茶多酚抑制MDA生成及对阿霉素在小鼠肝细胞内蓄积的影响
作者：树华 杨林 齐亚娟 韩淑英 张惠珠 朱丽莎
单位：树华 杨林 齐亚娟 韩淑英 张惠珠 朱丽莎(华北煤炭医学 院药理教研室 唐山 063000)
关键词：茶多酚；阿霉素；耐受性
西北药学杂志000211 摘要 荧光光度法测定MDA及阿霉素在小鼠肝细胞内的含量；研究茶多酚 抑制MDA的生成与阿霉素胞内蓄积的关系。结果表明，茶多酚浓度为10，20，40，80，160mg /L时对MDA生成的抑制率分别为44.87%，115.17%，177.25%，181.98%，182.37%，且与 剂量成正相关。在*OH诱导下，茶多酚浓度为40mg/L时，可明显增加阿霉素在小鼠肝组织细 胞内的蓄积。
Effects of tea polyphenols on inhibition of MDA production and ADM leve l in mice heptic cells
, 百拇医药
Wang Shuhua Yang Lin Qi Yajuan Han Shuying Zhang Huizhu Zhu Lis ha
(Department of Pharmacology, China North Coal Medical College, Tang shan, 063000)
ABSTRACT The paper was designed to study the effects of tea p olyphenols on the production of lipidperoxide and adriamycin accumulation in mic e liver cells. With determination of the contents of MDA and adriamycin by fluor ometry, the results showed the inhibitory rates of test groups were 44.87%,115 .17%,177.25%,181.98,182.37% respectively when the concentration of tea poly phenols were 10,20,40,80,160mg/L. Under the circumstance of.OH inducing, the l evel of adriamycin in mice liver cells was the highest when 40mg/L tea polypheno ls was added.
, 百拇医药
KEY WORDS tea polyphenols; adriamycin; resistance
茶多酚是从绿茶中提取的多酚类化合物，有较强的清除.OH作用 〔1，2〕。细胞对抗癌药产生耐药是影响其临床效果的主要原因之一。其中，多药耐药 表现为胞内抗癌药的蓄积量降低。我们的前期研究表明：耐药细胞中MDA含量比敏感细胞高 〔3〕。为了探讨清除自由基的药物对阿霉素(ADM)在细胞内蓄积量的影响，进行了 如下实验。
1 仪器与试药
1.1 仪器 日立851型荧光分光光度计(日本)。
1.2 试药 茶多酚(购自浙江农业大学)；阿霉素(华明医 药有限公司)；硫代巴比妥酸(TBA)。
1.3 动物 昆明种小鼠(华北煤炭医学院实验动物中心) 。
, 百拇医药
2 方法
2.1 小鼠肝细胞混悬液的制备 小鼠10只(雌雄兼有)， 断颈处死，迅速剖取肝脏，过100目筛，用冰冷的PBS洗脱，离心5min(3000r/min)，计数后 制成同细胞数的混悬液，并分成14份。
2.2 .OH诱导肝细胞膜MDA生成的模型〔4〕 分 别取鼠肝细胞混悬液0.5ml 7份(4.8×107个)，加入不同浓度茶多酚0.1ml，于37℃水 浴5min，除空白对照组外，各组加152mg/L硫酸亚铁溶液2ml，175.6mg/L半胱氨酸溶液0.2 ml，加水至1ml，37℃水浴放置20min，加20%三氯醋酸0.6ml终止反应。离心10min(3000r/m in)。取上清液0.5ml用八木国夫法测定MDA生成量〔5〕：加水0.5ml，加28.1mmo l/L TBA 1.0ml，混匀后于95℃水浴保温1h，冷却，加正丁醇5.0ml抽提，离心(3000r/min )。取上层液测荧光强度(狭缝10nm，Ex 523nm，Em 553nm)，计算茶多酚对.OH诱导MDA 生成的抑制率。ADM在小鼠肝细胞内蓄积量系反复冻融法破碎细胞离心后，取上清液直接测 定荧光强度。
, 百拇医药
3 结果
3.1 茶多酚对.OH诱导小鼠肝细胞MDA生成的影响 茶多酚组与肝细胞混悬液/.OH组比较，除10mg/L浓度外，各组MDA含量均明显下 降，表明茶多酚对.OH诱导鼠肝组织MDA生成有明显的抑制作用，并有一定剂量依赖性(见表1)。
3.2 .OH诱导生成，茶多酚对ADM在小鼠肝细胞内蓄积的影响 茶多酚各组随药物浓度增加，ADM进入细胞内的量逐渐增加，40mg/L组ADM蓄积量增加最为明 显(见表1)。
以MDA荧光强度值(x)对进入细胞内ADM荧光强度值(y)回归，r＝-0.8488，r2＝0.7205 ，表明进入细胞内ADM量与MDA量相关。
, 百拇医药
表1 茶多酚对小鼠肝细胞MDA生成及胞内ADM蓄积的影 响 组 别
茶多酚(mg/L )
MDA荧光强度
抑制率(%)
ADM荧光强度值
肝细胞
0
3.42±0.16
0.25±0.05
肝细胞/.OH
, http://www.100md.com
0
6.50±0.05
0.29±0.07
肝细胞/.OH+茶多酚
10
5.12±0.94△△**
0.30±0.0 7
20
2.96±0.52**
115
, 百拇医药
0.32±0.07
40
1.05±0.20△△**
174
0.36±0.09△△
80
0.90±0.21△△**
185
0.34±0.07△
160
0.89±0.29△△**
, 百拇医药
128
0.32±0.06
与肝细胞组比较△P<0.05，△△P<0.01 与肝细胞/.OH组比较 **P <0.01
4 讨论
在某些病理情况下，氧自由基增多，特别是.OH，使生物膜中不饱和脂肪酸发生过氧化 反应 ，生成丙二醛(MDA)。MDA极易与磷脂蛋白发生反应，使膜的基本特性改变，尤其使膜的流动 性降低，使药物易化扩散和主动转运过程受到影响，而使细胞内的药物蓄积减少〔6〕 。提高ADM在细胞内蓄积对克服肿瘤细胞的耐药具有重要意义。
实验结果表明，茶多酚对.OH诱导的小鼠肝细胞膜MDA的生成有明显的抑制作用，且有剂 量依赖性，提示茶多酚在抑制MDA生成后，可能通过某种机制来增强膜的流动性及跨膜转运 功能，使ADM在胞内蓄积增加。但茶多酚浓度在80mg/L时，ADM在胞内蓄积量有所下降，可能 由于细胞膜的通透性过大，反而使ADM外排增加，或茶多酚毒性作用所致。
, http://www.100md.com
参考文献
〔1〕李莉，吴若钅 术.五味子酚对氧自由基损伤小鼠脾淋巴细胞的保护作用.药学学报，1997，32(3)：179
〔2〕陈小夏，何冰.茶多酚清除氧自由基与抗脂质过氧 化作用.中药材，1998，21(3)：143
〔3〕杨林，贾秀荣，付定一.耐药细胞KBⅤ200及其敏 感细胞KB过氧化脂质的比较研究.中国药理学会通讯，1998，15(2)：17
〔4〕陈顺志，康辉，阮启志.过氧化脂质测定技术进展 .临床检验杂志，1989，7(2)：98
〔5〕Yagi KA. Plasma lipidperoxide levels in an u rbanized micronesian population-nauru. J Nutr Sci Vitaminol, 1981,27:425
〔6〕傅亚珍.生物膜及其功能的量热学研究.生物化学 与生物物理进展，1984，3：20
(收稿：1999-10-18), 百拇医药
单位：树华 杨林 齐亚娟 韩淑英 张惠珠 朱丽莎(华北煤炭医学 院药理教研室 唐山 063000)
关键词：茶多酚；阿霉素；耐受性
西北药学杂志000211 摘要 荧光光度法测定MDA及阿霉素在小鼠肝细胞内的含量；研究茶多酚 抑制MDA的生成与阿霉素胞内蓄积的关系。结果表明，茶多酚浓度为10，20，40，80，160mg /L时对MDA生成的抑制率分别为44.87%，115.17%，177.25%，181.98%，182.37%，且与 剂量成正相关。在*OH诱导下，茶多酚浓度为40mg/L时，可明显增加阿霉素在小鼠肝组织细 胞内的蓄积。
Effects of tea polyphenols on inhibition of MDA production and ADM leve l in mice heptic cells
, 百拇医药
Wang Shuhua Yang Lin Qi Yajuan Han Shuying Zhang Huizhu Zhu Lis ha
(Department of Pharmacology, China North Coal Medical College, Tang shan, 063000)
ABSTRACT The paper was designed to study the effects of tea p olyphenols on the production of lipidperoxide and adriamycin accumulation in mic e liver cells. With determination of the contents of MDA and adriamycin by fluor ometry, the results showed the inhibitory rates of test groups were 44.87%,115 .17%,177.25%,181.98,182.37% respectively when the concentration of tea poly phenols were 10,20,40,80,160mg/L. Under the circumstance of.OH inducing, the l evel of adriamycin in mice liver cells was the highest when 40mg/L tea polypheno ls was added.
, 百拇医药
KEY WORDS tea polyphenols; adriamycin; resistance
茶多酚是从绿茶中提取的多酚类化合物，有较强的清除.OH作用 〔1，2〕。细胞对抗癌药产生耐药是影响其临床效果的主要原因之一。其中，多药耐药 表现为胞内抗癌药的蓄积量降低。我们的前期研究表明：耐药细胞中MDA含量比敏感细胞高 〔3〕。为了探讨清除自由基的药物对阿霉素(ADM)在细胞内蓄积量的影响，进行了 如下实验。
1 仪器与试药
1.1 仪器 日立851型荧光分光光度计(日本)。
1.2 试药 茶多酚(购自浙江农业大学)；阿霉素(华明医 药有限公司)；硫代巴比妥酸(TBA)。
1.3 动物 昆明种小鼠(华北煤炭医学院实验动物中心) 。
, 百拇医药
2 方法
2.1 小鼠肝细胞混悬液的制备 小鼠10只(雌雄兼有)， 断颈处死，迅速剖取肝脏，过100目筛，用冰冷的PBS洗脱，离心5min(3000r/min)，计数后 制成同细胞数的混悬液，并分成14份。
2.2 .OH诱导肝细胞膜MDA生成的模型〔4〕 分 别取鼠肝细胞混悬液0.5ml 7份(4.8×107个)，加入不同浓度茶多酚0.1ml，于37℃水 浴5min，除空白对照组外，各组加152mg/L硫酸亚铁溶液2ml，175.6mg/L半胱氨酸溶液0.2 ml，加水至1ml，37℃水浴放置20min，加20%三氯醋酸0.6ml终止反应。离心10min(3000r/m in)。取上清液0.5ml用八木国夫法测定MDA生成量〔5〕：加水0.5ml，加28.1mmo l/L TBA 1.0ml，混匀后于95℃水浴保温1h，冷却，加正丁醇5.0ml抽提，离心(3000r/min )。取上层液测荧光强度(狭缝10nm，Ex 523nm，Em 553nm)，计算茶多酚对.OH诱导MDA 生成的抑制率。ADM在小鼠肝细胞内蓄积量系反复冻融法破碎细胞离心后，取上清液直接测 定荧光强度。
, 百拇医药
3 结果
3.1 茶多酚对.OH诱导小鼠肝细胞MDA生成的影响 茶多酚组与肝细胞混悬液/.OH组比较，除10mg/L浓度外，各组MDA含量均明显下 降，表明茶多酚对.OH诱导鼠肝组织MDA生成有明显的抑制作用，并有一定剂量依赖性(见表1)。
3.2 .OH诱导生成，茶多酚对ADM在小鼠肝细胞内蓄积的影响 茶多酚各组随药物浓度增加，ADM进入细胞内的量逐渐增加，40mg/L组ADM蓄积量增加最为明 显(见表1)。
以MDA荧光强度值(x)对进入细胞内ADM荧光强度值(y)回归，r＝-0.8488，r2＝0.7205 ，表明进入细胞内ADM量与MDA量相关。
, 百拇医药
表1 茶多酚对小鼠肝细胞MDA生成及胞内ADM蓄积的影 响 组 别
茶多酚(mg/L )
MDA荧光强度
抑制率(%)
ADM荧光强度值
肝细胞
0
3.42±0.16
0.25±0.05
肝细胞/.OH
, http://www.100md.com
0
6.50±0.05
0.29±0.07
肝细胞/.OH+茶多酚
10
5.12±0.94△△**
0.30±0.0 7
20
2.96±0.52**
115
, 百拇医药
0.32±0.07
40
1.05±0.20△△**
174
0.36±0.09△△
80
0.90±0.21△△**
185
0.34±0.07△
160
0.89±0.29△△**
, 百拇医药
128
0.32±0.06
与肝细胞组比较△P<0.05，△△P<0.01 与肝细胞/.OH组比较 **P <0.01
4 讨论
在某些病理情况下，氧自由基增多，特别是.OH，使生物膜中不饱和脂肪酸发生过氧化 反应 ，生成丙二醛(MDA)。MDA极易与磷脂蛋白发生反应，使膜的基本特性改变，尤其使膜的流动 性降低，使药物易化扩散和主动转运过程受到影响，而使细胞内的药物蓄积减少〔6〕 。提高ADM在细胞内蓄积对克服肿瘤细胞的耐药具有重要意义。
实验结果表明，茶多酚对.OH诱导的小鼠肝细胞膜MDA的生成有明显的抑制作用，且有剂 量依赖性，提示茶多酚在抑制MDA生成后，可能通过某种机制来增强膜的流动性及跨膜转运 功能，使ADM在胞内蓄积增加。但茶多酚浓度在80mg/L时，ADM在胞内蓄积量有所下降，可能 由于细胞膜的通透性过大，反而使ADM外排增加，或茶多酚毒性作用所致。
, http://www.100md.com
参考文献
〔1〕李莉，吴若钅 术.五味子酚对氧自由基损伤小鼠脾淋巴细胞的保护作用.药学学报，1997，32(3)：179
〔2〕陈小夏，何冰.茶多酚清除氧自由基与抗脂质过氧 化作用.中药材，1998，21(3)：143
〔3〕杨林，贾秀荣，付定一.耐药细胞KBⅤ200及其敏 感细胞KB过氧化脂质的比较研究.中国药理学会通讯，1998，15(2)：17
〔4〕陈顺志，康辉，阮启志.过氧化脂质测定技术进展 .临床检验杂志，1989，7(2)：98
〔5〕Yagi KA. Plasma lipidperoxide levels in an u rbanized micronesian population-nauru. J Nutr Sci Vitaminol, 1981,27:425
〔6〕傅亚珍.生物膜及其功能的量热学研究.生物化学 与生物物理进展，1984，3：20
(收稿：1999-10-18), 百拇医药