辣椒素敏感神经元介导地黄提取物A的胃粘膜保护作用
作者：叶美红 王竹立 李林 周文钰 徐菲 温红艳 张静琳
单位：叶美红 王竹立(中山医科大学 生理学教研室 510089)；李林 周文钰(附属第三医院中医科 510630)；徐菲(学生科研小组)；温红艳 张静琳(学生科研小组)
关键词：地黄；提取物；辣椒素；细胞保护；胃溃疡
广东医学000106
【摘要】 目的 探讨神经调节在干地黄胃粘膜快速保护中的作用。方法 采用无水乙醇性胃粘膜损伤模型，观察干地黄800 g/L提取物A对辣椒素化学去神经前后大鼠的影响。结果 ①胃饲提取物A 6 g/kg有效防止随后立即给予2 ml无水乙醇所致的胃粘膜损伤，损伤抑制率为74.7%；②用100 g/L辣椒煎剂预处理大鼠，提取物A的胃粘膜保护作用没有明显变化，损伤抑制率为88.24%；③用400 g/L辣椒煎剂预处理，提取物A的胃粘膜保护作用明显减弱，损伤抑制率降为38.2%；④用800 g/L辣椒煎剂预处理，提取物A的保护作用已基本消失，损伤抑制率仅为7.2%。结论 干地黄胃粘膜快速保护作用可能与胃粘膜内辣椒素敏感神经元有关。
, 百拇医药
Capsaicin-sensitive neurons mediating protective effect of rehmanniac extract on gastric mucosa
Ye Meihong Wang Zhuli Li Lin et al
( Department of Physiology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
【Abstract】 Objective To study the role of neuroregulation on immediating protective effects of dry Radix Rehmanniae (DRR) on gastric mucosa.Methods A model of gastric mucosal damage induced by absolute ethanol was used to observe the effects of extract A of DRR on rats before or after “chemical neurotomy” by capsaicin.Results ①Oral administration of 6 g/kg of extract A effectively prevented gastric mucosal damage induced by 2 ml of absolute ethanol given soon afterwards, the inhibitory rate on damage was 74.7%. ②On pretreatment with 10% decoction of chilli (dried fruit of capsicum) to rats, the protective effects of extracet A on gastric mucosa had no significant change. The inhibitory rate on damage was 88.2%. ③On pretreatment with 40% decoction of chilli, the protective effects of extract A was reduced markedly, with an inhibitory rate of 38.2%. ④ On Pretreatment with the 80% decoction of chilli, the protective effects of extract A were nearly totally eliminated, with an inhibitory rate of only 7.2%.Conclusion The immediate protection of DRR on gastric mucosa may be mediated by capsaicin-sensitive neurons in gastric mucosa.
, 百拇医药
【Key words】
本实验室近年来发现干地黄对胃粘膜有较强的保护作用，其活性主要存在于醇溶性部位，其作用机制与前列腺素无关，也与胃肠腔内的理化反应无关，而可能通过与胃肠粘膜的直接接触发挥作用[1，2]。本研究旨在探讨干地黄对胃粘膜的快速保护作用与胃粘膜内辣椒素敏感神经元的关系。
1 材料与方法
1.1 动物与分组实验方法 采用SD纯种2级大白鼠，体重150～200 g，雄性。由本校实验动物中心提供。将55只大鼠随机分成4大组，分别用Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ表示；每组又随机分为实验组与对照组。组Ⅰ：实验组胃饲提取物A 6 g/kg(n=7)，对照组胃饲同体积的去离子水(n=9)；组Ⅱ：给大鼠预先胃饲100 g/L的辣椒煎剂1 ml，24 h后处理同组Ⅰ，实验组n=6，对照组n=6；组Ⅲ：给大鼠胃饲400 g/L的辣椒煎剂1 ml，24 h后处理同组Ⅰ，实验组n=7，对照组n=7；组Ⅳ：给大鼠胃饲800 g/L的辣椒煎剂1 ml， 24 h后处理同组Ⅰ，实验组n=6，对照组n=7。实验组与对照组同时进行实验，以保证实验条件的齐同性。
, 百拇医药
1.2 药物提取
1.2.1 辣椒煎剂的提取 取四川红辣椒粉40 g，加水1 L，加热至300 ml后过滤，残渣再加水600 ml，加热至200 ml后过滤；将两次滤液合并后再加热浓缩至50 ml，即得800 g/L辣椒煎剂。按比例加水稀释分别可得40%，100 g/L的辣椒煎剂。
1.2.2 干地黄提取物A的制备 称取干地黄100 g,剪成2 mm×5 mm小块，加水1.5 L，加热沸腾1.5 h后，用6层纱布过滤；残渣加水1.5 L，加热沸腾1 h后过滤，如此3次，将4次所得滤液合并加热浓缩至100 ml，制成1.0 g/ml的水煎剂。将980 ml无水乙醇与145 ml去离子水混匀后缓慢加入煎剂中并不断搅拌30 min，使乙醇体积分数保持在80%，密闭静置72 h，期间再搅拌2次，每次10 min。滤纸过滤后，醇溶部分水浴蒸发至95 ml，以去除乙醇。加去离子水至100 ml，制成体积分数为100%的提取物A。
, 百拇医药
1.3 胃粘膜损伤模型制备及损伤指数测量
1.3.1 胃粘膜损伤模型 实验前大鼠禁食24 h，不禁水。胃饲实验药物后再立即胃饲2 ml无水乙醇，1 h后处死动物，解剖取胃，沿胃大弯剪开胃壁，清洗干净后展平，测量损伤指数。
1.3.2 损伤指数测量方法 损伤呈条索状者，测其长度，以1 mm计1分，若宽度>1 mm，则计分加倍；出血呈点状者(长、宽均<1 mm)计0.5分；出血呈斑块者(长、宽均>2 mm)测量其面积，以面积计分。将以上结果相加即为损伤指数。
1.4 统计学处理 各组损伤指数以
±s表示， 值间差异比较用t检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 提取物A对无水乙醇性胃粘膜损伤的影响 组Ⅰ中，实验组与对照组损伤指数的差异有极高度显著性(P<0.001)。见表1。
2.2 不同质量浓度辣椒素对提取物A胃粘膜保护作用的影响 从表1中可以看出经低质量浓度辣椒煎剂(100 g/L)处理过的大鼠，实验组与对照组之间的差异仍有显著性意义(P<0.01)；而当胃饲400 g/L或800 g/L辣椒煎剂时，实验组与对照组的损伤指数差异无显著性，且随着辣椒煎剂的质量浓度增大，提取物A的损伤抑制率逐渐减小。
表1 不同浓度的辣椒素对地黄提取物A胃粘膜保护作用的影响 分组
例数
预处理
?损伤指数
损伤抑制率(%)
, 百拇医药
Ⅰ-1
7
无
?32.7±25.5**
74.7
Ⅰ-2
9
无
129.4±51.4
-
Ⅱ-1
6
100 g/L辣椒
, 百拇医药
10.0±5.2*
88.2
Ⅱ-2
6
100 g/L辣椒
85.0±59.6
-
Ⅲ-1
7
400 g/L辣椒
102.0±38.5
38.2
, 百拇医药
Ⅲ-2
7
400 g/L辣椒
165.0±79.3
-
Ⅳ-1
6
800 g/L辣椒
233.3±113.9
7.2
Ⅳ-2
7
800 g/L辣椒
, http://www.100md.com
235.0±84.2
-
注： 1 实验组； 2 对照组；与对照组比较* P<0.01,** P<0.0013 讨论
辣椒是蕃椒属植物，其主要成分为辣椒素，后者对神经元有两种作用。低剂量(μg/kg)对胃肠道初级传入神经元即辣椒素敏感神经元有强烈的一时性兴奋作用；高剂量(≥50 mg/kg)则在引起原初刺激作用后，引起长期损害，使辣椒素敏感神经元失去功能，即化学“去神经”作用，这可能是由于神经递质的过量释放所引起的，而且这种损伤是不可逆的[3]。
有实验提示，250 g/L辣椒煎剂已能引起化学“去神经”作用，使胃粘膜血流减少[4]。所以，本实验采用400 g/L与800 g/L的辣椒煎剂可能足以引起胃粘膜的“去神经”作用。从实验结果可以看出，在未经辣椒煎剂处理过的大鼠，干地黄提取物A有明显的胃粘膜保护作用，这与本实验室以前的结果是一致的[1]；当用400 g/L与800 g/L辣椒煎剂处理后，提取物A对胃粘膜的保护作用受到明显抑制，随着辣椒浓度的升高，提取物A对无水乙醇性胃粘膜损伤的抑制率明显下降。100 g/L辣椒煎剂处理组织的损伤指数与未经辣椒煎剂处理组大鼠的损伤指数在统计学上则差异无显著性。据此，我们可以推测提取物A对胃粘膜的保护机制可能是通过辣椒素敏感神经元的传入活动而发挥作用的。这也可以解释为何地黄胃粘膜的保护作用起效快，短时间即达高峰的现象。
, http://www.100md.com
一般认为，辣椒素敏感神经元可介导胃粘膜血流增加，而胃粘膜血流增加是细胞保护的重要机制之一[5]。干地黄的快速保护作用也可能与辣椒素敏感神经元介导的胃粘膜血流量改变有密切关系。此外也不排除还与神经介导的其他功能如抑制胃运动、促进碱性物质分泌等有关。
在实验中我们还曾用2倍于实验组的高剂量提取物A胃饲大鼠，并于1 h后处死，未见胃粘膜损伤，因此可排除干地黄提取物A作为弱刺激作用于胃粘膜，引起“适应性”细胞保护作用的可能性。另外，用800 g/L辣椒煎剂胃饲大鼠，1 h后也未见胃粘膜有明显损伤，说明本实验所用辣椒煎剂本身不会直接导致胃粘膜损害。
参考文献
1，赖晓嵘，王竹立，李 林.干地黄煎剂防止无水乙醇性胃粘膜损伤作用及其机制.中国中西医结合杂志，1998，18(6)：145
2，王竹立，吴小林，赖晓嵘.干地黄煎剂对5种大鼠实验性胃溃疡的影响.中国中西医结合杂志，1998，18(6)：148
, 百拇医药
3，王志均，朱文玉，主编.细胞保护.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995.557～558
4，董秀云，森治树.辣椒煎液对胃粘膜血流量的影响和细胞保护作用.中华消化杂志，1989，9(6)：335
5，Holzer P, Pabst MA, Lippe IT, et al. Afferent nerve-mediated protection against deep mucosal damage in the srat stomach. Gastroenterology, 1990, 98:838
(收稿日期：1999-06-25), http://www.100md.com
单位：叶美红 王竹立(中山医科大学 生理学教研室 510089)；李林 周文钰(附属第三医院中医科 510630)；徐菲(学生科研小组)；温红艳 张静琳(学生科研小组)
关键词：地黄；提取物；辣椒素；细胞保护；胃溃疡
广东医学000106
【摘要】 目的 探讨神经调节在干地黄胃粘膜快速保护中的作用。方法 采用无水乙醇性胃粘膜损伤模型，观察干地黄800 g/L提取物A对辣椒素化学去神经前后大鼠的影响。结果 ①胃饲提取物A 6 g/kg有效防止随后立即给予2 ml无水乙醇所致的胃粘膜损伤，损伤抑制率为74.7%；②用100 g/L辣椒煎剂预处理大鼠，提取物A的胃粘膜保护作用没有明显变化，损伤抑制率为88.24%；③用400 g/L辣椒煎剂预处理，提取物A的胃粘膜保护作用明显减弱，损伤抑制率降为38.2%；④用800 g/L辣椒煎剂预处理，提取物A的保护作用已基本消失，损伤抑制率仅为7.2%。结论 干地黄胃粘膜快速保护作用可能与胃粘膜内辣椒素敏感神经元有关。
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Capsaicin-sensitive neurons mediating protective effect of rehmanniac extract on gastric mucosa
Ye Meihong Wang Zhuli Li Lin et al
( Department of Physiology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
【Abstract】 Objective To study the role of neuroregulation on immediating protective effects of dry Radix Rehmanniae (DRR) on gastric mucosa.Methods A model of gastric mucosal damage induced by absolute ethanol was used to observe the effects of extract A of DRR on rats before or after “chemical neurotomy” by capsaicin.Results ①Oral administration of 6 g/kg of extract A effectively prevented gastric mucosal damage induced by 2 ml of absolute ethanol given soon afterwards, the inhibitory rate on damage was 74.7%. ②On pretreatment with 10% decoction of chilli (dried fruit of capsicum) to rats, the protective effects of extracet A on gastric mucosa had no significant change. The inhibitory rate on damage was 88.2%. ③On pretreatment with 40% decoction of chilli, the protective effects of extract A was reduced markedly, with an inhibitory rate of 38.2%. ④ On Pretreatment with the 80% decoction of chilli, the protective effects of extract A were nearly totally eliminated, with an inhibitory rate of only 7.2%.Conclusion The immediate protection of DRR on gastric mucosa may be mediated by capsaicin-sensitive neurons in gastric mucosa.
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【Key words】
本实验室近年来发现干地黄对胃粘膜有较强的保护作用，其活性主要存在于醇溶性部位，其作用机制与前列腺素无关，也与胃肠腔内的理化反应无关，而可能通过与胃肠粘膜的直接接触发挥作用[1，2]。本研究旨在探讨干地黄对胃粘膜的快速保护作用与胃粘膜内辣椒素敏感神经元的关系。
1 材料与方法
1.1 动物与分组实验方法 采用SD纯种2级大白鼠，体重150～200 g，雄性。由本校实验动物中心提供。将55只大鼠随机分成4大组，分别用Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ表示；每组又随机分为实验组与对照组。组Ⅰ：实验组胃饲提取物A 6 g/kg(n=7)，对照组胃饲同体积的去离子水(n=9)；组Ⅱ：给大鼠预先胃饲100 g/L的辣椒煎剂1 ml，24 h后处理同组Ⅰ，实验组n=6，对照组n=6；组Ⅲ：给大鼠胃饲400 g/L的辣椒煎剂1 ml，24 h后处理同组Ⅰ，实验组n=7，对照组n=7；组Ⅳ：给大鼠胃饲800 g/L的辣椒煎剂1 ml， 24 h后处理同组Ⅰ，实验组n=6，对照组n=7。实验组与对照组同时进行实验，以保证实验条件的齐同性。
, 百拇医药
1.2 药物提取
1.2.1 辣椒煎剂的提取 取四川红辣椒粉40 g，加水1 L，加热至300 ml后过滤，残渣再加水600 ml，加热至200 ml后过滤；将两次滤液合并后再加热浓缩至50 ml，即得800 g/L辣椒煎剂。按比例加水稀释分别可得40%，100 g/L的辣椒煎剂。
1.2.2 干地黄提取物A的制备 称取干地黄100 g,剪成2 mm×5 mm小块，加水1.5 L，加热沸腾1.5 h后，用6层纱布过滤；残渣加水1.5 L，加热沸腾1 h后过滤，如此3次，将4次所得滤液合并加热浓缩至100 ml，制成1.0 g/ml的水煎剂。将980 ml无水乙醇与145 ml去离子水混匀后缓慢加入煎剂中并不断搅拌30 min，使乙醇体积分数保持在80%，密闭静置72 h，期间再搅拌2次，每次10 min。滤纸过滤后，醇溶部分水浴蒸发至95 ml，以去除乙醇。加去离子水至100 ml，制成体积分数为100%的提取物A。
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1.3 胃粘膜损伤模型制备及损伤指数测量
1.3.1 胃粘膜损伤模型 实验前大鼠禁食24 h，不禁水。胃饲实验药物后再立即胃饲2 ml无水乙醇，1 h后处死动物，解剖取胃，沿胃大弯剪开胃壁，清洗干净后展平，测量损伤指数。
1.3.2 损伤指数测量方法 损伤呈条索状者，测其长度，以1 mm计1分，若宽度>1 mm，则计分加倍；出血呈点状者(长、宽均<1 mm)计0.5分；出血呈斑块者(长、宽均>2 mm)测量其面积，以面积计分。将以上结果相加即为损伤指数。
1.4 统计学处理 各组损伤指数以
±s表示， 值间差异比较用t检验。2 结果
, 百拇医药
2.1 提取物A对无水乙醇性胃粘膜损伤的影响 组Ⅰ中，实验组与对照组损伤指数的差异有极高度显著性(P<0.001)。见表1。
2.2 不同质量浓度辣椒素对提取物A胃粘膜保护作用的影响 从表1中可以看出经低质量浓度辣椒煎剂(100 g/L)处理过的大鼠，实验组与对照组之间的差异仍有显著性意义(P<0.01)；而当胃饲400 g/L或800 g/L辣椒煎剂时，实验组与对照组的损伤指数差异无显著性，且随着辣椒煎剂的质量浓度增大，提取物A的损伤抑制率逐渐减小。
表1 不同浓度的辣椒素对地黄提取物A胃粘膜保护作用的影响 分组
例数
预处理
?损伤指数
损伤抑制率(%)
, 百拇医药
Ⅰ-1
7
无
?32.7±25.5**
74.7
Ⅰ-2
9
无
129.4±51.4
-
Ⅱ-1
6
100 g/L辣椒
, 百拇医药
10.0±5.2*
88.2
Ⅱ-2
6
100 g/L辣椒
85.0±59.6
-
Ⅲ-1
7
400 g/L辣椒
102.0±38.5
38.2
, 百拇医药
Ⅲ-2
7
400 g/L辣椒
165.0±79.3
-
Ⅳ-1
6
800 g/L辣椒
233.3±113.9
7.2
Ⅳ-2
7
800 g/L辣椒
, http://www.100md.com
235.0±84.2
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注： 1 实验组； 2 对照组；与对照组比较* P<0.01,** P<0.0013 讨论
辣椒是蕃椒属植物，其主要成分为辣椒素，后者对神经元有两种作用。低剂量(μg/kg)对胃肠道初级传入神经元即辣椒素敏感神经元有强烈的一时性兴奋作用；高剂量(≥50 mg/kg)则在引起原初刺激作用后，引起长期损害，使辣椒素敏感神经元失去功能，即化学“去神经”作用，这可能是由于神经递质的过量释放所引起的，而且这种损伤是不可逆的[3]。
有实验提示，250 g/L辣椒煎剂已能引起化学“去神经”作用，使胃粘膜血流减少[4]。所以，本实验采用400 g/L与800 g/L的辣椒煎剂可能足以引起胃粘膜的“去神经”作用。从实验结果可以看出，在未经辣椒煎剂处理过的大鼠，干地黄提取物A有明显的胃粘膜保护作用，这与本实验室以前的结果是一致的[1]；当用400 g/L与800 g/L辣椒煎剂处理后，提取物A对胃粘膜的保护作用受到明显抑制，随着辣椒浓度的升高，提取物A对无水乙醇性胃粘膜损伤的抑制率明显下降。100 g/L辣椒煎剂处理组织的损伤指数与未经辣椒煎剂处理组大鼠的损伤指数在统计学上则差异无显著性。据此，我们可以推测提取物A对胃粘膜的保护机制可能是通过辣椒素敏感神经元的传入活动而发挥作用的。这也可以解释为何地黄胃粘膜的保护作用起效快，短时间即达高峰的现象。
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一般认为，辣椒素敏感神经元可介导胃粘膜血流增加，而胃粘膜血流增加是细胞保护的重要机制之一[5]。干地黄的快速保护作用也可能与辣椒素敏感神经元介导的胃粘膜血流量改变有密切关系。此外也不排除还与神经介导的其他功能如抑制胃运动、促进碱性物质分泌等有关。
在实验中我们还曾用2倍于实验组的高剂量提取物A胃饲大鼠，并于1 h后处死，未见胃粘膜损伤，因此可排除干地黄提取物A作为弱刺激作用于胃粘膜，引起“适应性”细胞保护作用的可能性。另外，用800 g/L辣椒煎剂胃饲大鼠，1 h后也未见胃粘膜有明显损伤，说明本实验所用辣椒煎剂本身不会直接导致胃粘膜损害。
参考文献
1，赖晓嵘，王竹立，李 林.干地黄煎剂防止无水乙醇性胃粘膜损伤作用及其机制.中国中西医结合杂志，1998，18(6)：145
2，王竹立，吴小林，赖晓嵘.干地黄煎剂对5种大鼠实验性胃溃疡的影响.中国中西医结合杂志，1998，18(6)：148
, 百拇医药
3，王志均，朱文玉，主编.细胞保护.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995.557～558
4，董秀云，森治树.辣椒煎液对胃粘膜血流量的影响和细胞保护作用.中华消化杂志，1989，9(6)：335
5，Holzer P, Pabst MA, Lippe IT, et al. Afferent nerve-mediated protection against deep mucosal damage in the srat stomach. Gastroenterology, 1990, 98:838
(收稿日期：1999-06-25), http://www.100md.com