复方丹参注射液的细菌内毒素检查方法
作者：黄慧勤 卢俊丽 蔡 乐
单位：黄慧勤 卢俊丽 蔡乐 南宁市第二人民医院 广西南宁市 530031
关键词：复方丹参注射液；稀释法；鲎试剂；细菌内毒素
华夏医学990177 复方丹参注射液的热原检查现行标准家兔法[1]成本高、费时;而用鲎试剂(TAL)检测具有灵敏度高、实用性强等优点。本研究参照中国药典中有关细菌内毒素检查的规定[2],采用最大有效稀释法对TAL检测复方丹参注射液中的内毒素的方法进行了探讨。
1 细菌内毒素理论限值(L)的确定
按规定[1],复方丹参注射液热原注射剂量D=0.5ml/kg;静脉滴注时,内毒素阈剂量为:k=5Eu/kg,因此本品细菌内毒素理论限值为:
, 百拇医药
L=K/D=5Eu/kg/0.5ml/kg=10(Eu/ml)
2 最大有效稀释度(MVD)的计算
目前较常用的排除干扰因素的试验方法是稀释法即最大有效稀释法,其计算公式为:
MVD=样品内毒素限量/TAL灵敏度
按TAL灵敏度为0.5Eu/ml计算,本品的最大有效稀释度为:
MVD=L/λ=10Eu/ml/0.5Eu/ml=20(倍)
由此可知,对本品进行干扰实验,应从最大有效浓度即20倍稀释后开始。
3 实验方法
3.1 实验材料
, 百拇医药
鲎试剂 广西医科大学制药厂,批号971027灵敏度0.5Eu/ml。
细菌内毒素工作标准品 广西医科大学制药厂,批号:970428,20Eu/支。
复方丹参注射液 市售3厂家产品共6批。
小型三用水箱 北京西城区医疗器械厂。
3.2 鲎试剂灵敏度标定
用鲎试剂溶解液将细菌内毒素工作标准品按1∶2等比稀释,配制成以标示灵敏度为中值的5个稀释度,每个稀释度做4管,置37℃水浴中保温60min,结果见表1。
由表1结果计算TAL灵敏度,本批TAL灵敏度为:0.5Eu/ml。
3.3 干扰试验
, 百拇医药
先用稀释20倍的样品溶液将细菌内毒素工作标准品配制成一等比系列浓度后进行实验,若此浓度无干扰,再将样品倍比稀释,然后进行干扰试验,实验结果见表2、表3。
表1 鲎试剂灵敏度标定结果 内毒素浓度
(Eu/ml)
2.0
1.0
0.5
0.25
0.125
阴性对照
反应结果
++++
, 百拇医药
++++
++++
+---------
表2 样品的干扰实验结果 内毒素浓度
(Eu/ml)
2.0
1.0
0.5
0.25
0.125
阴性对照
水稀释
, http://www.100md.com 内毒素
++++
++++
++++
++--------
1→20样品
稀释内毒素
++++
++++
++++
+---------
表3 样品的干扰实验结果 样品
, http://www.100md.com 样品稀释倍数
内 毒 素 浓 度 (Eu/ml)
阴性对照
2.0
1.0
0.5
0.25
0.125
水稀释内毒素
++++
++++
++++
++--------
, 百拇医药
原液----------------------
1∶2----------------------
样1
1∶4----------------------
1∶8
++++
++++
++++---------
1∶16
++++
++++
, http://www.100md.com
++++
++--------
原液----------------------
1∶2----------------------
样2
1∶4----------------------
1∶8
++++
++++
++++----------
1∶16
, 百拇医药
++++
++++
++++----------
原液----------------------
1∶2----------------------
样3
1∶4----------------------
1∶8
++++
++++
++++
, http://www.100md.com
++--------
1∶16
++++
++++
++++----------
由表2、表3结果可知,复方丹参注射液原液、1∶2、1∶4的稀释液均对TAL有抑制作用;而1∶8的稀释液为最低非抑制浓度,小于最大有效稀释倍数(20倍)。
3.4 热原法与细菌内毒素法检测样品
用热原法和细菌内毒素法分别检查3个厂家6批产品,结果热原法6批阴性,细菌内毒素法6批阴性,符合率100%。
4 讨论
, http://www.100md.com
4.1 干扰实验表明,将样品1∶8稀释后,可排除其对TAL的干扰作用。因此,将样品1∶8稀释,以标示灵敏度为0.5Eu/ml的TAL用于本品的细菌内毒素检查是可行的。
4.2 由于样品的最大有效稀释度与TAL的灵敏度成反比,因此只要选择适当灵敏度的TAL,并对样品作适当稀释处理,就可用TAL检查法来控制本品的细菌内毒素限量。
4.3 从热原法与细菌内毒素法同时进行检测的结果,可判断复方丹参注射液的细菌内毒素检查方法是可行的;且此法快捷、简便,可作为医院或药厂控制此制剂质量的参考。
参考文献
[1] 湖北省卫生厅编.湖北省药品标准.武汉:湖北省卫生厅,1992.347～348
[2] 卫生部药典委员会编.中国药典(二部).北京:化学工业出版社,1995:附录XI E76
(收稿 1998-06-11), 百拇医药
单位：黄慧勤 卢俊丽 蔡乐 南宁市第二人民医院 广西南宁市 530031
关键词：复方丹参注射液；稀释法；鲎试剂；细菌内毒素
华夏医学990177 复方丹参注射液的热原检查现行标准家兔法[1]成本高、费时;而用鲎试剂(TAL)检测具有灵敏度高、实用性强等优点。本研究参照中国药典中有关细菌内毒素检查的规定[2],采用最大有效稀释法对TAL检测复方丹参注射液中的内毒素的方法进行了探讨。
1 细菌内毒素理论限值(L)的确定
按规定[1],复方丹参注射液热原注射剂量D=0.5ml/kg;静脉滴注时,内毒素阈剂量为:k=5Eu/kg,因此本品细菌内毒素理论限值为:
, 百拇医药
L=K/D=5Eu/kg/0.5ml/kg=10(Eu/ml)
2 最大有效稀释度(MVD)的计算
目前较常用的排除干扰因素的试验方法是稀释法即最大有效稀释法,其计算公式为:
MVD=样品内毒素限量/TAL灵敏度
按TAL灵敏度为0.5Eu/ml计算,本品的最大有效稀释度为:
MVD=L/λ=10Eu/ml/0.5Eu/ml=20(倍)
由此可知,对本品进行干扰实验,应从最大有效浓度即20倍稀释后开始。
3 实验方法
3.1 实验材料
, 百拇医药
鲎试剂 广西医科大学制药厂,批号971027灵敏度0.5Eu/ml。
细菌内毒素工作标准品 广西医科大学制药厂,批号:970428,20Eu/支。
复方丹参注射液 市售3厂家产品共6批。
小型三用水箱 北京西城区医疗器械厂。
3.2 鲎试剂灵敏度标定
用鲎试剂溶解液将细菌内毒素工作标准品按1∶2等比稀释,配制成以标示灵敏度为中值的5个稀释度,每个稀释度做4管,置37℃水浴中保温60min,结果见表1。
由表1结果计算TAL灵敏度,本批TAL灵敏度为:0.5Eu/ml。
3.3 干扰试验
, 百拇医药
先用稀释20倍的样品溶液将细菌内毒素工作标准品配制成一等比系列浓度后进行实验,若此浓度无干扰,再将样品倍比稀释,然后进行干扰试验,实验结果见表2、表3。
表1 鲎试剂灵敏度标定结果 内毒素浓度
(Eu/ml)
2.0
1.0
0.5
0.25
0.125
阴性对照
反应结果
++++
, 百拇医药
++++
++++
+---------
表2 样品的干扰实验结果 内毒素浓度
(Eu/ml)
2.0
1.0
0.5
0.25
0.125
阴性对照
水稀释
, http://www.100md.com 内毒素
++++
++++
++++
++--------
1→20样品
稀释内毒素
++++
++++
++++
+---------
表3 样品的干扰实验结果 样品
, http://www.100md.com 样品稀释倍数
内 毒 素 浓 度 (Eu/ml)
阴性对照
2.0
1.0
0.5
0.25
0.125
水稀释内毒素
++++
++++
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++--------
, 百拇医药
原液----------------------
1∶2----------------------
样1
1∶4----------------------
1∶8
++++
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1∶16
++++
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, http://www.100md.com
++++
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原液----------------------
1∶2----------------------
样2
1∶4----------------------
1∶8
++++
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++++----------
1∶16
, 百拇医药
++++
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原液----------------------
1∶2----------------------
样3
1∶4----------------------
1∶8
++++
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++--------
1∶16
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由表2、表3结果可知,复方丹参注射液原液、1∶2、1∶4的稀释液均对TAL有抑制作用;而1∶8的稀释液为最低非抑制浓度,小于最大有效稀释倍数(20倍)。
3.4 热原法与细菌内毒素法检测样品
用热原法和细菌内毒素法分别检查3个厂家6批产品,结果热原法6批阴性,细菌内毒素法6批阴性,符合率100%。
4 讨论
, http://www.100md.com
4.1 干扰实验表明,将样品1∶8稀释后,可排除其对TAL的干扰作用。因此,将样品1∶8稀释,以标示灵敏度为0.5Eu/ml的TAL用于本品的细菌内毒素检查是可行的。
4.2 由于样品的最大有效稀释度与TAL的灵敏度成反比,因此只要选择适当灵敏度的TAL,并对样品作适当稀释处理,就可用TAL检查法来控制本品的细菌内毒素限量。
4.3 从热原法与细菌内毒素法同时进行检测的结果,可判断复方丹参注射液的细菌内毒素检查方法是可行的;且此法快捷、简便,可作为医院或药厂控制此制剂质量的参考。
参考文献
[1] 湖北省卫生厅编.湖北省药品标准.武汉:湖北省卫生厅,1992.347～348
[2] 卫生部药典委员会编.中国药典(二部).北京:化学工业出版社,1995:附录XI E76
(收稿 1998-06-11), 百拇医药