抗Sa抗体的检测及其临床意义
作者：程秀峰 曾庆馀 陈肃标 谢素和 许杰州 肖征宇 黄少弼
单位：程秀峰(515031 汕头大学医学院风湿病研究室)；曾庆馀(515031 汕头大学医学院风湿病研究室)；陈肃标(515031 汕头大学医学院风湿病研究室)；谢素和(515031 汕头大学医学院风湿病研究室)；许杰州(515031 汕头大学医学院风湿病研究室)；肖征宇(515031 汕头大学医学院风湿病研究室)
关键词：关节炎，类风湿；抗Sa抗体；临床意义
中华风湿病学杂志000409 【摘 要】 目的 了解抗Sa抗体的临床意义。方法 从新鲜人胎盘中提取Sa抗原，应用免疫印迹法检测类风湿关节炎(RA)及其他风湿病患者血清的抗Sa抗体，结合临床资料进行分析。结果 192例RA中抗Sa抗体阳性65例，对RA诊断的敏感性为33.9%，特异性为96.9%。其中同时出现相对分子量为50 000、55 000两条带的15例(23.1%)，其医师和患者对病情活动性的评价、患者对关节痛的评价及C反应蛋白(CRP)增高与单独出现50 000条带者相比，均显著增高。31例早期RA抗Sa抗体阳性率为32.3%，9例经随访确诊RA者4例抗Sa抗体阳性；63例RF阴性RA中抗Sa抗体阳性率为27%。抗Sa抗体阳性组以小关节起病为主，且RF滴度明显较阴性组高。结论 抗Sa抗体有助于早期RA和RF阴性RA诊断，同时出现50 000、55 000两条带可能与病情活动有关。
Anti-Sa antibody in rheumatoid arthritis
CHENG Xiufeng,ZENG Qingyu,CHEN Subiao,et al.
Department of Rheumatology,Shantou University Medical College,Shantou 515031,China
【Abstract】 Objective To investigate the significance of anti Sa antibody in rheumatoid arthritis (RA).Methods Sa antigen was extracted from human fresh placenta.Anti-Sa antibody was detected at the sera titer of 1∶40 using Western blotting,and its clinical significance was investigated with the corresponding clinical materials.Results Anti-Sa antibody was found in 33.9% (65/192) of RA patients.Its specificity for RA was 96.9%.The scores of patient′s and physician′s global assessment of disease activity,patient′s assessment of pain and level of C-reaction protein were higher in anti-Sa antibody existed with 50 000 and 55 000 bands than that in anti-Sa antibody with single 50 000 band.Anti-Sa antibody was detected in 32.3% (10/31) of early RA patients and in 27% (17/63) of RF negative RA patients.Anti-Sa antibody was also found in 4 of 9 RA patients at the time when the diagnosis could not be established.The titers of RF in the anti-Sa positive RA patients were higher than the negative ones.Conclusion Anti-Sa antibody is a valuable diagnostic parameter for RA,especially in early RA and RF negative RA. Anti-Sa antibody with both 50 000 and 55 000 bands could be related to disease activity.
【Key words】 Arthritis,rheumatoid; Anti-Sa antibody; Clinical significance
1994年加拿大学者Despres等[1]首次报道从人脾脏中提取Sa抗原，应用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)在42.7%类风湿关节炎(RA)患者中检测出抗Sa抗体，特异性高达98.9%；且病程小于1年者的阳性率为29%。本文采用Despres方法从新鲜人胎盘中提取Sa抗原，检测RA和其他风湿性疾病的抗Sa抗体，了解其临床意义，报道如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
试验组RA 192例，均符合1987年美国风湿病学会(ARA)修订的RA分类标准[2]。男性58例，女性134例，年龄17～76岁，平均46.1岁。其中早期RA(病程小于1年，X线无明显骨质侵蚀者)31例。采集血清时记录同期的临床、实验室指标，关节表现采用28关节计分法[3]，医师和患者对病情活动性的评估及患者对关节痛的自我评估采用ARA推荐的10 cm视力表评定。
对照组294例，包括系统性红斑狼疮(SLE)73例，强直性脊柱炎(AS)40例，其他脊柱关节病(SpA)16例，骨性关节炎(OA)27例，痛风(Gout)15例，皮肌炎(DM)8例，其他风湿病62例，以上病例均符合目前的国际诊断标准；正常人53名。
1.2 检测方法
1.2.1 抗原提取：在4 ℃下操作。新鲜人胎盘匀浆后离心，取上清，加入阴离子交换剂DE52搅拌，用不同浓度的洗脱液洗脱，行透析及冷冻干燥，-30 ℃保存。标准抗原由北京协和医院张乃峥教授提供，该抗原与Despres提供的标准抗原相比条带一致。
1.2.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：取4 mg Sa抗原溶于200 μl SDS-PAGE样品缓冲液中，在10%分离胶中电泳。将分离的蛋白转移到硝酸纤维膜上，再与待测血清反应，所有待测血清均1∶40稀释。然后加入1∶500稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体。加入底物溶液(DAB显色液)反应，待蛋白质条带清晰后加入终止液。以标准分子量标记物半对数作图，相对分子量50 000或50 000、55 000出现印迹条带者为阳性。
1.3 统计学处理
应用SPSS统计软件行t检验、χ2检验、方差分析等，取α＝0.05为显著性检验标准。
2 结 果
2.1 抗Sa抗体对RA诊断的敏感性和特异性：抗Sa抗体对RA诊断的敏感性为33.9%(65/192)，特异性为96.9%(SLE 8例阳性、DM 1例阳性)，阳性预报率为87.8%，阴性预报率为69.2%；早期RA中抗Sa抗体阳性率为32.3%(10/31)。9例检测时不能确诊，经随访确诊RA患者中4例抗Sa抗体阳性。
2.2 抗Sa抗体单独出现50 000条带与同时出现50 000、55 000两条带的比较：65例抗Sa抗体阳性RA中，同时出现50 000、55 000两条带者15例，单独出现50 000条带者50例。前者在医师对病情活动性的评分、患者对病情活动性的自我评分、患者对关节痛的自我评分、C反应蛋白(CRP)增高等方面较后者明显增高，红细胞沉降率(ESR)、IgG虽无差异，但亦增高。同时出现50 000、55 000两条带者病情活动性较高。
2.3 抗Sa抗体与RA临床、实验室指标的关系(表1～3)：抗Sa抗体阳性组以小关节起病为主，类风湿因子(RF)阳性滴度明显较阴性组高，其他临床、实验室指标差异无显著性。63例RF阴性RA中，抗Sa抗体阳性17例，阳性率为27%。按病程分组，病程<1年抗Sa抗体阳性者X线病情分期Ⅱ级较阴性者多(Ⅲ、Ⅳ级均缺如)。抗Sa抗体阳性组和阴性组RF、抗核周因子(APF)、抗鼠食管角质层抗体(AKA)、抗RA33抗体、抗核抗体(ANA)阳性率比较差异无统计学意义。
表1 192例RA抗Sa抗体与临床 实验室指标关系比较(
±s) 项目抗Sa抗体阳性(65例)
抗Sa抗体阴性(127例)
P值
平均年龄(岁)
46.8±14.8
45.9±13.4
0.672
平均发病年龄(岁)
42.6±14.7
40.3±13.9
0.314
平均病程(年)
4.0±3.9
5.7±6.9
0.086
晨僵(h)
3.6±6.0
4.8±7.5
0.272
夜间痛(例)
42/65(63.6%)
102/127(79.7%)
0.344
关节指数(个)
14.2±8.5
15.4±8.7
0.523
压痛关节数
9.8±8.6
10.1±8.6
0.837
肿胀关节数
7.3±7.8
8.7±8.3
0.265
活动受限关节数
1.5±2.4
2.5±4.4
0.076
医师病情活动评分0～10分(VAS)
6.2±1.6
6.3±1.4
0.655
患者病情活动评分0～10分(VAS)
6.7±1.6
7.3±5.6
0.408
患者对关节痛评分0～10分(VAS)
6.3±1.6
6.4±1.5
0.438
RF平均滴度
92.8
75.8
0.0009*
ANA平均滴度
68.6
56.6
0.310
Sharp评分
27.3±41.3
39.1±51.7
0.169
ESR(mm/1h)
52.0±37.5
52.0±37.5
0.312
CRP(mg/L)
19.1±18.9
20.5±18.4
0.630
IgG(g/L)
18.3±6.5
17.6±4.2
0.369
IgA(g/L)
2.7±1.3
2.6±1.3
0.862
IgM(g/L)
2.1±1.0
2.2±1.9
0.676
γG(%)
23.6±8.5
23.8±6.1
0.901
WBC(×109/L)
8.2±2.8
8.2±2.9
0.854
注：*差异有显著性，RF检测182例，其中阳性组59例，阴性组123例；ANA检测180例，其中阳性组58例，阴性组122例2.4 随访：3个月～3年21例RA患者随访，2例抗Sa抗体由阳性转为阴性，该2例患者关节症状明显减轻，RF滴度均较前降低。
表2 192例RA抗Sa抗体与临床 实验室指标关系比较 项目
抗Sa抗体阳性
(65例)
抗Sa抗体阴性
(127例)
P值
例数
%
例数
%
起病关节(小)
52
80.0
75
59.1
0.045*
类风湿结节
6
9.1
6
4.7
0.415
Sjögren′s
4
6.1
7
5.5
0.867
使用慢作用药
16
24.2
35
28.1
0.659
用药<0.5年
1
6.3
4
11.4
0.945
用药>0.5年
15
93.7
31
88.6
ANA阳性数
9
13.6
12
9.4
0.420
RF阳性数
42
71.2
77
62.6
0.605
AKA阳性数
12
18.8
29
23.6
0.542
APF阳性数
41
68.3
68
55.7
0.420
抗RA33阳性数
11
34.4
20
34.5
0.994
注：差异有显著性，RF检测182例，其中阳性59例，阴性123例；ANA检测180例，其中阳性58例，阴性122例；抗RA33抗体仅检测90例，其中阳性32例，阴性58例
表3 抗Sa抗体阳性和阴性组功能分级及病情分期比较 项目
抗Sa抗体阳性
(65例)
抗Sa抗体阴性
(126例)
P值
例数
%
例数
%
功能分级 Ⅰ
7
10.8
18
14.3
Ⅱ
40
61.5
63
50.0
>0.05
Ⅲ
16
24.6
38
30.2
Ⅳ
2
3.1
7
5.6
病情分期 Ⅰ
25
38.5
47
37.3
Ⅱ
26
40.0
33
26.2
>0.05
Ⅲ
8
12.3
32
25.4
Ⅳ
6
9.2
14
11.1
3 讨 论
1994年Despres等[1]发现抗Sa抗体以来，迄今国内外研究尚不多见。目前仅知Sa抗原为一与核酸无关的非酰基化多肽，相对分子量为50 000和55 000。Sa抗原存在于人脾脏、胎盘和关节滑膜翳中，可能为人体组织的正常组成成分。后来发现RA患者关节滑液[4]中存在抗Sa抗体，推测其可能在RA发病过程中起潜在作用。
抗Sa抗体对RA诊断敏感性最初报道为42.7%，目前研究在32%～43%之间[5]，本文结果为33.9%，与采用Despres等[1]方法的许尚栋等[6]结果相近，较Despres低。可能为地域、人种的差异或病例的选择不同所致。目前研究结果特异性平均为97%左右，本文为96.9%，与许尚栋、Despres报道相近。
抗Sa抗体可出现在RA发病早期，Despres在病程小于1年的RA中抗Sa抗体阳性率为29%；本文早期RA抗Sa抗体阳性率为32.3%；另有9例检测时未能确诊，经随访确诊RA患者4例抗Sa抗体阳性。抗Sa抗体有助于RA的早期诊断。
新鲜人胎盘提取的Sa抗原可同时表现50 000、55 000两条带，亦可仅表现为50 000一条带。有认为是抗原在提取过程中降解所致。本研究抗Sa抗体阳性RA中，23.1%同时出现50 000、55 000两条带，76.9%出现50 000一条带；而且前者在医师和患者对病情活动性的评价、患者对关节痛的评价、CRP水平明显较后者高，提示同时出现50 000、55 000两条带者病情活动性较高。
本文抗Sa抗体阳性组RF阳性滴度明显高于阴性组，但其他临床和实验室指标比较差异无显著性，因此其与病情活动、严重性的关系有待于进一步探讨。按病程分组，本文发现病程小于1年者抗Sa抗体阳性X线病情分期较阴性高，抗Sa抗体阳性者发病第1年病情进展可能较快。
目前认为抗Sa抗体不同于RF、APF[7]、AKA[8]、抗RA33抗体[9]、ANA、RA抗68 000抗体[10]等，本文结果与之相一致。抗Sa抗体可出现在RF阳性和阴性的RA中，Despres在27%RF阴性RA中检测出抗Sa抗体，本文结果亦为27%(17/63)，RF阴性RA中抗Sa抗体阳性，均说明抗Sa抗体可能有助于RF阴性RA诊断，是对RF的补充
Despres随访观察1例经甲氨蝶呤治疗的RA患者发现，抗Sa抗体滴度随病情活动而波动，本文随访结果为2例RA患者抗Sa抗体转阴，可能为病情缓解或使用慢作用抗风湿药治疗所致。
作者单位：黄少弼(515031 汕头大学医学院风湿病研究室)
参 考 文 献
1.Despres N,Boire G,Lopez-Longo FJ,et al.The Sa system:a novel antigen-antibody system specific for rheumatoid arthritis.J Rheumatol,1994,21:1027-1033.
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3.Fuchs HA,Brooks RH,Callahan LF,et al.A simplified twenty-eight-joint quantitative articular index in rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1989,32:531-537.
4.Despres N,Boire G,Menard HA.The rheumatoid arthritis specific Sa autoantigen is present in high concentration in the target tissue.Arthritis Rheum,1992,35(Suppl):S72.
5.Lapointe E,Despres N,Menard HA.Clinical and biochemical update on the rheumatoid specific Sa immune system.Arthritis Rheum,1998,14(Suppl):S349.
6.许尚栋，唐福林，史立，等.抗Sa抗体在类风湿关节炎中的意义.中华内科杂志，1998，37：330-332.
7.Hoet RMA,Boerbooms AM,Arends M,et al.Antiperinuclear fac-tor,a marker autoantibody for rheumatoid arthritis:colocalisation of the perinuclear factor and profilaggrin.Ann Rheum Dis,1991,50:611-618.
8.Paimela L,Gripenberg M,Kurki P,et al.Anti-keratin antibodies:diagnostic and prognostic markers for early rheumatoid arthritis.Ann Rheum Dis,1992,51:743-746.
9.Hassfeld W,Steiner G,Hartmuth K,et al.Demonstration of a new antinuclear antibody (anti-RA33) that is highly specific for rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1989,32:1515-1520.
10.Specker SBC,Lakomek HJ,Schneider EM,et al.Novel 68 kD autoantigen detected by rheumatoid arthritis specific antibodies.Ann Rheum Dis,1995,54:355-360.
(收稿日期：1999-08-05)