HPLC法乳果糖的有关物质分离和定量
作者：梁丽芬 胡家炽
单位：梁丽芬 广西半宙制药(集团)有限责任公司(钦州 535000)；胡家炽 广州市药品检验所(广州 510000)
关键词：高效液相色谱法；乳果糖；分离；定量
广西中医学院学报990367 摘 要 采用高效液相色谱法对乳果糖有关物质进行分离和定量，结果进样量在640～960μg范围内有良好的线性关系，r＝0.9999。
中图分类号 R927.2
乳果糖是一种合成药物，主要成分为果糖、半乳糖、乳糖和乳果糖等，用于治疗因血氨升高引起的肝昏迷，由于具有缓泻的作用，也可用于治疗慢性便秘。乳果糖的测定方法有酶作用后的分光光度法〔1〕，衍生后的气相色谱法〔2〕，两者操作均繁复，本文参考文献〔3〕采用HPLC法，以紫外检测器在193nm波长检测，果糖、半乳糖、乳糖的最小检出量分别为0.4、2、8μg(S/N＝31)。乳果糖进样量在640～960μg范围内，呈良好的线性关系，r＝0.9999，方法用于乳果糖的含量测定，获得满意的结果。
, 百拇医药
1 仪器、试药
仪器：日本岛津CL-10AD液相色谱仪，带7125手动进样器，CTO-10AT柱烘箱，SPD-10A检测器，C-R4A数据处理机。
试剂：磷酸二氢钠(含二个结晶水)为分析纯，乙腈为色谱一级试剂，水为高纯水。
对照品：乳果糖含量为99.6%，果糖，半乳糖，乳糖含量为98%。
样品：丹尼乳果糖粉为丹麦丹尼药厂生产。
2 色谱条件
色谱柱：岛津PNH2-10/S2504(250×4.0mm)，流动相：乙腈-0.115%磷酸二氢钠(8∶2)，流速：1ml/min，柱温：35℃；检测波长：193nm。
, http://www.100md.com 3 实验结果
3.1 有关物质分离和最小检出量 取乳果糖0.4g，果糖4mg，半乳糖40mg，乳糖40mg，称定，置10ml量瓶中，加水4ml使溶解，加乙腈5ml，放至室温后，再加水稀释至刻度，摇匀，量取20μl，注入液相色谱仪，测定，果糖、半乳糖、乳果糖、乳糖的保留时间分别为6.4，8.1，14.7，16.2分钟，见图1。以三倍信噪比来计算本实验的最小检出量，果糖、半乳糖、乳糖分别为0.4，2，8μg。
图1 乳糖的相关物质HPLC图
2.2 线性检查的精密度 取乳果糖约0.32，0.36，0.40，0.44，0.48g，分别精密称定，各置10ml量瓶中，加水4ml使溶解，加乙腈5ml，放至室温后，再加水稀释至刻度，摇匀，各精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积为横座标(A)，相应浓度为纵座标(C)，进行回归分析，得回归方程式C＝0.010333A-54.988，r＝0.9999，线性关系良好。取每1ml含40mg的溶液连续进样5次，得平均响应因子为0.01026，RSD＝1.7%，精密度较好。
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2.3 样品测定 取乳果糖对照品和样品按上述方法分别制成每1ml约含40mg的溶液，各精密量取20μl注入液相色谱仪，用外标法计算，结果见表1。
表1 样品测定结果 批号
含量(%)
平均值(%)
平均偏差(%)
H30013
98.5 99.5
99.0
±0.5
H30018
99.5 99.0
, 百拇医药
99.2
±0.2
4 讨论
4.1 本文利用乳糖的末端吸收，尽量提高检测响应，选用193nm波长检测，如流动相所用乙腈质量较高，紫外检测器性能较好，可得到较稳定的基线。
4.2 实验表明，增加流动相的乙腈量可提高乳果糖与乳糖的分离度，但不宜过高，否则进样造成样品溶解不好，柱压波动较大。
4.3 本方法也可用于乳果糖中果糖、半乳糖和乳糖的限度检查，如产品含有0.5%果糖，0.5%半乳糖和1%乳糖可被明显检出。
参考文献
〔1〕USP(XXII).1990.751
〔2〕华丹宇，毛禹芗.乳糖的气相色谱测定法.中国医药工业杂志.1990， 21(4)：175～176
〔3〕USP23.1995.868
收稿日期：1999-06-21, 百拇医药
单位：梁丽芬 广西半宙制药(集团)有限责任公司(钦州 535000)；胡家炽 广州市药品检验所(广州 510000)
关键词：高效液相色谱法；乳果糖；分离；定量
广西中医学院学报990367 摘 要 采用高效液相色谱法对乳果糖有关物质进行分离和定量，结果进样量在640～960μg范围内有良好的线性关系，r＝0.9999。
中图分类号 R927.2
乳果糖是一种合成药物，主要成分为果糖、半乳糖、乳糖和乳果糖等，用于治疗因血氨升高引起的肝昏迷，由于具有缓泻的作用，也可用于治疗慢性便秘。乳果糖的测定方法有酶作用后的分光光度法〔1〕，衍生后的气相色谱法〔2〕，两者操作均繁复，本文参考文献〔3〕采用HPLC法，以紫外检测器在193nm波长检测，果糖、半乳糖、乳糖的最小检出量分别为0.4、2、8μg(S/N＝31)。乳果糖进样量在640～960μg范围内，呈良好的线性关系，r＝0.9999，方法用于乳果糖的含量测定，获得满意的结果。
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1 仪器、试药
仪器：日本岛津CL-10AD液相色谱仪，带7125手动进样器，CTO-10AT柱烘箱，SPD-10A检测器，C-R4A数据处理机。
试剂：磷酸二氢钠(含二个结晶水)为分析纯，乙腈为色谱一级试剂，水为高纯水。
对照品：乳果糖含量为99.6%，果糖，半乳糖，乳糖含量为98%。
样品：丹尼乳果糖粉为丹麦丹尼药厂生产。
2 色谱条件
色谱柱：岛津PNH2-10/S2504(250×4.0mm)，流动相：乙腈-0.115%磷酸二氢钠(8∶2)，流速：1ml/min，柱温：35℃；检测波长：193nm。
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3.1 有关物质分离和最小检出量 取乳果糖0.4g，果糖4mg，半乳糖40mg，乳糖40mg，称定，置10ml量瓶中，加水4ml使溶解，加乙腈5ml，放至室温后，再加水稀释至刻度，摇匀，量取20μl，注入液相色谱仪，测定，果糖、半乳糖、乳果糖、乳糖的保留时间分别为6.4，8.1，14.7，16.2分钟，见图1。以三倍信噪比来计算本实验的最小检出量，果糖、半乳糖、乳糖分别为0.4，2，8μg。
图1 乳糖的相关物质HPLC图
2.2 线性检查的精密度 取乳果糖约0.32，0.36，0.40，0.44，0.48g，分别精密称定，各置10ml量瓶中，加水4ml使溶解，加乙腈5ml，放至室温后，再加水稀释至刻度，摇匀，各精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积为横座标(A)，相应浓度为纵座标(C)，进行回归分析，得回归方程式C＝0.010333A-54.988，r＝0.9999，线性关系良好。取每1ml含40mg的溶液连续进样5次，得平均响应因子为0.01026，RSD＝1.7%，精密度较好。
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2.3 样品测定 取乳果糖对照品和样品按上述方法分别制成每1ml约含40mg的溶液，各精密量取20μl注入液相色谱仪，用外标法计算，结果见表1。
表1 样品测定结果 批号
含量(%)
平均值(%)
平均偏差(%)
H30013
98.5 99.5
99.0
±0.5
H30018
99.5 99.0
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99.2
±0.2
4 讨论
4.1 本文利用乳糖的末端吸收，尽量提高检测响应，选用193nm波长检测，如流动相所用乙腈质量较高，紫外检测器性能较好，可得到较稳定的基线。
4.2 实验表明，增加流动相的乙腈量可提高乳果糖与乳糖的分离度，但不宜过高，否则进样造成样品溶解不好，柱压波动较大。
4.3 本方法也可用于乳果糖中果糖、半乳糖和乳糖的限度检查，如产品含有0.5%果糖，0.5%半乳糖和1%乳糖可被明显检出。
参考文献
〔1〕USP(XXII).1990.751
〔2〕华丹宇，毛禹芗.乳糖的气相色谱测定法.中国医药工业杂志.1990， 21(4)：175～176
〔3〕USP23.1995.868
收稿日期：1999-06-21, 百拇医药