癌基因蛋白cyclinD1、p21 ras在大肠癌和腺瘤组织中的表达
作者：任占平 黄健辉 石喆 陈蔚麟 唐德艳 戴文斌
单位：任占平 黄健辉 石喆 陈蔚麟 唐德艳 戴文斌(广西柳州市人民医院病理科，柳州 545001)
关键词：结肠肿瘤；腺瘤；癌基因蛋白质类；原癌基因蛋白质p21(ras)
临床与实验病理学杂志990138中国图书分类号 R735.3；R392
文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)01-0049-02
为探讨cyclinD1与p21ras癌基因蛋白表达失调在大肠癌发生机制中的作用并尝试以cyclinD1作为大肠癌早期诊断的肿瘤标记，本研究用免疫组化法检测大肠良、恶性病变中cyclinD1和p21 ras蛋白的表达，现报道如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 收集我院1995～1997年大肠腺癌60例，癌旁粘膜30例，腺瘤癌变5例，管状腺瘤和绒毛状腺瘤各20例。腺癌组高、中、低分化腺癌分别为11、29、20例，管状腺瘤和绒毛状腺瘤伴不典型性增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3、3、4例和8、5、7例。另取10例正常大肠组织为对照组。组织经常规包埋切片。
1.2 方法 免疫组化采用S-P法，cyclinD1(DCS-6)单抗为美国NeoMarkers公司产品，p21 ras单抗为Zymed公司产品。一抗稀释度均为1∶50。cyclinD1以核内而p21 ras以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性标记。结果判断分为4组：弱阳性(+)，阳性细胞数小于5%，浅黄色；中度阳性(++)，阳性细胞数5%～30%，棕黄色；强阳性(+++)，阳性细胞数大于50%，棕褐色；无阳性着色细胞为阳性(-)。结果经统计学处理，行χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
cyclinD1和p21 ras在各组中的表达见表1。二者在腺瘤、腺瘤癌变和腺癌各组中的阳性表达率均显著高于癌旁粘膜及对照组(P<0.01)。cyclinD1仅在2例癌旁粘膜内显示少许腺上皮细胞核内的阳性，而在腺瘤、腺瘤癌变、腺癌组中多呈灶状或弥漫分布。癌组中cyclinD1中至强阳性为55.0%(33/60)且在中、低分化腺癌，cyclinD1的阳性强度明显高于高分化者。在有淋巴结转移组中cyclinD1中至强阳性为85.7%(18/21)，显著高于无淋巴结转移组的25.0%(15/34)，(P<0.01)。在Dukes B、C期中，cyclinD1中至强阳性分别为44.8%(13/29)和87.5%(18/21)，高于A期的20.0%(2/10)。
表1 cyclinD1,p21 ras免疫组化检测在各组中的表达情况 组织学类型
n
, http://www.100md.com
cyclinD1
阳性率
(%)
p21 ras
阳性率
(%)
-
+
++
+++
-
+
++
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+++
正常大肠粘膜
10
10
0
0
0
0
10
0
0
0
0
癌旁粘膜
, 百拇医药
30
28
2
0
0
6.6
27
3
0
0
10.0
大肠腺瘤
40
16
, http://www.100md.com
10
13
1
60.0
20
5
10
5
50.5
管状腺瘤
不典型性增生Ⅰ级
13
10
, http://www.100md.com 3
0
0
11
2
0
0
不典型性增生Ⅱ级
3
1
0
2
0
1
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0
2
0
不典型性增生Ⅲ级
4
1
1
2
0
1
0
2
1
绒毛状腺瘤
, 百拇医药
不典型性增生Ⅰ级
8
4
4
0
0
5
2
1
0
不典型性增生Ⅱ级
5
0
1
, http://www.100md.com
4
0
1
1
2
1
不典型性增生Ⅲ级
7
0
1
5
1
1
0
, http://www.100md.com
3
3
大肠腺瘤癌变
5
0
1
2
2
100.0
1
0
2
2
80.0
, http://www.100md.com
大肠腺癌
60
19
8
15
18
68.3
17
2
24
17
71.6
高分化
11
, 百拇医药
6
3
2
0
4
1
4
2
中分化
29
11
3
7
8
, http://www.100md.com
10
0
13
6
低分化
20
2
2
6
10
3
1
7
9
, 百拇医药
cyclinD1在腺瘤伴不典型性增生组Ⅱ～Ⅲ级中阳性率89.4%(17/19)且中至强阳性为73.6%(14/19)，明显高于伴不典型性增生Ⅰ级(P<0.01)。随着腺瘤伴不典型性增生程度的加重，cyclinD1的阳性率及阳性表达强度也逐渐增高，这在大肠绒毛状腺瘤中尤为明显。腺瘤癌变组中cyclinD1中至强阳性为80.0%(4/5)，其阳性表达可见于腺瘤癌变区及与之相邻的重度不典型性增生腺上皮内。
在腺瘤伴不典型性增行Ⅱ～Ⅲ级14例cyclinD1中至强阳性者中，p21 ras同时阳性为71.4%(10/14)。腺瘤癌变和腺癌组中，cyclinD1与p21 ras双阳性分别为80.0%(4/5)和58.3%(35/60)，cyclinD1与p21 ras在上述三组中的阳性表达均具显著相关性(P<0.01)。
3 讨论
cyclinD1已被证实为原癌基因，其作为限制调控G1期进程中最重要的正性调控基因，其过度表达和错误调控均可导致细胞周期调控异常，从而发生肿瘤〔1，2〕。在正常细胞周期中，cyclinD1蛋白是特定时相短暂出现的基因表达产物，其半衰期约20分钟，用cyclinD1(DCS-6)单抗免疫组化检测正常组织中常为阴性或弱阳性表达，当cyclinD1蛋白异常增高时，免疫组化法则易检出〔2，3〕。本组检测发现，在腺瘤伴不典型性增生Ⅱ～Ⅲ级、腺瘤癌变及腺癌组中cyclinD1中至强阳性表达分别为73.6%、80.0%和55.0%，且在淋巴转移组中均呈中至强阳性表达，表明cyclinD1的异常可能涉及大肠癌的发生、发展过程并可能是一个早期事件。在大肠腺瘤中观察cyclinD1的阳性表达有可能作为早期预测腺瘤恶变的一个诊断指标。
, 百拇医药
ras癌基因蛋白的过度表达是大肠癌发生中的早期事件并与腺瘤的恶性转化有关，而ras的诱导对细胞周期从G0到G1和S期是必需的〔4〕。研究表明，cyclinD1的过度表达可与ras协同、转化原代培养的大鼠肾细胞。Hinds等〔5〕在培养的小鼠肾细胞中导入cyclinD1质粒、腺病毒5型E1A基因的pm928突变的等位基因及ras基因时，观察到由它们诱导的细胞出现迅速、大量地生长并含有高度转化的细胞。本组腺瘤伴不典型性增生Ⅱ～Ⅲ级、腺瘤癌变和腺癌组中cyclinD1与p21 ras的阳性表达均具显著相关性，表明二者的协同作用可能与大肠癌的发生、发展及腺瘤恶性转化密切相关。在腺瘤中同时检测此两种癌基因蛋白，将有助于早期发现大肠癌尚处于腺瘤阶段的早期基因变异，为大肠癌的早期诊断提供帮助。
参考文献
1，Marx J. How cells cycle toward cancer. Science,1994;263:319
, http://www.100md.com
2，孙宝华，武忠弼，阮幼冰.细胞周期蛋白与肿瘤.国外医学分子生物学分册，1996;18(6):278
3，高 鹏，王美清.细胞周期素D与细胞癌变.国外医学肿瘤分册，1998；25(2)：72
4，李本全，李清泉，潘显光.细胞周期蛋白与肺癌.国外医学呼吸系统分册，1997;17(3):151
5，Hinds PW, Doway SF, Eaton E N et al. Function of ahumam cyclin gene as an oncogene. Cell Biology, 1994;91:703
收稿日期：1998-09-30, 百拇医药
单位：任占平 黄健辉 石喆 陈蔚麟 唐德艳 戴文斌(广西柳州市人民医院病理科，柳州 545001)
关键词：结肠肿瘤；腺瘤；癌基因蛋白质类；原癌基因蛋白质p21(ras)
临床与实验病理学杂志990138中国图书分类号 R735.3；R392
文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)01-0049-02
为探讨cyclinD1与p21ras癌基因蛋白表达失调在大肠癌发生机制中的作用并尝试以cyclinD1作为大肠癌早期诊断的肿瘤标记，本研究用免疫组化法检测大肠良、恶性病变中cyclinD1和p21 ras蛋白的表达，现报道如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 收集我院1995～1997年大肠腺癌60例，癌旁粘膜30例，腺瘤癌变5例，管状腺瘤和绒毛状腺瘤各20例。腺癌组高、中、低分化腺癌分别为11、29、20例，管状腺瘤和绒毛状腺瘤伴不典型性增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3、3、4例和8、5、7例。另取10例正常大肠组织为对照组。组织经常规包埋切片。
1.2 方法 免疫组化采用S-P法，cyclinD1(DCS-6)单抗为美国NeoMarkers公司产品，p21 ras单抗为Zymed公司产品。一抗稀释度均为1∶50。cyclinD1以核内而p21 ras以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性标记。结果判断分为4组：弱阳性(+)，阳性细胞数小于5%，浅黄色；中度阳性(++)，阳性细胞数5%～30%，棕黄色；强阳性(+++)，阳性细胞数大于50%，棕褐色；无阳性着色细胞为阳性(-)。结果经统计学处理，行χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
cyclinD1和p21 ras在各组中的表达见表1。二者在腺瘤、腺瘤癌变和腺癌各组中的阳性表达率均显著高于癌旁粘膜及对照组(P<0.01)。cyclinD1仅在2例癌旁粘膜内显示少许腺上皮细胞核内的阳性，而在腺瘤、腺瘤癌变、腺癌组中多呈灶状或弥漫分布。癌组中cyclinD1中至强阳性为55.0%(33/60)且在中、低分化腺癌，cyclinD1的阳性强度明显高于高分化者。在有淋巴结转移组中cyclinD1中至强阳性为85.7%(18/21)，显著高于无淋巴结转移组的25.0%(15/34)，(P<0.01)。在Dukes B、C期中，cyclinD1中至强阳性分别为44.8%(13/29)和87.5%(18/21)，高于A期的20.0%(2/10)。
表1 cyclinD1,p21 ras免疫组化检测在各组中的表达情况 组织学类型
n
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cyclinD1
阳性率
(%)
p21 ras
阳性率
(%)
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+
++
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正常大肠粘膜
10
10
0
0
0
0
10
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0
癌旁粘膜
, 百拇医药
30
28
2
0
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6.6
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10.0
大肠腺瘤
40
16
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10
13
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60.0
20
5
10
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50.5
管状腺瘤
不典型性增生Ⅰ级
13
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0
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绒毛状腺瘤
, 百拇医药
不典型性增生Ⅰ级
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不典型性增生Ⅱ级
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不典型性增生Ⅲ级
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大肠腺瘤癌变
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大肠腺癌
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高分化
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中分化
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低分化
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cyclinD1在腺瘤伴不典型性增生组Ⅱ～Ⅲ级中阳性率89.4%(17/19)且中至强阳性为73.6%(14/19)，明显高于伴不典型性增生Ⅰ级(P<0.01)。随着腺瘤伴不典型性增生程度的加重，cyclinD1的阳性率及阳性表达强度也逐渐增高，这在大肠绒毛状腺瘤中尤为明显。腺瘤癌变组中cyclinD1中至强阳性为80.0%(4/5)，其阳性表达可见于腺瘤癌变区及与之相邻的重度不典型性增生腺上皮内。
在腺瘤伴不典型性增行Ⅱ～Ⅲ级14例cyclinD1中至强阳性者中，p21 ras同时阳性为71.4%(10/14)。腺瘤癌变和腺癌组中，cyclinD1与p21 ras双阳性分别为80.0%(4/5)和58.3%(35/60)，cyclinD1与p21 ras在上述三组中的阳性表达均具显著相关性(P<0.01)。
3 讨论
cyclinD1已被证实为原癌基因，其作为限制调控G1期进程中最重要的正性调控基因，其过度表达和错误调控均可导致细胞周期调控异常，从而发生肿瘤〔1，2〕。在正常细胞周期中，cyclinD1蛋白是特定时相短暂出现的基因表达产物，其半衰期约20分钟，用cyclinD1(DCS-6)单抗免疫组化检测正常组织中常为阴性或弱阳性表达，当cyclinD1蛋白异常增高时，免疫组化法则易检出〔2，3〕。本组检测发现，在腺瘤伴不典型性增生Ⅱ～Ⅲ级、腺瘤癌变及腺癌组中cyclinD1中至强阳性表达分别为73.6%、80.0%和55.0%，且在淋巴转移组中均呈中至强阳性表达，表明cyclinD1的异常可能涉及大肠癌的发生、发展过程并可能是一个早期事件。在大肠腺瘤中观察cyclinD1的阳性表达有可能作为早期预测腺瘤恶变的一个诊断指标。
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ras癌基因蛋白的过度表达是大肠癌发生中的早期事件并与腺瘤的恶性转化有关，而ras的诱导对细胞周期从G0到G1和S期是必需的〔4〕。研究表明，cyclinD1的过度表达可与ras协同、转化原代培养的大鼠肾细胞。Hinds等〔5〕在培养的小鼠肾细胞中导入cyclinD1质粒、腺病毒5型E1A基因的pm928突变的等位基因及ras基因时，观察到由它们诱导的细胞出现迅速、大量地生长并含有高度转化的细胞。本组腺瘤伴不典型性增生Ⅱ～Ⅲ级、腺瘤癌变和腺癌组中cyclinD1与p21 ras的阳性表达均具显著相关性，表明二者的协同作用可能与大肠癌的发生、发展及腺瘤恶性转化密切相关。在腺瘤中同时检测此两种癌基因蛋白，将有助于早期发现大肠癌尚处于腺瘤阶段的早期基因变异，为大肠癌的早期诊断提供帮助。
参考文献
1，Marx J. How cells cycle toward cancer. Science,1994;263:319
, http://www.100md.com
2，孙宝华，武忠弼，阮幼冰.细胞周期蛋白与肿瘤.国外医学分子生物学分册，1996;18(6):278
3，高 鹏，王美清.细胞周期素D与细胞癌变.国外医学肿瘤分册，1998；25(2)：72
4，李本全，李清泉，潘显光.细胞周期蛋白与肺癌.国外医学呼吸系统分册，1997;17(3):151
5，Hinds PW, Doway SF, Eaton E N et al. Function of ahumam cyclin gene as an oncogene. Cell Biology, 1994;91:703
收稿日期：1998-09-30, 百拇医药