板蓝根对试验性小鼠遗传毒性的影响
作者:庞竹林 汤郡 朱蔚云 卢尧
单位:庞竹林(广州医学院医学遗传学与细胞生物学教研室,广州 510182);汤郡(广州医学院微生物学与免疫学教研室);朱蔚云(广州医学院医学遗传学与细胞生物学教研室,广州 510182);卢尧(白求恩医科大学基础医学院)
关键词:板蓝根;微核;精子畸形;遗传毒性;小鼠
广州医学院学报000313 摘要 目的:研究板蓝根水煎液在实验性小鼠体内是否具有遗传毒性。方法:应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形实验,观察板蓝根水煎液在小鼠体内能否诱发体细胞和雄性生殖细胞遗传物质的损伤。结果:板蓝根水煎液能明显诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠精子畸形,具有致突变作用。结论:板蓝根水煎液作为一种临床常用的清热解毒和治疗肿瘤的中草药,在剂量较大时,具有致突变性,临床使用上应注意。
中图分类号R282.7105 文献标识码:A 文章编号:1008-1836(2000)03-0041-04
, http://www.100md.com
Genetic Toxicity of Water Boiled Juice of
Isatic Tinctoria L. in Mice
Pang Zhilin Zhu Weryun
(Department of Medical Genetics & Cell Biology,Guangzhou Medical College)
Tang Jun
(Department of Microbiology & Immunology,Guangzhou Medical College)
Lu Yao
, 百拇医药 (School of Basic Medical Sciences,Norman Bethune University of Medical Science)
Objective:To investigate the genetic toxicity of Water boiled Juice of Isatic Tinctoria L. (IT) in mice. Methods:Micronuclei (MN) test and sperm abnormolity (SA) test were applied to determine whether IT can cause demage to genetic substances from body cells and male reproductive cells of mice.Results:It was shown that IT could cause MN and SA in mice. Conclusion:IT is a potential mutagen. It has genetic toxicity to both body and reproductive cells of mice. It should be used carefully in clinical practice.
, 百拇医药
Key words Isatic Tinctoria L. (IT);Micronuclei test (MNT);Sperm abnormality (SA);Genetic toxicity;Mice.
肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病。目前治疗肿瘤常用的方法,如放疗、化疗等,都会引起机体内正常细胞遗传物质的严重损伤。在杀死肿瘤细胞的同时,不仅会杀死体内正常细胞,引起机体严重的毒副作用;而且会导致次发肿瘤的发生,从而达不到彻底治疗肿瘤的目的。因此,评价一种治疗肿瘤药物对机体的遗传毒性,对指导这种药物的临床实用及评价其临床疗效,都具有重要的意义。
板蓝根是一种临床常用的清热解毒类中草药。近年来的研究发现,板蓝根对白血病等肿瘤具有一定的疗效。但对于板蓝根治疗肿瘤的机制,目前尚未见确切报道[1]。
本文采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小数精子畸形实验,对临床常用的抗肿瘤中药板蓝根水煎液进行了致突变的体内研究。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 药品
中草药板蓝根(Isatic tinctoria L.,IT。十字花科植物菘兰、草大青之根或爵床科植物马兰的根茎)由长春市药材公司提供并鉴定。环磷酰胺:上海第二制药厂产品。
1.2 实验动物
昆明种小白鼠:白求恩医科大学实验动物部提供,雌雄各半,体重18~20g。ICR小鼠:广州医学院实验动物中心提供(合格证号:粤检证号98A043),雄性,体重18~22g。
1.3 板蓝根水煎液的制备[2]
取干燥板蓝根10g,粉碎后放入500ml去离子水,浸泡30min;烧杯中煮沸30min,收集药液;再反复煎煮2次,收集3次药液,一起过滤去渣,沸腾水浴浓缩至10ml,使药液每毫升相当于生药量1g。4℃冰箱保存待用。
, 百拇医药
1.4 实验方法
1.4.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验方法
昆明种小鼠随机分为阴性对照组(生理盐水,腹腔注射);阳性对照组(30mg/kg环磷酰胺,腹腔注射);中草药水煎液诱变组(分成人临床常用剂量的5、10、20倍组,灌胃给药)。每组4只动物,雌雄各半。
将中草药水煎液按所需剂量稀释成0.1ml/只小鼠,各中草药水煎液诱变组灌胃给药,灌胃后36h颈椎脱臼法处死小鼠。阴、阳对照组分别腹腔注射生理盐水、环磷酰胺(0.1ml/只小鼠),注射后24h颈椎脱臼法处死小鼠。各组动物参照改良Jagetia方法[3]制片:常规方法取股骨骨髓腔细胞,制成小牛血清细胞悬液,常规涂片,空气晾干。甲醇固定,10%Giemsa染色。蒸馏水冲洗,干后镜检。每只动物观察2000个嗜多染红细胞,观察含微核的嗜多染红细胞数,计算其千分率。
, 百拇医药
1.4.2 小鼠精子畸形实验方法
ICR小鼠阴、阳对照组同微核试验;中草药水煎液诱变组取10、2.5、0.5倍人临床常用剂量。每组6只雄性动物。
将中草药水煎液按所需剂量稀释成0.1ml/只小鼠,各中草药水煎液诱变组灌胃给药;同时阴、阳对照组分别腹腔注射生理盐水、环磷酰胺(0.1ml/只小鼠)。隔日给药,连续3次。首次给药4周后颈椎脱臼法处死小鼠。各组动物参照Wyrobek[4]方法制片:分离附睾,剪碎,滤除组织碎片,制成生理盐水悬液,常规涂片。气干后甲醇固定5min,2%伊红染色60min。蒸馏水冲洗,干后镜检。高倍镜下观察精子形态,每只动物检查首尾完整的精子1000个,按无钩、无定型、香蕉形、胖头和多头多尾分别记数畸形精子数及总的精子畸形百分率。
1.4.3 统计学处理 采用配对t检验。
, http://www.100md.com 2 实验结果
2.1 板蓝根的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果
从表1可见,板蓝根各剂量组诱发的微核千分率与阴性对照(生理盐水)组相比,均具非常显著性差异(P<0.01)。各剂量组之间未见显著性差异,,未表现出明显的剂量-反应效应。
2.2 板蓝根的小鼠精子畸形实验结果,见表2。
Tab 1 MN frequence induced by Isatic tinctoria L.(IT,板蓝根)
In the bone marrow PCE of mice Drug
Dose
(mg/kg)
, http://www.100md.com
No.of cells
observed
MN(‰)
(±s)
N.S
8,000
2.25±0.43
Isatis
2.50×103
8,000
7.00±1.08**
, 百拇医药
Tinctoria
5.00×103
8,000
7.00±1.03**
L.
10.00×103
8,000
10.25±1.19**
CP
30
8,000
, http://www.100md.com
19.63±1.32**
**P<0.01 Vs N.S controlTab 2 Sperm abnormality induced in mice by Isatic tinctoria L.(IT,板蓝根) Drug
Dose
(mg/kg)
No.of
sperms
observed
No.of various abnormal sperms
(Percentage of various abnormal sperms)
, 百拇医药
Total
Percentage
of
abnormality
Amorphous Banana shaped Hookless Big_head 2 tail & 2 head
N.S
6,000
48(13.91)
52(15.07)
78(22.61)
164(47.54)
, 百拇医药
3(0.70)
354
5.75±1.07
IT
0.25×103
6,000
185(17.16)
180(16.70)
186(17.25)
505(46.85)
22(2.04)
1078
, 百拇医药
17.97±1.94**
IT
1.25×103
6,000
148(12.49)
226(19.07)
236(19.92)
548(46.24)
27(2.28)
1185
19.75±4.23**
, 百拇医药
IT
5.00×103
6,000
183(17.91)
191(19.70)
233(17.91)
552(40.60)
34(3.88)
1193
19.88±0.84**
CP
30
, 百拇医药
6,000
186(16.32)
210(18.42)
147(12.89)
552(48.42)
45(3.94)
1140
19.00±3.39**
**P<0.01 Vs N.S control
从表2可见,板蓝根各剂量组诱发的精了畸形百分率与阴性对照(生理盐水)相比,均具非常显著性差异(P<0.01),且多头多尾精子所占比例明显增高。各剂量组之间未见显著性差异,未表现出明显的剂量-反应效应。各剂量组诱发的精子畸形类别及百分率与阳性对照(CP)组相比均无明显差异。
, 百拇医药
3 讨论
中药板蓝根具有清热解毒,抗细菌、病毒、钩端螺旋体,治疗肝炎等功效[5]。关于板蓝根药理学方面的研究目前并不多见。近年来的研究发现,板蓝根可以抑制血小板凝集,板蓝根多糖(IIP)可以增强人体免疫系统功能,但板蓝根能明显增高哺乳动物染色体畸变率[6]。板蓝根对白血病等血液系统肿瘤具有较好的疗效;与其他多种药物配合,在治疗喉癌、肝癌等多种肿瘤中,也具有确切的疗效[7]。
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验是评价环境理、化因子对哺乳动物体细胞遗传毒性的一种常用的细胞水平的手段;而小鼠精子畸形实验常用来从形态学角度鉴定环境理、化因子对雄性哺乳动物生殖细胞造成的可遗传的的遗传损伤。本文联合采用这两种检测手段,希望能对板蓝根水煎液对哺乳动物体细胞和生殖细胞的遗传毒性有一个较全面的认识。
板蓝根水煎液对小鼠骨髓PCE的MN具有诱发作用,同时可以明显增加小鼠的精子畸形率,这与板蓝根能明显增高哺乳动物染色体畸变率的报道是一致的。同时提示板蓝根对哺乳动物体细胞和生殖细胞均具有一定的遗传毒性,其在临床上的使用应慎重,特别用来治疗感冒、肝炎等病症时。而板蓝根对肿瘤的治疗作用,可能与一些临床常用的化疗药物相似,通过攻击细胞的遗传物质,直接杀死一些分裂旺盛的细胞[7]。但板蓝根抗肿瘤和诱发遗传毒性的具体机理,以及两者之间是否具有某种联系,尚需进一步的研究。
, 百拇医药
作者简介:庞竹林(1969-5),男,硕士,讲师。
研究方向:遗传毒理
参考文献
[1]单风平.50%板蓝根注射液对小鼠friend红白血病细胞3CL-8体内外的杀伤作用[J].中草药,1994;25(18):417~8
[2]刘德祥等.102种中药水溶液提取物的抗诱变性筛选[J].中国中药杂志,1990;15(10):41~6
[3]Jagetia_gc,et al. (E)4-[4-N,N-Dimethylami-
nophenyl]but-3-en-2-one(DMAP)treatment inhibits the radiation_induced micrinucleus formation in bone marrow of BALB/C mice[J]. Mutat Res,1994;306(1):71~80
, 百拇医药
[4]Wyrobek AJ,et al. Chmical Induction of Sperm Abnormalities in Mice[J]. Proc Natl Acad Sci USA,1975;72(11):4425
[5]江苏新医学院编.中药大词典[M].上海科技出版社,1977:1250~2
[6]王浴生主编.中药药理与应用[M].人民卫生出版社,1998:636~9
[7]张民庆主编.抗肿瘤中药的临床使用[M].人民卫生出版社,1998:67~8
(收稿:1999-07-14), http://www.100md.com
单位:庞竹林(广州医学院医学遗传学与细胞生物学教研室,广州 510182);汤郡(广州医学院微生物学与免疫学教研室);朱蔚云(广州医学院医学遗传学与细胞生物学教研室,广州 510182);卢尧(白求恩医科大学基础医学院)
关键词:板蓝根;微核;精子畸形;遗传毒性;小鼠
广州医学院学报000313 摘要 目的:研究板蓝根水煎液在实验性小鼠体内是否具有遗传毒性。方法:应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形实验,观察板蓝根水煎液在小鼠体内能否诱发体细胞和雄性生殖细胞遗传物质的损伤。结果:板蓝根水煎液能明显诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠精子畸形,具有致突变作用。结论:板蓝根水煎液作为一种临床常用的清热解毒和治疗肿瘤的中草药,在剂量较大时,具有致突变性,临床使用上应注意。
中图分类号R282.7105 文献标识码:A 文章编号:1008-1836(2000)03-0041-04
, http://www.100md.com
Genetic Toxicity of Water Boiled Juice of
Isatic Tinctoria L. in Mice
Pang Zhilin Zhu Weryun
(Department of Medical Genetics & Cell Biology,Guangzhou Medical College)
Tang Jun
(Department of Microbiology & Immunology,Guangzhou Medical College)
Lu Yao
, 百拇医药 (School of Basic Medical Sciences,Norman Bethune University of Medical Science)
Objective:To investigate the genetic toxicity of Water boiled Juice of Isatic Tinctoria L. (IT) in mice. Methods:Micronuclei (MN) test and sperm abnormolity (SA) test were applied to determine whether IT can cause demage to genetic substances from body cells and male reproductive cells of mice.Results:It was shown that IT could cause MN and SA in mice. Conclusion:IT is a potential mutagen. It has genetic toxicity to both body and reproductive cells of mice. It should be used carefully in clinical practice.
, 百拇医药
Key words Isatic Tinctoria L. (IT);Micronuclei test (MNT);Sperm abnormality (SA);Genetic toxicity;Mice.
肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病。目前治疗肿瘤常用的方法,如放疗、化疗等,都会引起机体内正常细胞遗传物质的严重损伤。在杀死肿瘤细胞的同时,不仅会杀死体内正常细胞,引起机体严重的毒副作用;而且会导致次发肿瘤的发生,从而达不到彻底治疗肿瘤的目的。因此,评价一种治疗肿瘤药物对机体的遗传毒性,对指导这种药物的临床实用及评价其临床疗效,都具有重要的意义。
板蓝根是一种临床常用的清热解毒类中草药。近年来的研究发现,板蓝根对白血病等肿瘤具有一定的疗效。但对于板蓝根治疗肿瘤的机制,目前尚未见确切报道[1]。
本文采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小数精子畸形实验,对临床常用的抗肿瘤中药板蓝根水煎液进行了致突变的体内研究。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 药品
中草药板蓝根(Isatic tinctoria L.,IT。十字花科植物菘兰、草大青之根或爵床科植物马兰的根茎)由长春市药材公司提供并鉴定。环磷酰胺:上海第二制药厂产品。
1.2 实验动物
昆明种小白鼠:白求恩医科大学实验动物部提供,雌雄各半,体重18~20g。ICR小鼠:广州医学院实验动物中心提供(合格证号:粤检证号98A043),雄性,体重18~22g。
1.3 板蓝根水煎液的制备[2]
取干燥板蓝根10g,粉碎后放入500ml去离子水,浸泡30min;烧杯中煮沸30min,收集药液;再反复煎煮2次,收集3次药液,一起过滤去渣,沸腾水浴浓缩至10ml,使药液每毫升相当于生药量1g。4℃冰箱保存待用。
, 百拇医药
1.4 实验方法
1.4.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验方法
昆明种小鼠随机分为阴性对照组(生理盐水,腹腔注射);阳性对照组(30mg/kg环磷酰胺,腹腔注射);中草药水煎液诱变组(分成人临床常用剂量的5、10、20倍组,灌胃给药)。每组4只动物,雌雄各半。
将中草药水煎液按所需剂量稀释成0.1ml/只小鼠,各中草药水煎液诱变组灌胃给药,灌胃后36h颈椎脱臼法处死小鼠。阴、阳对照组分别腹腔注射生理盐水、环磷酰胺(0.1ml/只小鼠),注射后24h颈椎脱臼法处死小鼠。各组动物参照改良Jagetia方法[3]制片:常规方法取股骨骨髓腔细胞,制成小牛血清细胞悬液,常规涂片,空气晾干。甲醇固定,10%Giemsa染色。蒸馏水冲洗,干后镜检。每只动物观察2000个嗜多染红细胞,观察含微核的嗜多染红细胞数,计算其千分率。
, 百拇医药
1.4.2 小鼠精子畸形实验方法
ICR小鼠阴、阳对照组同微核试验;中草药水煎液诱变组取10、2.5、0.5倍人临床常用剂量。每组6只雄性动物。
将中草药水煎液按所需剂量稀释成0.1ml/只小鼠,各中草药水煎液诱变组灌胃给药;同时阴、阳对照组分别腹腔注射生理盐水、环磷酰胺(0.1ml/只小鼠)。隔日给药,连续3次。首次给药4周后颈椎脱臼法处死小鼠。各组动物参照Wyrobek[4]方法制片:分离附睾,剪碎,滤除组织碎片,制成生理盐水悬液,常规涂片。气干后甲醇固定5min,2%伊红染色60min。蒸馏水冲洗,干后镜检。高倍镜下观察精子形态,每只动物检查首尾完整的精子1000个,按无钩、无定型、香蕉形、胖头和多头多尾分别记数畸形精子数及总的精子畸形百分率。
1.4.3 统计学处理 采用配对t检验。
, http://www.100md.com 2 实验结果
2.1 板蓝根的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果
从表1可见,板蓝根各剂量组诱发的微核千分率与阴性对照(生理盐水)组相比,均具非常显著性差异(P<0.01)。各剂量组之间未见显著性差异,,未表现出明显的剂量-反应效应。
2.2 板蓝根的小鼠精子畸形实验结果,见表2。
Tab 1 MN frequence induced by Isatic tinctoria L.(IT,板蓝根)
In the bone marrow PCE of mice Drug
Dose
(mg/kg)
, http://www.100md.com
No.of cells
observed
MN(‰)
(±s)
N.S
8,000
2.25±0.43
Isatis
2.50×103
8,000
7.00±1.08**
, 百拇医药
Tinctoria
5.00×103
8,000
7.00±1.03**
L.
10.00×103
8,000
10.25±1.19**
CP
30
8,000
, http://www.100md.com
19.63±1.32**
**P<0.01 Vs N.S controlTab 2 Sperm abnormality induced in mice by Isatic tinctoria L.(IT,板蓝根) Drug
Dose
(mg/kg)
No.of
sperms
observed
No.of various abnormal sperms
(Percentage of various abnormal sperms)
, 百拇医药
Total
Percentage
of
abnormality
Amorphous Banana shaped Hookless Big_head 2 tail & 2 head
N.S
6,000
48(13.91)
52(15.07)
78(22.61)
164(47.54)
, 百拇医药
3(0.70)
354
5.75±1.07
IT
0.25×103
6,000
185(17.16)
180(16.70)
186(17.25)
505(46.85)
22(2.04)
1078
, 百拇医药
17.97±1.94**
IT
1.25×103
6,000
148(12.49)
226(19.07)
236(19.92)
548(46.24)
27(2.28)
1185
19.75±4.23**
, 百拇医药
IT
5.00×103
6,000
183(17.91)
191(19.70)
233(17.91)
552(40.60)
34(3.88)
1193
19.88±0.84**
CP
30
, 百拇医药
6,000
186(16.32)
210(18.42)
147(12.89)
552(48.42)
45(3.94)
1140
19.00±3.39**
**P<0.01 Vs N.S control
从表2可见,板蓝根各剂量组诱发的精了畸形百分率与阴性对照(生理盐水)相比,均具非常显著性差异(P<0.01),且多头多尾精子所占比例明显增高。各剂量组之间未见显著性差异,未表现出明显的剂量-反应效应。各剂量组诱发的精子畸形类别及百分率与阳性对照(CP)组相比均无明显差异。
, 百拇医药
3 讨论
中药板蓝根具有清热解毒,抗细菌、病毒、钩端螺旋体,治疗肝炎等功效[5]。关于板蓝根药理学方面的研究目前并不多见。近年来的研究发现,板蓝根可以抑制血小板凝集,板蓝根多糖(IIP)可以增强人体免疫系统功能,但板蓝根能明显增高哺乳动物染色体畸变率[6]。板蓝根对白血病等血液系统肿瘤具有较好的疗效;与其他多种药物配合,在治疗喉癌、肝癌等多种肿瘤中,也具有确切的疗效[7]。
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验是评价环境理、化因子对哺乳动物体细胞遗传毒性的一种常用的细胞水平的手段;而小鼠精子畸形实验常用来从形态学角度鉴定环境理、化因子对雄性哺乳动物生殖细胞造成的可遗传的的遗传损伤。本文联合采用这两种检测手段,希望能对板蓝根水煎液对哺乳动物体细胞和生殖细胞的遗传毒性有一个较全面的认识。
板蓝根水煎液对小鼠骨髓PCE的MN具有诱发作用,同时可以明显增加小鼠的精子畸形率,这与板蓝根能明显增高哺乳动物染色体畸变率的报道是一致的。同时提示板蓝根对哺乳动物体细胞和生殖细胞均具有一定的遗传毒性,其在临床上的使用应慎重,特别用来治疗感冒、肝炎等病症时。而板蓝根对肿瘤的治疗作用,可能与一些临床常用的化疗药物相似,通过攻击细胞的遗传物质,直接杀死一些分裂旺盛的细胞[7]。但板蓝根抗肿瘤和诱发遗传毒性的具体机理,以及两者之间是否具有某种联系,尚需进一步的研究。
, 百拇医药
作者简介:庞竹林(1969-5),男,硕士,讲师。
研究方向:遗传毒理
参考文献
[1]单风平.50%板蓝根注射液对小鼠friend红白血病细胞3CL-8体内外的杀伤作用[J].中草药,1994;25(18):417~8
[2]刘德祥等.102种中药水溶液提取物的抗诱变性筛选[J].中国中药杂志,1990;15(10):41~6
[3]Jagetia_gc,et al. (E)4-[4-N,N-Dimethylami-
nophenyl]but-3-en-2-one(DMAP)treatment inhibits the radiation_induced micrinucleus formation in bone marrow of BALB/C mice[J]. Mutat Res,1994;306(1):71~80
, 百拇医药
[4]Wyrobek AJ,et al. Chmical Induction of Sperm Abnormalities in Mice[J]. Proc Natl Acad Sci USA,1975;72(11):4425
[5]江苏新医学院编.中药大词典[M].上海科技出版社,1977:1250~2
[6]王浴生主编.中药药理与应用[M].人民卫生出版社,1998:636~9
[7]张民庆主编.抗肿瘤中药的临床使用[M].人民卫生出版社,1998:67~8
(收稿:1999-07-14), http://www.100md.com
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