成年猫L6 DRG神经元按大小分类的形态学证据
作者：王廷华 吴良芳 廖德阳 周雪
单位：王廷华(华西医科大学组织学研究室，成都 610041 原华西医科大学博士，现在昆明医学院神经科学研究所工作.)； 吴良芳(华西医科大学组织学研究室，成都 610041)； 廖德阳(华西医科大学组织学研究室，成都 610041)； 周雪(华西医科大学组织学研究室，成都 610041)
关键词：背根节神经元；大小分群；成年猫
昆明医学院学学报000112 摘 要：采用成年猫L6背根节(DRG)制作20 μm厚冰冻切片，测量神经元胞体平均直径以探讨神经元胞体大小与细胞类型的关系. 结果：成年猫L6 DRG神经元可分3群，即大(胞体直径>57 μm)、中(42～57 μm)、小(<42 μm)神经元. 各占DRG神经元百分比分别是29%, 22%, 49%. 该结果为了解成年猫L6DRG神经元的大小分类提供了标准.
, 百拇医药
分类号：R 651.3 文献标识码：A
文章编号：1003-4706(2000)01-0047-04
The Morphological Evidence on the Various Subpopulations of Neurons in L6 DRG of Adult Cat by Criterion of Size
WANG Ting-hua*,WU Liang-fang,LIAO De-yang,ZHOU Xue
(The Research Unit of Histology，West China University of Medical Sciences，Chengdu 610041)
, 百拇医药 Abstract：To explore the relation between the size of neuron and various populations，the L6 dorsal root ganglion (DRG) was made into 20 μm frozen section in thickness and the average diameters of neuron in L6 DRG of adult cat were measured. Results: It has been possible to show tentatively that there are three populations of cytons by diameter in DRG of adult cat. The average diameter and percentage of large，intermediate and small cytons were respectively: <42 μm，42～57 μm，>57 μm; 29%，22%，49%. The results provided the criterion of size for discriminating from various subpopulations in DRG of adult cat.
, http://www.100md.com
Key words：Neurons of dorsal root ganglion；Various population by criterion of size；Adult cat▲
背根节(dorsal root ganglion，DRG)是将初级感觉信息传入中枢的第一中继站，在感觉信息传递途径中有重要作用. 据文献报道，DRG神经元可分不同类型，其中小神经元主要发出无髓纤维，与温痛觉有关. 而中神经元主要发出细髓Aδ纤维，与触觉有关. 大神经元则主要发出粗有髓纤维(Aα/Aβ)，与本体感觉有关. 由于DRG神经元的大小与功能存在一些联系. 因而，探讨DRG神经元的胞体大小与细胞类型的关系对了解DRG神经元的类型及生理功能有一定价值. 1978年，Kawamura首次报道人的DRG神经元按胞体大小可分3类[1]，之后，一些文献又相继报道成年大鼠DRG神经元亦可按胞体大小分3类[2]. 本文进一步探讨成年猫L6DRG神经元胞体大小与细胞类型的关系.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 样本的获取、切片、染色
取5只成年健康雄猫的5个L6DRG制作20 μm厚冰冻切片(纵切)，每例每节间隔取片5张用苏木精染色. 脱水, 透明封片.
1.2 光镜观察及DRG神经元胞体平均直径测量
光镜下观察L6DRG纵切面神经元的形态特征. 取通过核仁的切面，测量各例动物DRG纵切面上所有神经元胞体的平均直径，以2 μm间隔归类各2 μm范围内的神经元数. 以胞体平均直径为横坐标，神经元数为纵坐标获得的DRG神经元按胞体平均直径配布集中趋势的直方图. 根据DRG神经元胞体平均直径与细胞数配布趋势的关系找出DRG各类神经元按胞体平均直径大小分类的参考值，求得5例动物的参考值均数. 并按此标准推算各类(大、中、小)神经元的百分数.
, 百拇医药
2 结 果
2.1 背根节神经元的形态特征
在苏木精染色DRG纵切面切片上，可见背根节神经元大小不等，细胞多呈圆形. 但见不少胞体偏大的神经元呈椭圆形，沿长轴排列. 根据胞浆染色的深浅，大致可将神经元分为染色较浅胞体偏大的神经元和染色稍深胞体偏小的神经元(附图).
附图 成年猫L6DRG神经元按胞体平均直径分类图(a, b, c, d, e)及 苏木精染色照片(×200)
2.2 背根节神经元的大小分类
按测得的背根节神经元胞体平均直径作为横坐标，以直径2 μm范围内的细胞数为纵坐标分别作出5例动物 DRG神经元分布的直方图(附图)：
, http://www.100md.com
从图上看出，L6DRG神经元的大小(纵切面)按胞体平均直径其数量分布有一定的集中趋势，即可见3个明显的峰. 其中第一峰(小神经元)与第二峰(中神经元)较尖锐，而第三峰(大神经元)较钝. 取各峰间最低点(细胞数最少者)的胞体平均直径值为区分大、中、小神经元的参考值，获得5例动物直方图各峰间最低点胞体平均直径的均数作为各类神经元按胞体平均直径分类的分界参考(峰1，2间最低点42±3；峰3，4间最低点57±1).
根据该结果本文获得成年猫L6DRG纵切面神经元按胞体平均直径分类的参考值为：小神经元<42 μm；中神经元42～57 μm；大神经元>57 μm. 按此标准计算大、中、小神经元所占百分数分别为29%，22%，49%.
3 讨 论
3.1 成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元分类的必要性
, http://www.100md.com
自1902年Hatai[3]报道大白鼠背根节(dorsal root ganglion，DRG)神经元可分两类即大的亮细胞和小的暗细胞以来, 不少文献已进一步提供了DRG神经元可按胞体大小分类(A细胞，B细胞)的资料[4]. 近年，DRG神经元可分3类的资料又相继提供(附表).
附表 已报道的成人、大鼠和本室测得猫的DRG 3类神经元的分类统计表 作者
动物
节段
制法
切片
方面
小细胞
中细胞
, http://www.100md.com
大细胞
直径范围
μm
占总体
%
直径范围
μm
占总体
%
直径范围
μm
占总体
%
, http://www.100md.com Kawamura[1]
人
L5
Celloidin包埋
横切
17～41
37
41～65
30
65～100
17
Fang[2]
, 百拇医药
大鼠
L4
冰冻
横切
<35
58
35～50
22
>50
20
陈丽华
猫
L6
, http://www.100md.com
石蜡包埋
横切
10～32
61
32～44
21
44～59
18
王廷华
猫
L6
冰冻
纵切
, 百拇医药
13～42
49
42～57
22
57～100
29
从表看出： 人与大鼠细胞大小及百分比差异较大，提示可能存在种间差异.此外，比较成年猫L6DRG冰冻纵切面与石蜡横切面的结果亦发现，横切面的(石蜡包埋)细胞尺寸比冰冻切片者小. 我们分析，一方面可能是由于石蜡包埋引起细胞的收缩较冰冻者明显所致. 而另一方面，从本文的结果看，成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元，特别是胞体偏大者多呈椭圆形，因而胞体最长径明显比胞体最短径大. 由于细胞大多沿长轴排列，当用横切面时，所切到的主要是胞体的最短径.因此，当测量胞体的最长径与最短径以求平均直径时，横切面者亦可能较冰冻纵切面者小. 进而提示不同切面对胞体的大小可能有影响.
, 百拇医药
综上所述，由于制备技术(石蜡、冰冻、Epson包埋)、切片方向或种间差异等，均可能影响细胞的大小. 因此难于根据已报道的文献找到一个统一的标准来作为成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元按胞体大小分类的参考值，故测量L6DRG冰冻切片纵切面上神经元的胞体平均直径以找寻胞体大小与各类神经元之间的关系是必要的.
3.2 成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元的配布特征及分类的功能意义
分析成年猫L6DRG纵切面(冰冻切片)神经元按胞体大小配布的频率发现，有3个明显的峰，表明一定大小(胞体平均直径)的神经元有一定的集中趋势. 提示DRG按胞体平均直径大小可分3类神经元，即大、中、小神经元. 该结果反映了成年猫L6DRG冰冻纵切面上的神经元按大小其配布有一定的趋势. 我们根据神经元按胞体平均直径分布的直方图取各峰间最低点为分类大、中、小神经元的参考值，将成年猫L6DRG冰冻切片纵切面神经元分为：<42 μm为小神经元，42～57 μm为中神经元，>57 μm为大神经元. 按此分界测得小、中、大神经元各占百分比分别约为49%，22%，29%. 该结果为了解成年猫L6DRG各类神经元按大小分类及配布比例提供了标准.■
, 百拇医药
基金项目：国家自然科学基金资助(39800191)
作者简介：王廷华(1966-)，男，云南宣威人，讲师，博士，从事神经系统损伤修复研究.
参考文献：
[1] KAWAMURA Y. Evidence for three populations by size in L5 spinal ganglion in man[J]. J Neuropathol and Exp Neurol，1978，402:393
[2] FANG X B.The population of the dorsal root ganglion cells，which have central process in ventral root and the immunoreactivity[J]. Brain Res，1987，402:393
, http://www.100md.com
[3] HATAI S. Number and size of the spinal ganglion cell and dorsal root fibers in the white rat at different ages[J]. J Comp Neuro，1902，12:107
[4] LAWSON S N. The postnatal development of large light and small dark neurons in mouse dorsal root ganglia; a statistical analysis of cell numbers and size[J]. J Neurocytol，1979，8:275
收稿日期：1999-11-03, 百拇医药
单位：王廷华(华西医科大学组织学研究室，成都 610041 原华西医科大学博士，现在昆明医学院神经科学研究所工作.)； 吴良芳(华西医科大学组织学研究室，成都 610041)； 廖德阳(华西医科大学组织学研究室，成都 610041)； 周雪(华西医科大学组织学研究室，成都 610041)
关键词：背根节神经元；大小分群；成年猫
昆明医学院学学报000112 摘 要：采用成年猫L6背根节(DRG)制作20 μm厚冰冻切片，测量神经元胞体平均直径以探讨神经元胞体大小与细胞类型的关系. 结果：成年猫L6 DRG神经元可分3群，即大(胞体直径>57 μm)、中(42～57 μm)、小(<42 μm)神经元. 各占DRG神经元百分比分别是29%, 22%, 49%. 该结果为了解成年猫L6DRG神经元的大小分类提供了标准.
, 百拇医药
分类号：R 651.3 文献标识码：A
文章编号：1003-4706(2000)01-0047-04
The Morphological Evidence on the Various Subpopulations of Neurons in L6 DRG of Adult Cat by Criterion of Size
WANG Ting-hua*,WU Liang-fang,LIAO De-yang,ZHOU Xue
(The Research Unit of Histology，West China University of Medical Sciences，Chengdu 610041)
, 百拇医药 Abstract：To explore the relation between the size of neuron and various populations，the L6 dorsal root ganglion (DRG) was made into 20 μm frozen section in thickness and the average diameters of neuron in L6 DRG of adult cat were measured. Results: It has been possible to show tentatively that there are three populations of cytons by diameter in DRG of adult cat. The average diameter and percentage of large，intermediate and small cytons were respectively: <42 μm，42～57 μm，>57 μm; 29%，22%，49%. The results provided the criterion of size for discriminating from various subpopulations in DRG of adult cat.
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Key words：Neurons of dorsal root ganglion；Various population by criterion of size；Adult cat▲
背根节(dorsal root ganglion，DRG)是将初级感觉信息传入中枢的第一中继站，在感觉信息传递途径中有重要作用. 据文献报道，DRG神经元可分不同类型，其中小神经元主要发出无髓纤维，与温痛觉有关. 而中神经元主要发出细髓Aδ纤维，与触觉有关. 大神经元则主要发出粗有髓纤维(Aα/Aβ)，与本体感觉有关. 由于DRG神经元的大小与功能存在一些联系. 因而，探讨DRG神经元的胞体大小与细胞类型的关系对了解DRG神经元的类型及生理功能有一定价值. 1978年，Kawamura首次报道人的DRG神经元按胞体大小可分3类[1]，之后，一些文献又相继报道成年大鼠DRG神经元亦可按胞体大小分3类[2]. 本文进一步探讨成年猫L6DRG神经元胞体大小与细胞类型的关系.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 样本的获取、切片、染色
取5只成年健康雄猫的5个L6DRG制作20 μm厚冰冻切片(纵切)，每例每节间隔取片5张用苏木精染色. 脱水, 透明封片.
1.2 光镜观察及DRG神经元胞体平均直径测量
光镜下观察L6DRG纵切面神经元的形态特征. 取通过核仁的切面，测量各例动物DRG纵切面上所有神经元胞体的平均直径，以2 μm间隔归类各2 μm范围内的神经元数. 以胞体平均直径为横坐标，神经元数为纵坐标获得的DRG神经元按胞体平均直径配布集中趋势的直方图. 根据DRG神经元胞体平均直径与细胞数配布趋势的关系找出DRG各类神经元按胞体平均直径大小分类的参考值，求得5例动物的参考值均数. 并按此标准推算各类(大、中、小)神经元的百分数.
, 百拇医药
2 结 果
2.1 背根节神经元的形态特征
在苏木精染色DRG纵切面切片上，可见背根节神经元大小不等，细胞多呈圆形. 但见不少胞体偏大的神经元呈椭圆形，沿长轴排列. 根据胞浆染色的深浅，大致可将神经元分为染色较浅胞体偏大的神经元和染色稍深胞体偏小的神经元(附图).
附图 成年猫L6DRG神经元按胞体平均直径分类图(a, b, c, d, e)及 苏木精染色照片(×200)
2.2 背根节神经元的大小分类
按测得的背根节神经元胞体平均直径作为横坐标，以直径2 μm范围内的细胞数为纵坐标分别作出5例动物 DRG神经元分布的直方图(附图)：
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从图上看出，L6DRG神经元的大小(纵切面)按胞体平均直径其数量分布有一定的集中趋势，即可见3个明显的峰. 其中第一峰(小神经元)与第二峰(中神经元)较尖锐，而第三峰(大神经元)较钝. 取各峰间最低点(细胞数最少者)的胞体平均直径值为区分大、中、小神经元的参考值，获得5例动物直方图各峰间最低点胞体平均直径的均数作为各类神经元按胞体平均直径分类的分界参考(峰1，2间最低点42±3；峰3，4间最低点57±1).
根据该结果本文获得成年猫L6DRG纵切面神经元按胞体平均直径分类的参考值为：小神经元<42 μm；中神经元42～57 μm；大神经元>57 μm. 按此标准计算大、中、小神经元所占百分数分别为29%，22%，49%.
3 讨 论
3.1 成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元分类的必要性
, http://www.100md.com
自1902年Hatai[3]报道大白鼠背根节(dorsal root ganglion，DRG)神经元可分两类即大的亮细胞和小的暗细胞以来, 不少文献已进一步提供了DRG神经元可按胞体大小分类(A细胞，B细胞)的资料[4]. 近年，DRG神经元可分3类的资料又相继提供(附表).
附表 已报道的成人、大鼠和本室测得猫的DRG 3类神经元的分类统计表 作者
动物
节段
制法
切片
方面
小细胞
中细胞
, http://www.100md.com
大细胞
直径范围
μm
占总体
%
直径范围
μm
占总体
%
直径范围
μm
占总体
%
, http://www.100md.com Kawamura[1]
人
L5
Celloidin包埋
横切
17～41
37
41～65
30
65～100
17
Fang[2]
, 百拇医药
大鼠
L4
冰冻
横切
<35
58
35～50
22
>50
20
陈丽华
猫
L6
, http://www.100md.com
石蜡包埋
横切
10～32
61
32～44
21
44～59
18
王廷华
猫
L6
冰冻
纵切
, 百拇医药
13～42
49
42～57
22
57～100
29
从表看出： 人与大鼠细胞大小及百分比差异较大，提示可能存在种间差异.此外，比较成年猫L6DRG冰冻纵切面与石蜡横切面的结果亦发现，横切面的(石蜡包埋)细胞尺寸比冰冻切片者小. 我们分析，一方面可能是由于石蜡包埋引起细胞的收缩较冰冻者明显所致. 而另一方面，从本文的结果看，成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元，特别是胞体偏大者多呈椭圆形，因而胞体最长径明显比胞体最短径大. 由于细胞大多沿长轴排列，当用横切面时，所切到的主要是胞体的最短径.因此，当测量胞体的最长径与最短径以求平均直径时，横切面者亦可能较冰冻纵切面者小. 进而提示不同切面对胞体的大小可能有影响.
, 百拇医药
综上所述，由于制备技术(石蜡、冰冻、Epson包埋)、切片方向或种间差异等，均可能影响细胞的大小. 因此难于根据已报道的文献找到一个统一的标准来作为成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元按胞体大小分类的参考值，故测量L6DRG冰冻切片纵切面上神经元的胞体平均直径以找寻胞体大小与各类神经元之间的关系是必要的.
3.2 成年猫L6DRG冰冻纵切面神经元的配布特征及分类的功能意义
分析成年猫L6DRG纵切面(冰冻切片)神经元按胞体大小配布的频率发现，有3个明显的峰，表明一定大小(胞体平均直径)的神经元有一定的集中趋势. 提示DRG按胞体平均直径大小可分3类神经元，即大、中、小神经元. 该结果反映了成年猫L6DRG冰冻纵切面上的神经元按大小其配布有一定的趋势. 我们根据神经元按胞体平均直径分布的直方图取各峰间最低点为分类大、中、小神经元的参考值，将成年猫L6DRG冰冻切片纵切面神经元分为：<42 μm为小神经元，42～57 μm为中神经元，>57 μm为大神经元. 按此分界测得小、中、大神经元各占百分比分别约为49%，22%，29%. 该结果为了解成年猫L6DRG各类神经元按大小分类及配布比例提供了标准.■
, 百拇医药
基金项目：国家自然科学基金资助(39800191)
作者简介：王廷华(1966-)，男，云南宣威人，讲师，博士，从事神经系统损伤修复研究.
参考文献：
[1] KAWAMURA Y. Evidence for three populations by size in L5 spinal ganglion in man[J]. J Neuropathol and Exp Neurol，1978，402:393
[2] FANG X B.The population of the dorsal root ganglion cells，which have central process in ventral root and the immunoreactivity[J]. Brain Res，1987，402:393
, http://www.100md.com
[3] HATAI S. Number and size of the spinal ganglion cell and dorsal root fibers in the white rat at different ages[J]. J Comp Neuro，1902，12:107
[4] LAWSON S N. The postnatal development of large light and small dark neurons in mouse dorsal root ganglia; a statistical analysis of cell numbers and size[J]. J Neurocytol，1979，8:275
收稿日期：1999-11-03, 百拇医药