L-arg在高胆固醇血症兔中抗氧化作用研究
作者：樊燕蓉 陈进贵 薛龙增 裴 云 倪庆桂 符步清
单位：解放军海军医学高等专科学校(南京 210099)
关键词：
中国病理生理杂志990129
临床和实验研究报道，脂质过氧化作用在动脉粥样硬化(atherosclerosis)发病机理中起重要作用。新近研究报道，动脉粥样硬化病变过程中，血管内皮损伤，精氨酸/一氧化氮(L-arginine/nitric oxigen, L-arg/NO)途径障碍，而内源性NO有清除自由基的作用，NO对多不饱和脂肪酸的脂质过氧化作用有抑制作用。目前，关于NO与动脉粥样硬化发生发展过程中的脂质过氧化作用的关系尚不清楚。本研究主要观察体外长期补充外源性NO前体物L-arg时，对高胆固醇血症兔动脉粥样硬化病变过程中的脂质过氧化作用的影响。
, 百拇医药
材料和方法
一、动物与分组:
中科院皮肤病研究所提供健康成年雄性新西兰兔(体重1.9～2.2 kg左右)16只，分为3组：①正常对照组( normal, N组)5只，喂普通饲料。②单纯胆固醇组(cholesterol, Ch组)6只，饲料中含1%胆固醇。③胆固醇+精氨酸组(CA组)5只，饲料中含1%胆固醇和2.25%精氨酸。3组均喂满10周。胆固醇(AR)购自上海医药采购供应站，L-arg购自上海伯奥医药公司。
二、指标测定：
在实验开始前、第5周和第10周采兔耳缘静脉血，血浆胆固醇(total cholesterol, TC)采用邻苯二甲醛直接显色法测定，血浆丙二醛(malondialdehyde, MDA)采用硫代巴比妥酸法测定。
第10周处死动物，摘取胸主动脉，称重、制成匀浆，采用硫代巴比妥酸法测定其MDA含量，同时用双缩脲法测其组织蛋白含量，以每毫克蛋白质中含TBA活性物质的nmol/mg表示MDA活性。另取50mg动脉组织严格按cGMP放免测定盒操作测定其cGMP含量。
, 百拇医药
三、数据处理和分析：
数据用均值±标准差(
±s)表示，方差分析用组间q检验。
结 果
一、不同时期各组血浆胆固醇测定结果(见表1)：
喂食高胆固醇饮食后，补充L-arg组和单纯胆固醇组血浆胆固醇含量均大大增加，为正常组的10余倍，Ch组和CA组之间无明显差异。补充L-arg不影响血浆胆固醇含量。
二、血浆和动脉组织中cGMP、MDA含量测定(见表2)：
表1 不同时期三组兔血浆胆固醇含量
Tab 1 The levels of total cholesterol of the rabbit
, http://www.100md.com
plasa in different stages(mmol/L,±s)
Group
n
Beginning
The fifth week
The tenth week
N
5
1.196±0.267
1.276±0.267**
, 百拇医药
1.270±0.219**
Ch
6
1.085±0.360
17.394±5.111
18.686±4.180
CA
5
1.230±0.542
15.716±5.237
17.696±4.915
*P<0.05, **P<0.01 vs Ch group
, 百拇医药
表2 实验结束时动脉组织cGMP、MDA的含量
Tab 2 The levels of cGMP、MDA in the aorta tissues at the end of the experiment(nmol/mg,±s)
Group
n
Plasma
Aorta tissue
cGMP(pmol/L)
MDA(nmol/mg)
cGMP(pmol/L)
, http://www.100md.com
MDA(nmol/mg)
N
5
43.08±5.54**
6.452±2.346**
33.36±7.98*
0.22±0.02*
Ch
6
35.78±3.57
13.737±2.705
, http://www.100md.com
12.96±7.76
0.30±0.08
CA
5
46.18±5.14**
6.194±2.146**
35.96±14.76*
0.22±0.01*
*P<0.05, **P<0.01, vs Ch group
由表2可见，在实验结束时，CA组血浆和动脉组织MDA含量小于Ch组，有显著差异；CA组血浆动脉和组织cGMP含量大于Ch组，差异显著。可见，补充精氨酸后提高了cGMP含量，减小了MDA含量。
, http://www.100md.com
讨 论
高胆固醇血症所致血管内皮细胞损伤和LDL的氧化、修饰在AS发生过程中起重要作用。新近研究报道，动脉粥样硬化病变时，其血浆NO含量较低，推测可能与内皮细胞受损，其合成和释放NO减少有关。NO带有不成对电子，可迅速与分子氧、超氧阴离子反应，是超氧化物阴离子(
)的清除剂，在有Fe2+存在时，可与其它活泼自由基(·OH)反应生成HONO，与脂质过氧化中产生的以碳为中心的自由基LOO、烷氧自由基LOO·和过氧自由基LOO·迅速反应形成LNO，LONO和LOONO，而这些自由基对LDL有氧化修饰作用。NO减少，则进一步促进LDL的氧化和细胞损伤。这样，一方面Ox-LDL对单核细胞有趋化作用，促进它们聚集在动脉内皮并进入动脉壁中，促进大单核细胞/巨噬细胞通过清道夫受体大量摄取氧化脂蛋白形成泡沫细胞；另一方面，Ox-LDL的较强的细胞毒性加重内皮细胞损伤，致使其对血小板粘附聚集的抑制作用减弱，cGMP抗血管平滑肌增殖作用减弱，而体内的脂质过氧化作用较强，最终形成一系列动脉粥样硬化的病理变化。
本实验中体外补充L-arg后，可使体内NO增多，而脂质过氧化物的分解产物MDA在血浆和组织中均下降，这一方面可能与NO的直接清除自由基作用，保护内皮细胞功能完整性有关，另一方面可能与NO抑制LDL的氧化有关，因此，在Cook实验中观察到的补充L-arg后血管内皮损伤减轻，AS病变面积减少和病变减轻，可能与补充L-arg减轻体内脂质过氧化作用有关，故体外补充外源性L-arg，具有一定的抗动脉粥样硬化作用。
收稿日期：1997年4月22日
修稿日期：1997年12月9日, http://www.100md.com
单位：解放军海军医学高等专科学校(南京 210099)
关键词：
中国病理生理杂志990129
临床和实验研究报道，脂质过氧化作用在动脉粥样硬化(atherosclerosis)发病机理中起重要作用。新近研究报道，动脉粥样硬化病变过程中，血管内皮损伤，精氨酸/一氧化氮(L-arginine/nitric oxigen, L-arg/NO)途径障碍，而内源性NO有清除自由基的作用，NO对多不饱和脂肪酸的脂质过氧化作用有抑制作用。目前，关于NO与动脉粥样硬化发生发展过程中的脂质过氧化作用的关系尚不清楚。本研究主要观察体外长期补充外源性NO前体物L-arg时，对高胆固醇血症兔动脉粥样硬化病变过程中的脂质过氧化作用的影响。
, 百拇医药
材料和方法
一、动物与分组:
中科院皮肤病研究所提供健康成年雄性新西兰兔(体重1.9～2.2 kg左右)16只，分为3组：①正常对照组( normal, N组)5只，喂普通饲料。②单纯胆固醇组(cholesterol, Ch组)6只，饲料中含1%胆固醇。③胆固醇+精氨酸组(CA组)5只，饲料中含1%胆固醇和2.25%精氨酸。3组均喂满10周。胆固醇(AR)购自上海医药采购供应站，L-arg购自上海伯奥医药公司。
二、指标测定：
在实验开始前、第5周和第10周采兔耳缘静脉血，血浆胆固醇(total cholesterol, TC)采用邻苯二甲醛直接显色法测定，血浆丙二醛(malondialdehyde, MDA)采用硫代巴比妥酸法测定。
第10周处死动物，摘取胸主动脉，称重、制成匀浆，采用硫代巴比妥酸法测定其MDA含量，同时用双缩脲法测其组织蛋白含量，以每毫克蛋白质中含TBA活性物质的nmol/mg表示MDA活性。另取50mg动脉组织严格按cGMP放免测定盒操作测定其cGMP含量。
, 百拇医药
三、数据处理和分析：
数据用均值±标准差(
±s)表示，方差分析用组间q检验。结 果
一、不同时期各组血浆胆固醇测定结果(见表1)：
喂食高胆固醇饮食后，补充L-arg组和单纯胆固醇组血浆胆固醇含量均大大增加，为正常组的10余倍，Ch组和CA组之间无明显差异。补充L-arg不影响血浆胆固醇含量。
二、血浆和动脉组织中cGMP、MDA含量测定(见表2)：
表1 不同时期三组兔血浆胆固醇含量
Tab 1 The levels of total cholesterol of the rabbit
, http://www.100md.com
plasa in different stages(mmol/L,
±s)Group
n
Beginning
The fifth week
The tenth week
N
5
1.196±0.267
1.276±0.267**
, 百拇医药
1.270±0.219**
Ch
6
1.085±0.360
17.394±5.111
18.686±4.180
CA
5
1.230±0.542
15.716±5.237
17.696±4.915
*P<0.05, **P<0.01 vs Ch group
, 百拇医药
表2 实验结束时动脉组织cGMP、MDA的含量
Tab 2 The levels of cGMP、MDA in the aorta tissues at the end of the experiment(nmol/mg,
±s)Group
n
Plasma
Aorta tissue
cGMP(pmol/L)
MDA(nmol/mg)
cGMP(pmol/L)
, http://www.100md.com
MDA(nmol/mg)
N
5
43.08±5.54**
6.452±2.346**
33.36±7.98*
0.22±0.02*
Ch
6
35.78±3.57
13.737±2.705
, http://www.100md.com
12.96±7.76
0.30±0.08
CA
5
46.18±5.14**
6.194±2.146**
35.96±14.76*
0.22±0.01*
*P<0.05, **P<0.01, vs Ch group
由表2可见，在实验结束时，CA组血浆和动脉组织MDA含量小于Ch组，有显著差异；CA组血浆动脉和组织cGMP含量大于Ch组，差异显著。可见，补充精氨酸后提高了cGMP含量，减小了MDA含量。
, http://www.100md.com
讨 论
高胆固醇血症所致血管内皮细胞损伤和LDL的氧化、修饰在AS发生过程中起重要作用。新近研究报道，动脉粥样硬化病变时，其血浆NO含量较低，推测可能与内皮细胞受损，其合成和释放NO减少有关。NO带有不成对电子，可迅速与分子氧、超氧阴离子反应，是超氧化物阴离子(
)的清除剂，在有Fe2+存在时，可与其它活泼自由基(·OH)反应生成HONO，与脂质过氧化中产生的以碳为中心的自由基LOO、烷氧自由基LOO·和过氧自由基LOO·迅速反应形成LNO，LONO和LOONO，而这些自由基对LDL有氧化修饰作用。NO减少，则进一步促进LDL的氧化和细胞损伤。这样，一方面Ox-LDL对单核细胞有趋化作用，促进它们聚集在动脉内皮并进入动脉壁中，促进大单核细胞/巨噬细胞通过清道夫受体大量摄取氧化脂蛋白形成泡沫细胞；另一方面，Ox-LDL的较强的细胞毒性加重内皮细胞损伤，致使其对血小板粘附聚集的抑制作用减弱，cGMP抗血管平滑肌增殖作用减弱，而体内的脂质过氧化作用较强，最终形成一系列动脉粥样硬化的病理变化。本实验中体外补充L-arg后，可使体内NO增多，而脂质过氧化物的分解产物MDA在血浆和组织中均下降，这一方面可能与NO的直接清除自由基作用，保护内皮细胞功能完整性有关，另一方面可能与NO抑制LDL的氧化有关，因此，在Cook实验中观察到的补充L-arg后血管内皮损伤减轻，AS病变面积减少和病变减轻，可能与补充L-arg减轻体内脂质过氧化作用有关，故体外补充外源性L-arg，具有一定的抗动脉粥样硬化作用。
收稿日期：1997年4月22日
修稿日期：1997年12月9日, http://www.100md.com