健康人群和肝病患者中检测TTV的意义*
作者：陈雪娟 彭晓谋 高志良 卢建溪 姚集鲁
单位：
关键词：肝炎，病毒性；肝炎病毒；DNA，病毒/分析
世界华人消化杂志990103 中国图书资料分类号 R512.6
摘 要
目的 了解新型肝炎病毒-TTV的致病性和在健康人群和肝病患者中的流行情况.
方法 收集180份健康体检患者血清和156份不同类型肝病患者血清，采用PCR方法检测TTV的DNA. 同时检测HAV，HBV，HCV，HEV和HGV感染标志，比较分析TTV在健康人群和不同类型肝病患者中流行情况及其致病性.
结果 健康体检人群和肝病患者中，TTV DNA检出率分别为2.2%和4.5%，两组间无显著性差异(P>0.05). 体检人群中，ALT正常和升高者的检出率分别为1.7%和14.3%. 急性肝炎，慢性肝炎和肝硬变者的检出率分别为4.8%，4.3%和4.7%. 11例阳性患者中，3例ALT正常，8例ALT异常. 在8例ALT异常患者中，6例为HBV现行感染，1例为HCV现行感染，仅1例为NA-G肝炎患者.
, 百拇医药
结论 在中国健康体检人群和肝病患者中能检出低水平的TTV现行感染. 但似乎仅引起个别患者的转氨酶轻度升高. TTV的致病性可能较弱或需要其他因素协同致病.
Significance of TTV detection in normal population and patients with liver diseases*
CHEN Xue-Juan, PENG Xiao-Mou, GAO Zhi-Liang, LU Jian-Xi and YAO Ji-Lu
Department of Infectious Diseases, Third Affiliated Hospital, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510630, Guangdong Province, China
, http://www.100md.com
Subject headings hepatitis, viral; hepatitis, virus; DNA, viral/analysis
Abstract
AIM To investigate the incidence of TTV infection in normal population and patients with liver diseases, and analyze its pathogenesis.
METHODS PCR was used in the detection of TTV DNA in 180 serum samples from routine medical check up persons and 156 serum samples from various types of liver diseases. Other hepatitis viruses were simultaneously detected using routine methods. Pathogenesis of TTV was analyzed by comparison of TTV infection between normal persons and patients with liver diseases.
, http://www.100md.com
RESULTS TTV DNA was found in 2.2% and 4.5% in routine medical check up persons and liver disease patients respectively, with no significant difference (P>0.05). The positive rates were 1.7% and 14.3% in normal persons and those with elevated ALT level respectively, and 4.8%, 4.3% and 4.7% in patients with acute hepatitis, chronic hepatitis and cirrhosis respectively. There were 6 cases of current HBV infection, 1 case with present HCV infection, only one patient had non A/G hepatitis among 8 positive cases with elevated ALT.
, 百拇医药
CONCLUSION TTV infections are observed in Chinese populations of either normal persons or liver disease patients. The pathogenesis of TTV might be very weak or dependent on the interaction with other factors.
0 引言
目前已发现肝炎病毒6种. 然而，仍有约10%肝炎患者的肝炎病毒血清标志表现为全部阴性，即所谓的非甲/庚型肝炎(Non A/G hepatitis, NA/G)[1-4]. 近来日本学者采用差式文库的分子生物学方法从一例输血后NA/G肝炎患者血清中分离出500bp的DNA片段. 并根据患者的名称命名为TT病毒(TTV)，这种病毒似乎能引起ALT轻度升高[5]. 在中国健康人群中也能检出TTV DNA[6]. 我们进一步检测不同类型肝病患者中TTV流行情况，并分析与健康人群中流行情况的差异，以探讨TTV的致病性和临床意义.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 180例健康体检人群系广东省玻璃厂职工，不同类型肝病患者156例系本科室1998-01/06住院患者. 常规采集静脉血，收集血清标本.
1.2 方法 ①PCR检测TTV DNA：血清采用常规热变性法制备裂解上清，以5＇-GCAGC AGCAT ATGGA TATGT-3＇(TTV1，正义)和5＇-TGACT GTGCT AAAGC CTCTA-3＇(TTV2，反义)为外引物进行第1次扩增. PCR条件：94℃，40s，55℃，40s，72℃，1min，共35个循环. 产物为270bp. 第1次产物再以5＇-CATAC ACATG AATGC CAGGC-3＇(TTV3，正义)和5＇-GTACT TCTTG CTGGT GAAAT-3＇(TTV4，反义)为内引物进行第2次扩增. PCR条件同第1次PCR. 产物为197bp. 20g/L琼脂糖凝胶电泳分析结果. ②其他肝炎病毒血清标志检测：HCV RNA和HGV RNA采用巢式RT-PCR进行检测[7]. 抗-HAV和抗-HGV采用中山生物工程公司试剂进行检测，血清HBV标志和抗-HCV采用美国Abbott试剂进行检测，抗-HEV采用新加坡Genelabs公司试剂进行检测.
, 百拇医药
统计学处理 采用χ2检验或Fisher精确概率计算.
2 结果
2.1 不同人群血清中TTV DNA 巢式PCR检测血清标本中TTV DNA(图1)阳性产物的碱基数与设计相符. 180例体检标本中，5例呈阳性，阳性率为2.2%. 156例肝病患者中，7例呈阳性，阳性率为4.5%. 两组之间无显著性差异(P>0.05). 对180例体检者和156例肝病患者按肝功能和肝炎临床类型分为以下人群进行比较分析，卡方检验或Fisher精确概率计算显示，各人群中TTV的检出率无显著性差异(表1).
图1 PCR检测血清中TTV DNA的产物分析. 1为100bp ladder (GIBco BRL, USA)，2 and 4为阳性结果，3为阴性结果.
, 百拇医药
表1 TTV在不同人群中的流行情况 分组
n
阳性率(%)
正常ALT体检者
173
1.7
异常ALT体检者
7
14.3
急性肝炎
21
4.8
慢性肝炎
, 百拇医药
93
4.3
肝炎肝硬变
43
4.7
2.2 肝病患者中TTV的流行情况 根据其他肝炎病毒感染指标，参照1995年病毒性肝炎防治方案标准对156例肝病患者进行病原学诊断，并比较分析TTV在不同病原学类型中的流行情况，卡方检验或Fisher精确概率计算显示，各型肝炎中TTV的检出率无显著性差异(表2). 在阳性者11例中男8例，女3例，年龄23岁～54岁，平均38.3岁. 3例ALT正常，均系健康体检者. 8例ALT异常，ALT为1233.56nmol/S～5501.1nmol/S，平均为2077.08nmol/S. 8例ALT异常患者中，6例存在现行HBV感染，1例为现行HCV感染，仅1例为肝炎病毒感染标志全阴. 该患者系男性，32岁，体检发现ALT升高2mo入院. ALT为700.14nmol/S～2367.14nmol/S，无黄疸，无输血及血浆史，无饮酒嗜好，无服用肝损药物史，无血吸虫疫水接触史. 血脂正常，大便中未发现肝吸虫卵.表2 不同类型肝炎病毒感染患者中TTV的流行情况 分组
, http://www.100md.com
n
阳性率(%)
NA-G
18
5.6
HAV
7
0.0
HBV
110
4.5
HCV
8
, http://www.100md.com 12.5
HEV
4
0.0
HBV重叠HCV
2
0.0
HBV重叠HEV
7
0.0
3 讨论
日本学者Nishizawa et al采用差式文库方法从输血后Non A/G肝炎患者的血清中分离出病毒克隆N22，并证实其来源于DNA病毒的基因组，因而根据患者的姓名命名为TTV. 参照TTV DNA序列设计引物进行PCR检查发现，5例输血后Non A/G肝炎患者中，3例为阳性，且TTV DNA水平与血清转氨酶的水平相关. 平均于输血后6wk～8wk开始检出，持续约5wk～8wk，其中一例6wk开始检出，观察至21wk时仍为阳性，但DNA水平已开始下降[5]. 在中国ALT升高患者也能检出TTV DNA[6]. 但TTV在中国的流行情况和致病性目前尚不十分清楚.
, 百拇医药
本研究显示，在中国健康体检人群和肝病患者中，TTV DNA检出率分别为2.2%和4.5%，两组之间无显著性差异(P>0.05). TTV检出率相对比较低. 目前只能采用PCR方法直接检测TTV核酸，代表现行感染. 但TTV的病毒血期可能较短，这样既往感染率可能要高一些. 因而，尽快研制抗体检测方法对阐明TTV总感染率非常重要.
在ALT正常者和异常人群中均能检出TTV现行感染，且两者之间无显著性差异. 在ALT异常的阳性患者中绝大部分(7/8)合并具有肯定致病性病毒的现行感染. 在Non A/G肝炎患者中仅5.6%(1/18)为阳性. 因此，TTV的致病性可能较弱或需要其他因素协同致病.
作者简介：陈雪娟，女，1953-03-03生，广东省揭西县人，汉族. 1973年中山医科大学卫校毕业，1995年晋升为主管技师，主要从事病毒性肝炎的实验研究工作，发表论文5篇.
*广东省病毒性肝炎防治专项基金资助，No.31
, 百拇医药
通讯作者 陈雪娟，510630，中山医科大学附属第三医院传染科，广东省广州市石牌岗顶.
*Supported by specific fund of viral hepatitis prevention and treatment, Guangdong Province, No.31
Correspondence to:CHEN Xue-Juan, Department of Infectious Diseases, Third Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510630, Guangdong Province, China
Tel. +86.20.85516867, Fax.+86.20.87536401
, 百拇医药
4 参考文献
[1] Shiffman ML, Luketic VA, Sanyal AJ, Duckworth PF, Purdum PP, 3rd, Contos MJ. Mills AS, Edinboro LE, Poklis A.Hepatic lidocaine metabolism and liver histology in patients with chronic hepatitis and cirrhosis. Hepatology, 1994;19:933-940
[2] Czaja AJ, Carpenter HA, Santrach PJ, Moore SB, Homburger HA. The nature and prognosis of severe cryptogenic chronic active hepatitis. Gastroenterology, 1993;104:1755-1751
, 百拇医药
[3] Karayiannis P, Brind AM, Pickering J, Mathew J, Burt AD, Hess G. Bassendine MF, Thomas HC.Hepatitis G virus does not cause significant liver disease after liver transplantation. J Viral Hepatol, 1998;5:35-42
[4] Guilera M, Saiz JC, Lopez LFX, Olmedo E, Ampurdanes S, Forns X, Bruix J, Pares A, Sanchez Tapias JM, Jimenez de Anta MT, Rodes J. Hepatitis G virus infection in chronic liver disease. Gut, 1998;42:107-111
[5] Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, Yoshizawa H, Miyakawa Y, Mayumi M. A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophy Res Com, 1997;241:92-97
, http://www.100md.com
[6] 彭晓谋，高志良，陈雪娟，卢建溪，周元平，黄仰苏，黄仰苏，姚集鲁. 体检发现谷丙转氨酶升高人群中检出TT病毒. 中山医科大学学报，1999；20：76-79
[7] Lin HJ, Shi N, Mizokami M, Hollinger FB. Polymerase chain reation for hepatitis C virus RNA using a single tube for reverse transcription and serial of anplification with nested primer pairs. J Med Virol, 1992;38:220-225
收稿日期 1998-08-08 修回日期 1998-11-17, http://www.100md.com
单位：
关键词：肝炎，病毒性；肝炎病毒；DNA，病毒/分析
世界华人消化杂志990103 中国图书资料分类号 R512.6
摘 要
目的 了解新型肝炎病毒-TTV的致病性和在健康人群和肝病患者中的流行情况.
方法 收集180份健康体检患者血清和156份不同类型肝病患者血清，采用PCR方法检测TTV的DNA. 同时检测HAV，HBV，HCV，HEV和HGV感染标志，比较分析TTV在健康人群和不同类型肝病患者中流行情况及其致病性.
结果 健康体检人群和肝病患者中，TTV DNA检出率分别为2.2%和4.5%，两组间无显著性差异(P>0.05). 体检人群中，ALT正常和升高者的检出率分别为1.7%和14.3%. 急性肝炎，慢性肝炎和肝硬变者的检出率分别为4.8%，4.3%和4.7%. 11例阳性患者中，3例ALT正常，8例ALT异常. 在8例ALT异常患者中，6例为HBV现行感染，1例为HCV现行感染，仅1例为NA-G肝炎患者.
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结论 在中国健康体检人群和肝病患者中能检出低水平的TTV现行感染. 但似乎仅引起个别患者的转氨酶轻度升高. TTV的致病性可能较弱或需要其他因素协同致病.
Significance of TTV detection in normal population and patients with liver diseases*
CHEN Xue-Juan, PENG Xiao-Mou, GAO Zhi-Liang, LU Jian-Xi and YAO Ji-Lu
Department of Infectious Diseases, Third Affiliated Hospital, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510630, Guangdong Province, China
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Subject headings hepatitis, viral; hepatitis, virus; DNA, viral/analysis
Abstract
AIM To investigate the incidence of TTV infection in normal population and patients with liver diseases, and analyze its pathogenesis.
METHODS PCR was used in the detection of TTV DNA in 180 serum samples from routine medical check up persons and 156 serum samples from various types of liver diseases. Other hepatitis viruses were simultaneously detected using routine methods. Pathogenesis of TTV was analyzed by comparison of TTV infection between normal persons and patients with liver diseases.
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RESULTS TTV DNA was found in 2.2% and 4.5% in routine medical check up persons and liver disease patients respectively, with no significant difference (P>0.05). The positive rates were 1.7% and 14.3% in normal persons and those with elevated ALT level respectively, and 4.8%, 4.3% and 4.7% in patients with acute hepatitis, chronic hepatitis and cirrhosis respectively. There were 6 cases of current HBV infection, 1 case with present HCV infection, only one patient had non A/G hepatitis among 8 positive cases with elevated ALT.
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CONCLUSION TTV infections are observed in Chinese populations of either normal persons or liver disease patients. The pathogenesis of TTV might be very weak or dependent on the interaction with other factors.
0 引言
目前已发现肝炎病毒6种. 然而，仍有约10%肝炎患者的肝炎病毒血清标志表现为全部阴性，即所谓的非甲/庚型肝炎(Non A/G hepatitis, NA/G)[1-4]. 近来日本学者采用差式文库的分子生物学方法从一例输血后NA/G肝炎患者血清中分离出500bp的DNA片段. 并根据患者的名称命名为TT病毒(TTV)，这种病毒似乎能引起ALT轻度升高[5]. 在中国健康人群中也能检出TTV DNA[6]. 我们进一步检测不同类型肝病患者中TTV流行情况，并分析与健康人群中流行情况的差异，以探讨TTV的致病性和临床意义.
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1 材料和方法
1.1 材料 180例健康体检人群系广东省玻璃厂职工，不同类型肝病患者156例系本科室1998-01/06住院患者. 常规采集静脉血，收集血清标本.
1.2 方法 ①PCR检测TTV DNA：血清采用常规热变性法制备裂解上清，以5＇-GCAGC AGCAT ATGGA TATGT-3＇(TTV1，正义)和5＇-TGACT GTGCT AAAGC CTCTA-3＇(TTV2，反义)为外引物进行第1次扩增. PCR条件：94℃，40s，55℃，40s，72℃，1min，共35个循环. 产物为270bp. 第1次产物再以5＇-CATAC ACATG AATGC CAGGC-3＇(TTV3，正义)和5＇-GTACT TCTTG CTGGT GAAAT-3＇(TTV4，反义)为内引物进行第2次扩增. PCR条件同第1次PCR. 产物为197bp. 20g/L琼脂糖凝胶电泳分析结果. ②其他肝炎病毒血清标志检测：HCV RNA和HGV RNA采用巢式RT-PCR进行检测[7]. 抗-HAV和抗-HGV采用中山生物工程公司试剂进行检测，血清HBV标志和抗-HCV采用美国Abbott试剂进行检测，抗-HEV采用新加坡Genelabs公司试剂进行检测.
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统计学处理 采用χ2检验或Fisher精确概率计算.
2 结果
2.1 不同人群血清中TTV DNA 巢式PCR检测血清标本中TTV DNA(图1)阳性产物的碱基数与设计相符. 180例体检标本中，5例呈阳性，阳性率为2.2%. 156例肝病患者中，7例呈阳性，阳性率为4.5%. 两组之间无显著性差异(P>0.05). 对180例体检者和156例肝病患者按肝功能和肝炎临床类型分为以下人群进行比较分析，卡方检验或Fisher精确概率计算显示，各人群中TTV的检出率无显著性差异(表1).
图1 PCR检测血清中TTV DNA的产物分析. 1为100bp ladder (GIBco BRL, USA)，2 and 4为阳性结果，3为阴性结果.
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表1 TTV在不同人群中的流行情况 分组
n
阳性率(%)
正常ALT体检者
173
1.7
异常ALT体检者
7
14.3
急性肝炎
21
4.8
慢性肝炎
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93
4.3
肝炎肝硬变
43
4.7
2.2 肝病患者中TTV的流行情况 根据其他肝炎病毒感染指标，参照1995年病毒性肝炎防治方案标准对156例肝病患者进行病原学诊断，并比较分析TTV在不同病原学类型中的流行情况，卡方检验或Fisher精确概率计算显示，各型肝炎中TTV的检出率无显著性差异(表2). 在阳性者11例中男8例，女3例，年龄23岁～54岁，平均38.3岁. 3例ALT正常，均系健康体检者. 8例ALT异常，ALT为1233.56nmol/S～5501.1nmol/S，平均为2077.08nmol/S. 8例ALT异常患者中，6例存在现行HBV感染，1例为现行HCV感染，仅1例为肝炎病毒感染标志全阴. 该患者系男性，32岁，体检发现ALT升高2mo入院. ALT为700.14nmol/S～2367.14nmol/S，无黄疸，无输血及血浆史，无饮酒嗜好，无服用肝损药物史，无血吸虫疫水接触史. 血脂正常，大便中未发现肝吸虫卵.表2 不同类型肝炎病毒感染患者中TTV的流行情况 分组
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n
阳性率(%)
NA-G
18
5.6
HAV
7
0.0
HBV
110
4.5
HCV
8
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HEV
4
0.0
HBV重叠HCV
2
0.0
HBV重叠HEV
7
0.0
3 讨论
日本学者Nishizawa et al采用差式文库方法从输血后Non A/G肝炎患者的血清中分离出病毒克隆N22，并证实其来源于DNA病毒的基因组，因而根据患者的姓名命名为TTV. 参照TTV DNA序列设计引物进行PCR检查发现，5例输血后Non A/G肝炎患者中，3例为阳性，且TTV DNA水平与血清转氨酶的水平相关. 平均于输血后6wk～8wk开始检出，持续约5wk～8wk，其中一例6wk开始检出，观察至21wk时仍为阳性，但DNA水平已开始下降[5]. 在中国ALT升高患者也能检出TTV DNA[6]. 但TTV在中国的流行情况和致病性目前尚不十分清楚.
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本研究显示，在中国健康体检人群和肝病患者中，TTV DNA检出率分别为2.2%和4.5%，两组之间无显著性差异(P>0.05). TTV检出率相对比较低. 目前只能采用PCR方法直接检测TTV核酸，代表现行感染. 但TTV的病毒血期可能较短，这样既往感染率可能要高一些. 因而，尽快研制抗体检测方法对阐明TTV总感染率非常重要.
在ALT正常者和异常人群中均能检出TTV现行感染，且两者之间无显著性差异. 在ALT异常的阳性患者中绝大部分(7/8)合并具有肯定致病性病毒的现行感染. 在Non A/G肝炎患者中仅5.6%(1/18)为阳性. 因此，TTV的致病性可能较弱或需要其他因素协同致病.
作者简介：陈雪娟，女，1953-03-03生，广东省揭西县人，汉族. 1973年中山医科大学卫校毕业，1995年晋升为主管技师，主要从事病毒性肝炎的实验研究工作，发表论文5篇.
*广东省病毒性肝炎防治专项基金资助，No.31
, 百拇医药
通讯作者 陈雪娟，510630，中山医科大学附属第三医院传染科，广东省广州市石牌岗顶.
*Supported by specific fund of viral hepatitis prevention and treatment, Guangdong Province, No.31
Correspondence to:CHEN Xue-Juan, Department of Infectious Diseases, Third Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510630, Guangdong Province, China
Tel. +86.20.85516867, Fax.+86.20.87536401
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4 参考文献
[1] Shiffman ML, Luketic VA, Sanyal AJ, Duckworth PF, Purdum PP, 3rd, Contos MJ. Mills AS, Edinboro LE, Poklis A.Hepatic lidocaine metabolism and liver histology in patients with chronic hepatitis and cirrhosis. Hepatology, 1994;19:933-940
[2] Czaja AJ, Carpenter HA, Santrach PJ, Moore SB, Homburger HA. The nature and prognosis of severe cryptogenic chronic active hepatitis. Gastroenterology, 1993;104:1755-1751
, 百拇医药
[3] Karayiannis P, Brind AM, Pickering J, Mathew J, Burt AD, Hess G. Bassendine MF, Thomas HC.Hepatitis G virus does not cause significant liver disease after liver transplantation. J Viral Hepatol, 1998;5:35-42
[4] Guilera M, Saiz JC, Lopez LFX, Olmedo E, Ampurdanes S, Forns X, Bruix J, Pares A, Sanchez Tapias JM, Jimenez de Anta MT, Rodes J. Hepatitis G virus infection in chronic liver disease. Gut, 1998;42:107-111
[5] Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, Yoshizawa H, Miyakawa Y, Mayumi M. A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophy Res Com, 1997;241:92-97
, http://www.100md.com
[6] 彭晓谋，高志良，陈雪娟，卢建溪，周元平，黄仰苏，黄仰苏，姚集鲁. 体检发现谷丙转氨酶升高人群中检出TT病毒. 中山医科大学学报，1999；20：76-79
[7] Lin HJ, Shi N, Mizokami M, Hollinger FB. Polymerase chain reation for hepatitis C virus RNA using a single tube for reverse transcription and serial of anplification with nested primer pairs. J Med Virol, 1992;38:220-225
收稿日期 1998-08-08 修回日期 1998-11-17, http://www.100md.com