百分率比较：两组蜕膜中均可观察到巨噬细胞，其中对照组为(18.00±3.35)%，自然流产组为(16.10±3.32)%，两组比较，差异无显著性(P>0.05)。
2.诱生IL-1活性的比较：对照组与自然流产组cpm值分别为5 057.20±417.35、 6 943.04±498.80，自然流产组诱生IL-1活性增强(P<0.0005)。
三、讨论
1. 巨噬细胞及IL-1在妊娠过程中的作用：正常妊娠早期，蜕膜中含有大量免?疫相关细胞，其中约19%为巨噬细胞，主要来源于外周血单核细胞。这类细胞在妊娠过程中，表达执行抗原递呈和杀伤靶细胞功能的活化标志，能有效地清除病原微生物及异常细胞，保护胎儿免受感染；还可产生胶原酶、弹性蛋白酶、一氧化氮诱生酶等，有利于胎儿生长所需的组织重建，并可保持子宫肌肉松弛[3]。
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蜕膜中的IL-1主要由活化的巨噬细胞产生，正常分泌量的IL-1可通过调节孕妇组织中人绒毛膜促性腺激素、孕酮、胎盘催乳素、前列腺素E2、肾素、金属蛋白酶等物质的水平及活性，阻止子宫内膜基质细胞的过度蜕膜化，促进胚胎植入及生长发育，并与IL-4、IL-6、IL-8、集落刺激因子、肿瘤坏死因子α、血小板衍生因子等共同维持母胎网络系统的平衡，以确保正常妊娠[4-6]。
2.不明原因早期自然流产的免疫学病因：现认为，不明原因早期自然流产的发病机理，可能与母体封闭抗体减少，夫妇间人类白细胞抗原相容性高，抗精子免疫作用，抗磷脂抗体作用，胎盘及蜕膜组织中抑制细胞的缺乏等免疫因素有关。Li等[7]认为，在排除外来炎症的影响下，异常增多的IL-1可与上述各种细胞因子协同促进孕妇组织中前列腺素E2的产生，刺激细胞毒性及炎症反应，影响胚胎的发育。因此，IL-1的致炎作用也可能与流产的发生有关。本研究结果表明，患者蜕膜中巨噬细胞百分率虽未见显著性变化，但其产生IL-1的活性却明显增强，说明此种细胞可能受某种刺激因素的作用而处于免疫高激活状态，使母体对胎儿产生强免疫排斥作用，这或许是导致不明原因早期自然流产的重要免疫机理之一，但其体内的直接实验室依据及确切作用机理尚有待于进一步研究。
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参考文献
1 Jikihara H,Poisner AM, Handwerger S.Tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1 beta inhibit the synthesis and release of renin from human decidual cells.J Clin Endocrinol Metab, 1995, 80: 195-199.
2 李一,杨贵贞. IL-1的诱生及检测. 见: 杨贵贞，主编. 免疫生物工程纲要与技术.第1版.长春:吉林科学技术出版社,1991.16-18.
3 史利宁,王艾丽,武建国.子宫蜕膜与妊娠的免疫调节.国外医学妇产科学分册,1997,24: 136-138.
4 Mascuhiro K,Matsuzaki N,Nishino E,et al. Trophoblast-derived IL-1 stimulates the release of human chorionic gonadotropin by activating IL-6 and IL-6R system in first trimester human trophoblast.J Clin Endocrinol Metab,1991,72: 594-601.
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5 Librach CL,Feigenbaum SL,Bass KE, et al. IL-1 beta regulates human cytotrophoblast metalloproteinase activity and invasion in vitro. J Biol Chem,1994,269: 17125-17131.
6 Ishihara O.Dexamethasone and progesterone inhibit the production of PGE2 stimulated by IL-1β in human decidual cells of first trimester pregnancy. Prostaglandins,1995,49:15-19.
7 Li Y,Matsuzaki N,Mascuhiro K,et al.Trophoblast-derived TNF-α induces release of human chorionic gonadotropin using IL-6 and IL-6-receptor-dependent system in the normal human trophoblasts.J Clin Endocrinol Metab,1992, 4: 184-191.
(收稿：1998-10-20 修回：1999-08-10), http://www.100md.com
单位：崔澂050081 石家庄，解放军白求恩医学高等专科学校微生物及寄生虫学教研室；王慧贤 河北医科大学基础医学院微生物及免疫学教研室；杨彦忠，王惠兰 第二医院；郝淑维 第四医院
关键词：
中华妇产科杂志/991120 正常妊娠尤其是孕12周内，蜕膜中由各种细胞因子、激素及蛋白类物质构成的旁分泌或自分泌网络系统的平衡，对胚胎的生长发育极其重要，一旦其独特的免疫微环境遭到破坏，就可能导致流产等不良后果[1]。本研究通过观察正常孕妇及不明原因早期自然流产患者蜕膜中巨噬细胞数量及诱生白细胞介素1(IL-1)活性的变化，探讨疾病的免疫学发病机理。
一、资料与方法
1.研究对象：对照组：健康早孕妇女，未使用任何激素类药物，宫颈、阴道无急性及慢性炎症，未放置宫内节育器，无异常孕育史，要求人工流产者，共25例。自然流产组：排除各种临床致病因素，3个月内未使用任何激素类药物，未放置宫内节育器，无异常孕育史的早期自然流产患者，共25例。两组孕妇年龄 25～35岁。均取其蜕膜组织检查。
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2.标本采集及细胞分离：无菌条件下刮取蜕膜，立即用冷 Hanks液仔细冲洗，剪碎并加入含0.25%胰蛋白酶、0.1%胶原酶、0.1%透明质酸酶的消化液，经37℃水浴2小时收集混合单个细胞悬液，再以淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，台盼蓝排除法测细胞活力>95%后，加入常规RPMI-1640完全培养液，调整细胞浓度为2×106/ml，37℃、5%二氧化碳温箱中斜置贴壁孵育1小时。
3.光镜观察：每组随机抽取 10个标本，将混合单个细胞的悬液离心涂片，经苏木精-伊红染色，油镜下观察蜕膜中的细胞类型，计数200个细胞，计算巨噬细胞所占百分率。
4. IL-1的诱生及其活性检测[2]：应用脂多糖刺激贴壁细胞，按小鼠胸腺细胞增殖及3H-TdR掺入法检测诱生IL-1活性，以 FJ-2115型自动β闪烁液计数仪测定掺入3H-TdR的每分脉冲数(counts per minute,cpm)。根据cpm值判定样品中IL-1活性。
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5. 统计学处理：所有数据均以
±s表示；进行方差齐性检验后，采用成组设计两样本均数比较的t或t′检验。二、结果
1.蜕膜中巨噬细胞百分率比较：两组蜕膜中均可观察到巨噬细胞，其中对照组为(18.00±3.35)%，自然流产组为(16.10±3.32)%，两组比较，差异无显著性(P>0.05)。
2.诱生IL-1活性的比较：对照组与自然流产组cpm值分别为5 057.20±417.35、 6 943.04±498.80，自然流产组诱生IL-1活性增强(P<0.0005)。
三、讨论
1. 巨噬细胞及IL-1在妊娠过程中的作用：正常妊娠早期，蜕膜中含有大量免?疫相关细胞，其中约19%为巨噬细胞，主要来源于外周血单核细胞。这类细胞在妊娠过程中，表达执行抗原递呈和杀伤靶细胞功能的活化标志，能有效地清除病原微生物及异常细胞，保护胎儿免受感染；还可产生胶原酶、弹性蛋白酶、一氧化氮诱生酶等，有利于胎儿生长所需的组织重建，并可保持子宫肌肉松弛[3]。
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蜕膜中的IL-1主要由活化的巨噬细胞产生，正常分泌量的IL-1可通过调节孕妇组织中人绒毛膜促性腺激素、孕酮、胎盘催乳素、前列腺素E2、肾素、金属蛋白酶等物质的水平及活性，阻止子宫内膜基质细胞的过度蜕膜化，促进胚胎植入及生长发育，并与IL-4、IL-6、IL-8、集落刺激因子、肿瘤坏死因子α、血小板衍生因子等共同维持母胎网络系统的平衡，以确保正常妊娠[4-6]。
2.不明原因早期自然流产的免疫学病因：现认为，不明原因早期自然流产的发病机理，可能与母体封闭抗体减少，夫妇间人类白细胞抗原相容性高，抗精子免疫作用，抗磷脂抗体作用，胎盘及蜕膜组织中抑制细胞的缺乏等免疫因素有关。Li等[7]认为，在排除外来炎症的影响下，异常增多的IL-1可与上述各种细胞因子协同促进孕妇组织中前列腺素E2的产生，刺激细胞毒性及炎症反应，影响胚胎的发育。因此，IL-1的致炎作用也可能与流产的发生有关。本研究结果表明，患者蜕膜中巨噬细胞百分率虽未见显著性变化，但其产生IL-1的活性却明显增强，说明此种细胞可能受某种刺激因素的作用而处于免疫高激活状态，使母体对胎儿产生强免疫排斥作用，这或许是导致不明原因早期自然流产的重要免疫机理之一，但其体内的直接实验室依据及确切作用机理尚有待于进一步研究。
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参考文献
1 Jikihara H,Poisner AM, Handwerger S.Tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1 beta inhibit the synthesis and release of renin from human decidual cells.J Clin Endocrinol Metab, 1995, 80: 195-199.
2 李一,杨贵贞. IL-1的诱生及检测. 见: 杨贵贞，主编. 免疫生物工程纲要与技术.第1版.长春:吉林科学技术出版社,1991.16-18.
3 史利宁,王艾丽,武建国.子宫蜕膜与妊娠的免疫调节.国外医学妇产科学分册,1997,24: 136-138.
4 Mascuhiro K,Matsuzaki N,Nishino E,et al. Trophoblast-derived IL-1 stimulates the release of human chorionic gonadotropin by activating IL-6 and IL-6R system in first trimester human trophoblast.J Clin Endocrinol Metab,1991,72: 594-601.
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5 Librach CL,Feigenbaum SL,Bass KE, et al. IL-1 beta regulates human cytotrophoblast metalloproteinase activity and invasion in vitro. J Biol Chem,1994,269: 17125-17131.
6 Ishihara O.Dexamethasone and progesterone inhibit the production of PGE2 stimulated by IL-1β in human decidual cells of first trimester pregnancy. Prostaglandins,1995,49:15-19.
7 Li Y,Matsuzaki N,Mascuhiro K,et al.Trophoblast-derived TNF-α induces release of human chorionic gonadotropin using IL-6 and IL-6-receptor-dependent system in the normal human trophoblasts.J Clin Endocrinol Metab,1992, 4: 184-191.
(收稿：1998-10-20 修回：1999-08-10), http://www.100md.com