不同剂量黄芪及黄芪加丹参对大鼠蛋白尿作用的比较
作者：苏励 陈湘君 胡建东 周时高 茅建春
单位：上海中医药大学 附属龙华医院，上海 200032
关键词：黄芪；丹参；大鼠；药物评价
中国新药与临床杂志000316 [摘要] 目的：探讨不同剂量黄芪及黄芪加丹参与大鼠原位免疫复合物肾炎蛋白尿的量效关系。方法：采用阳离子化牛血清清蛋白造成大鼠原位性免疫复合物肾炎模型并分6组，每组10只，A组为(黄芪0.75 mL.kg-1.d-1)、B组为(黄芪3 mL.kg-1.d-1)、C组为(黄芪6 mL.kg-1.d-1)、D组为(黄芪3 mL.kg-1.d-1+丹参0.8 mL.kg-1.d-1)、E组为(模型组)、F组(空白对照组)。用药4 wk，然后观察24 h尿蛋白，血清清蛋白，Con A及电镜等指标。结果：D组效果最佳，B组效果次之，而A组及C组的效果则较差。结论：黄芪治疗大鼠原位性免疫复合物肾炎蛋白尿的合理剂量为每只予黄芪3 mL.kg-1.d-1(在人应是60 g.d-1)，与丹参合用则效果更佳。
, 百拇医药
[中图分类号]R286.3； R692.3
[文献标识码]A
[文章编号]1007-7669(2000)03-0205-04
Comparisons different doses of Astragali membranaceus
and Salvia miltiorrhiza in rats proteinuria
SU Li，CHEN Xiang-Jun，HU Jian-Dong，ZHOU Shi-Gao，MAO Jian-Chun
(Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medical, SHANGHAI 200032, China)
, 百拇医药
[ABSTRACT] AIM:To explore the dose-effect relationship in different doses of Astragalus membranaceus and Astragalus membranaceus with Salvia miltiorrhiza to rats proteinuria in a model of glomerulonephritis. METHODS: A glomerulonephritis model of immune complex in site was developed by cationic bovine serum albumin. The experiments were divided into six groups: A group (Astragalus membranaceus 0.75 mL.kg-1.d-1), B group (Astragalus membranceus 3 mL.kg-1.d-1), C group (Astragalus membranaceus 6 mL.kg-1.d-1), D group(Astragalus membranceus 3 mL.kg-1.d-1 together with Salvia miltiorrhiza 0.8 mL.kg-1.d-1)， E group (model group), F group(blank control group). The parameters on 24 h urinary protein, serum albumin, serum creatinine, concanavalin A (Con A) as well as electron microscope observing on histological structure were observed after 4 wk therapy. RESULTS: The therapeutic effect in D group was best and B group was better. The effect of A group and C group was unsatisfactory. CONCLUTION: The good dose of Astragalus membranaceus is 3 mL.kg-1.d-1 in a model of glomerulonephritis (in human about Astragalus 60 g.d-1) and the effect of Astragali together with Salvia miltiorrhiza is much better.
, http://www.100md.com
[KEY WORDS] Astragalus membranaceus; Salvia miltiorrhiza; rats; drug evaluation
黄芪(Astragalus membranaceus)具有补中益气，升阳益表等功效[1]，也有很好的免疫增强作用[2]，是临床上治疗各种原因引起蛋白尿的常用药物，对肾炎、肾病综合征、狼疮性肾炎等引起的蛋白尿尤为有效[3]。在实际运用中黄芪的用量相差很大，从每帖6 g到每帖90 g，甚至更多，疗效报道也不一致。为了给临床正确应用黄芪治疗蛋白尿提供一些依据，我们以大鼠原位性免疫复合物肾炎模型为实验对象，对黄芪与蛋白尿的量效关系作了初步研究。同时，根据实验结果，取量效关系最佳的一组加上丹参(Salvia miltiorrhiza)以进一步观察益气活血法的疗效。现将结果报道如下。
材料与方法
, 百拇医药
动物 清洁级雄性Wistar大鼠，体重150～200 g。中药：黄芪注射液每支5 mL(含生药10 g)批号970913，上海福达制药有限公司产品。丹参注射液每支2 mL(含生药3 g)，批号970904，上海中西药业股份有限公司产品。试剂：牛血清清蛋白第5部分(CBSA-V)，无水乙二胺(EDA)，碳化二亚胺盐酸盐(EDC HCl)，聚乙二醇20000，总蛋白测定诊断试剂。
方法 阳离子化牛血清清蛋白(C-BSA)的制备：将67 mL EDA与500 mL重蒸馏水混合，用6 mol HCl 350 mL调整上述溶液pH到4.75，并将其降温至25°C，再将5 g BSA-V溶于25 mL重蒸馏水中并加入到EDA溶液中，随后加入1.8 g EDC HCl不断搅拌使反应恒温(25 °C)和恒定pH值(4.75)条件下进行120 min，然后加入30 mL 4 mol醋酸盐缓冲液(pH=4.75)以终止反应，将上述溶液在40°C温度下反渗透24 h。冷冻干燥后即制成C-BSA。再以每日所需量分装置于-40°C冰箱中备用。
, 百拇医药
动物模型的制备[4]：造模组大鼠每只予C-BSA 1.5 mg与磷酸盐(0.9%氯化钠)缓冲液0.5 mL及等量不完全弗氏佐剂的乳白色悬浊液进行腋下背部多点皮下注射，1 wk后，每只大鼠予C-BSA 2.5 mg尾静脉注射，隔日1次。上述造模大鼠在正式造模2 wk末，即全部出现明显蛋白尿，证明造模成功。
分组方法 先将50只雄性Wistar大鼠分成5组，每组10只。其中40只为造模大鼠。随机分为：A组(黄芪15 g组)、B组(黄芪60 g组)、C组(黄芪120 g组)、E组(模型组)、另10只为F组(空白对照组)。待上述分组实验结果出来后，再取10只雄性Wistar大鼠作为D组(黄芪+丹参组)，造模及观察方法同上。
给药方法 参考李仪奎等[5]大鼠与人等效剂量折算方法，A组：每只予黄芪0.75 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量15 g)。B组：每只予黄芪3 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量60 g)。C组：每只予黄芪6 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量120 g)。F组及E组均以0.9 %氯化钠3 mL.kg-1.d-1腹腔注射。D组：每只予黄芪3 mL.kg-1.d-1+丹参0.8 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量黄芪60 g+丹参12 g)。以上各组均自正式造模后wk 2末开始用药至wk 6末，采用腹腔注射给药，每日1次。
, http://www.100md.com
观察指标与方法 (1) 24 h尿蛋白：自正式造模wk 1末开始每周用细网底代谢笼收集24 h尿液，用此法测定其尿蛋白定量。(2) wk 6末用乌拉坦麻醉动物、解剖、腹主动脉取血后测下列指标：血清清蛋白、肌酐、刀豆蛋白A(Con A)。(3) 取肾组织放入甲醛中固定，按常规方法脱水、石蜡包埋、切片作HE染色以观察肾小球直径(每一切片中5个最大肾小球直、横径平均值)，并电镜检查(每组抽3例)。
结果
24 h尿蛋白定量的变化 结果显示各治疗组中以D组作用最显著，且起效时间最早，wk 4末即显示较为显著的治疗作用。wk 5开始B组显示明显的治疗作用，B组与D组疗效均明显优于A组，wk 5时C组也显示有治疗作用，见表1。
表1 24 h尿蛋白定量(mg.24 h-1
±s，均n=10) 分组
, 百拇医药
wk 2
wk 3
wk 4
wk 5
wk 6
A
115±38a
140±41a
134±37a
152±38a
163±49a
, 百拇医药
B
115±40
126±30
117±28
107±26ce
117±29ce
C
112±30
123±34
118±40
132±34b
141±44
, http://www.100md.com
D
118±37
112±36
87±31b
89±21cf
87±24cf
E
116±37
131±41
159±64
171±47
193±53
, 百拇医药
F
4.2±2.3
5.6±2.0
5.8±2.6
5.0±2.7
6.2±3.1
用药后组间t检验：A，B，C，D组与E组相比，aP>0.05，bP<0.05，cP<0.01。B，D组与A相比，eP<0.05,fP<0.01。 对血清肌酐、血清清蛋白及刀豆蛋白A的影响 血清肌酐结果显示各治疗组中D组作用最好，B组作用次之，而A组，C组较模型组虽有不同程度的下降但统计学处理无显著意义。血清清蛋白结果显示各治疗组中以D组最高，B组及C组则次之，A组虽有一定升高血清清蛋白的趋势，但与E组相比统计学处理无显著意义。刀豆蛋白A(Con A)结果显示C组明显降低Con A水平，而D组及B组则明显提高Con A水平，A组与E组相比差异无显著意义，P>0.05，见表2。
, http://www.100md.com
表2 对血清肌酐、血清清蛋白及刀豆蛋白A的影响
(±s,均n=10) 分组
血清肌酐
/μmol.L-1
血清清蛋白
/g.L-1
刀豆蛋白A
/CMP
A
41±8a
, 百拇医药
17±4a
88±21a
B
34±8be
22±3ce
117±38be
C
38±11
19±3be
58±20c
D
, 百拇医药
32±6ce
22±4cf
144±33be
E
46±10
15.4±1.9
86±21
F
23±5
28.5±2.6
161±43
用药后组间t检验：A，B，C，D组与E组相比，aP>0.05,bP<0.05,cP<0.01。B，C，D组与A组相比，eP<0.05，fP<0.01。
, 百拇医药
电镜观察 F组(空白对照组)肾小球基底膜无增厚，窗孔排列整齐，足突无融合，未见钉突形成。E组(模型组)肾小球基底膜明显增厚，上皮细胞足突融合，偶见钉突形成及内皮细胞破坏。A组(黄芪15 g组)肾小球基底膜增厚，可见足突融合，偶见钉突形成。B组(黄芪60 g组)和D组(黄芪丹参组)肾小球基底膜无明显增厚，未见足突融合及钉突形成。C组(黄芪120 g组)肾小球基底膜增厚，未见钉突形成，偶见足突融合。
肾小球直径变化 结果显示用药后各组中只有B组与D组明显缩小增大的肾小球直径，见表3。
表3 肾小球直径 分组
直径(μm)
A
71±16
B
, 百拇医药
63±8b
C
69±12
D
57±8c
E
78±10
F
57±4
用药后A到F组多个样本均数之间比较经方差检验有显著差异，P<0.05，但多个样本均数间的两两比较仅B组与E组相比有显著差异，bP<0.05，D组与E组相比有非常显著差异，cP<0.01。讨论
, 百拇医药
本课题采用C-BSA制备的大鼠原位免疫复合物肾炎模型。其致病机制是通过带有正电荷的C-BSA(PI>8.5)吸引结合到肾小球基底膜(GBM)上，然后再激活相应的抗体，两者结合后即能在上皮下形成免疫复合物沉积，国内外学者的实践表明该动物模型造价低廉，模型成功率高，重复性好，十分适用于肾病防治的研究工作[6]。故我们采用该模型作为研究之用。
本课题重点在于探索黄芪治疗蛋白尿的量效关系，以期在临床应用黄芪时更为经济有效。通过动物实验的各项指标观察，结果显示黄芪60 g+丹参的效果最显著，黄芪60 g的效果次之，而黄芪15 g及黄芪120 g的效果则较差。故从动物实验的结果看，黄芪治疗蛋白尿的合理剂量在人应是60 g.d-1左右，即约每公斤体重1 g.d-1，与丹参合用则效果更佳。黄芪丹参配伍后在改善24 h尿蛋白，增加清蛋白，改善肾功能，减轻肾脏病理损害等方面优于单用黄芪，说明丹参在治疗中的协同作用是不可忽视的。这可能与其活血化瘀作用可改善肾脏血液循环减轻肾性水肿有关[7，8]。另外，有研究证实：丹参对人肾成纤维细胞增殖有抑制作用，使用丹参治疗有可能对肾脏的间质纤维化病变有一定疗效，从而防止或减少疤痕的形成，延缓尿毒症的发生[8]。在临床应用益气活血法治疗肾炎蛋白尿时，我们一般采用黄芪丹参静脉给药，通过临床摸索，益气药(黄芪)与活血药(丹参)的剂量之比以5∶1为佳，故在本实验的黄芪+丹参组中也以同样的剂量之比配伍，结果显示确有较好效果。
, http://www.100md.com
本课题通过上述动物实验，一方面比较了不同剂量黄芪及黄芪加丹参治疗模型鼠蛋白尿的效果。另一方面由于我们在临床研究中不能广泛进行肾活检，以致缺乏该疗法在肾脏组织学变化方面的直接证据。通过对模型动物肾组织学的电镜观察，初步验证了较大剂量黄芪(60 g.d-1)及黄芪配合丹参可以有效改善肾脏病理损害，减少肾小球基底膜增生等。一定程度上弥补了临床研究中的不足。
[基金项目]上海市卫生局课题(017)
[参考文献]
[1] 戴秋霞(DAI QX)，许其NBD77(XU QT).比较黄芪注射液和参麦注射液对急性病毒性心肌炎的疗效[J].新药与临床(New Drugs Clin Rem)，1997，16：353-355.
[2] 申志强(SHEN ZQ)，孙俊秀(SUN JX).黄芪治疗选择性免疫球蛋白A缺乏[J].新药与临床(New Drugs Clin Rem),1997， 16：246-247.
, http://www.100md.com
[3] 孟景春(Meng JC).黄芪为治慢性肾炎蛋白尿的良药[J].江苏中医杂志(Jiangsu J Tradit Chin Med),1995，16：316.
[4] 黄小平(Huang XP)，李士梅(Li SM).补体对大鼠原位性肾炎的影响——眼镜蛇毒因子干扰作用的探讨[J].中华肾脏病杂志(Chin J Nephrol), 1992, 8:199-201.
[5] 李仪奎.中药药理学实验方法学.第1版[M].上海：上海科学出版社，1991.562.
[6] 刘 杰(Liu J).阳离子化抗原与膜性肾病[J].中华肾脏病杂志(Chin J Nephrol)，1994， 10：314-316.
[7] 金维良(Jin WL)，司海运(Si HY).复方丹参注射液治疗肾性水肿29例[J].山东中医杂志(Shandong J Tradit Chin Med)，1989，6：23.
[8] 黄炯明(Huang JM)，凌发连(Ling FL).复方丹参注射液加用肾上腺皮质激素治疗肾病综合征的疗效观察[J].中国中西医结合杂志(Chin J Integrated Tradit Chin West Med),1989，29：241-242.
[收稿日期]1999-01-29 [接受日期]1999-05-20, 百拇医药
单位：上海中医药大学 附属龙华医院，上海 200032
关键词：黄芪；丹参；大鼠；药物评价
中国新药与临床杂志000316 [摘要] 目的：探讨不同剂量黄芪及黄芪加丹参与大鼠原位免疫复合物肾炎蛋白尿的量效关系。方法：采用阳离子化牛血清清蛋白造成大鼠原位性免疫复合物肾炎模型并分6组，每组10只，A组为(黄芪0.75 mL.kg-1.d-1)、B组为(黄芪3 mL.kg-1.d-1)、C组为(黄芪6 mL.kg-1.d-1)、D组为(黄芪3 mL.kg-1.d-1+丹参0.8 mL.kg-1.d-1)、E组为(模型组)、F组(空白对照组)。用药4 wk，然后观察24 h尿蛋白，血清清蛋白，Con A及电镜等指标。结果：D组效果最佳，B组效果次之，而A组及C组的效果则较差。结论：黄芪治疗大鼠原位性免疫复合物肾炎蛋白尿的合理剂量为每只予黄芪3 mL.kg-1.d-1(在人应是60 g.d-1)，与丹参合用则效果更佳。
, 百拇医药
[中图分类号]R286.3； R692.3
[文献标识码]A
[文章编号]1007-7669(2000)03-0205-04
Comparisons different doses of Astragali membranaceus
and Salvia miltiorrhiza in rats proteinuria
SU Li，CHEN Xiang-Jun，HU Jian-Dong，ZHOU Shi-Gao，MAO Jian-Chun
(Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medical, SHANGHAI 200032, China)
, 百拇医药
[ABSTRACT] AIM:To explore the dose-effect relationship in different doses of Astragalus membranaceus and Astragalus membranaceus with Salvia miltiorrhiza to rats proteinuria in a model of glomerulonephritis. METHODS: A glomerulonephritis model of immune complex in site was developed by cationic bovine serum albumin. The experiments were divided into six groups: A group (Astragalus membranaceus 0.75 mL.kg-1.d-1), B group (Astragalus membranceus 3 mL.kg-1.d-1), C group (Astragalus membranaceus 6 mL.kg-1.d-1), D group(Astragalus membranceus 3 mL.kg-1.d-1 together with Salvia miltiorrhiza 0.8 mL.kg-1.d-1)， E group (model group), F group(blank control group). The parameters on 24 h urinary protein, serum albumin, serum creatinine, concanavalin A (Con A) as well as electron microscope observing on histological structure were observed after 4 wk therapy. RESULTS: The therapeutic effect in D group was best and B group was better. The effect of A group and C group was unsatisfactory. CONCLUTION: The good dose of Astragalus membranaceus is 3 mL.kg-1.d-1 in a model of glomerulonephritis (in human about Astragalus 60 g.d-1) and the effect of Astragali together with Salvia miltiorrhiza is much better.
, http://www.100md.com
[KEY WORDS] Astragalus membranaceus; Salvia miltiorrhiza; rats; drug evaluation
黄芪(Astragalus membranaceus)具有补中益气，升阳益表等功效[1]，也有很好的免疫增强作用[2]，是临床上治疗各种原因引起蛋白尿的常用药物，对肾炎、肾病综合征、狼疮性肾炎等引起的蛋白尿尤为有效[3]。在实际运用中黄芪的用量相差很大，从每帖6 g到每帖90 g，甚至更多，疗效报道也不一致。为了给临床正确应用黄芪治疗蛋白尿提供一些依据，我们以大鼠原位性免疫复合物肾炎模型为实验对象，对黄芪与蛋白尿的量效关系作了初步研究。同时，根据实验结果，取量效关系最佳的一组加上丹参(Salvia miltiorrhiza)以进一步观察益气活血法的疗效。现将结果报道如下。
材料与方法
, 百拇医药
动物 清洁级雄性Wistar大鼠，体重150～200 g。中药：黄芪注射液每支5 mL(含生药10 g)批号970913，上海福达制药有限公司产品。丹参注射液每支2 mL(含生药3 g)，批号970904，上海中西药业股份有限公司产品。试剂：牛血清清蛋白第5部分(CBSA-V)，无水乙二胺(EDA)，碳化二亚胺盐酸盐(EDC HCl)，聚乙二醇20000，总蛋白测定诊断试剂。
方法 阳离子化牛血清清蛋白(C-BSA)的制备：将67 mL EDA与500 mL重蒸馏水混合，用6 mol HCl 350 mL调整上述溶液pH到4.75，并将其降温至25°C，再将5 g BSA-V溶于25 mL重蒸馏水中并加入到EDA溶液中，随后加入1.8 g EDC HCl不断搅拌使反应恒温(25 °C)和恒定pH值(4.75)条件下进行120 min，然后加入30 mL 4 mol醋酸盐缓冲液(pH=4.75)以终止反应，将上述溶液在40°C温度下反渗透24 h。冷冻干燥后即制成C-BSA。再以每日所需量分装置于-40°C冰箱中备用。
, 百拇医药
动物模型的制备[4]：造模组大鼠每只予C-BSA 1.5 mg与磷酸盐(0.9%氯化钠)缓冲液0.5 mL及等量不完全弗氏佐剂的乳白色悬浊液进行腋下背部多点皮下注射，1 wk后，每只大鼠予C-BSA 2.5 mg尾静脉注射，隔日1次。上述造模大鼠在正式造模2 wk末，即全部出现明显蛋白尿，证明造模成功。
分组方法 先将50只雄性Wistar大鼠分成5组，每组10只。其中40只为造模大鼠。随机分为：A组(黄芪15 g组)、B组(黄芪60 g组)、C组(黄芪120 g组)、E组(模型组)、另10只为F组(空白对照组)。待上述分组实验结果出来后，再取10只雄性Wistar大鼠作为D组(黄芪+丹参组)，造模及观察方法同上。
给药方法 参考李仪奎等[5]大鼠与人等效剂量折算方法，A组：每只予黄芪0.75 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量15 g)。B组：每只予黄芪3 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量60 g)。C组：每只予黄芪6 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量120 g)。F组及E组均以0.9 %氯化钠3 mL.kg-1.d-1腹腔注射。D组：每只予黄芪3 mL.kg-1.d-1+丹参0.8 mL.kg-1.d-1(相当于成人60公斤体重用量黄芪60 g+丹参12 g)。以上各组均自正式造模后wk 2末开始用药至wk 6末，采用腹腔注射给药，每日1次。
, http://www.100md.com
观察指标与方法 (1) 24 h尿蛋白：自正式造模wk 1末开始每周用细网底代谢笼收集24 h尿液，用此法测定其尿蛋白定量。(2) wk 6末用乌拉坦麻醉动物、解剖、腹主动脉取血后测下列指标：血清清蛋白、肌酐、刀豆蛋白A(Con A)。(3) 取肾组织放入甲醛中固定，按常规方法脱水、石蜡包埋、切片作HE染色以观察肾小球直径(每一切片中5个最大肾小球直、横径平均值)，并电镜检查(每组抽3例)。
结果
24 h尿蛋白定量的变化 结果显示各治疗组中以D组作用最显著，且起效时间最早，wk 4末即显示较为显著的治疗作用。wk 5开始B组显示明显的治疗作用，B组与D组疗效均明显优于A组，wk 5时C组也显示有治疗作用，见表1。
表1 24 h尿蛋白定量(mg.24 h-1
±s，均n=10) 分组, 百拇医药
wk 2
wk 3
wk 4
wk 5
wk 6
A
115±38a
140±41a
134±37a
152±38a
163±49a
, 百拇医药
B
115±40
126±30
117±28
107±26ce
117±29ce
C
112±30
123±34
118±40
132±34b
141±44
, http://www.100md.com
D
118±37
112±36
87±31b
89±21cf
87±24cf
E
116±37
131±41
159±64
171±47
193±53
, 百拇医药
F
4.2±2.3
5.6±2.0
5.8±2.6
5.0±2.7
6.2±3.1
用药后组间t检验：A，B，C，D组与E组相比，aP>0.05，bP<0.05，cP<0.01。B，D组与A相比，eP<0.05,fP<0.01。 对血清肌酐、血清清蛋白及刀豆蛋白A的影响 血清肌酐结果显示各治疗组中D组作用最好，B组作用次之，而A组，C组较模型组虽有不同程度的下降但统计学处理无显著意义。血清清蛋白结果显示各治疗组中以D组最高，B组及C组则次之，A组虽有一定升高血清清蛋白的趋势，但与E组相比统计学处理无显著意义。刀豆蛋白A(Con A)结果显示C组明显降低Con A水平，而D组及B组则明显提高Con A水平，A组与E组相比差异无显著意义，P>0.05，见表2。
, http://www.100md.com
表2 对血清肌酐、血清清蛋白及刀豆蛋白A的影响
(
±s,均n=10) 分组血清肌酐
/μmol.L-1
血清清蛋白
/g.L-1
刀豆蛋白A
/CMP
A
41±8a
, 百拇医药
17±4a
88±21a
B
34±8be
22±3ce
117±38be
C
38±11
19±3be
58±20c
D
, 百拇医药
32±6ce
22±4cf
144±33be
E
46±10
15.4±1.9
86±21
F
23±5
28.5±2.6
161±43
用药后组间t检验：A，B，C，D组与E组相比，aP>0.05,bP<0.05,cP<0.01。B，C，D组与A组相比，eP<0.05，fP<0.01。
, 百拇医药
电镜观察 F组(空白对照组)肾小球基底膜无增厚，窗孔排列整齐，足突无融合，未见钉突形成。E组(模型组)肾小球基底膜明显增厚，上皮细胞足突融合，偶见钉突形成及内皮细胞破坏。A组(黄芪15 g组)肾小球基底膜增厚，可见足突融合，偶见钉突形成。B组(黄芪60 g组)和D组(黄芪丹参组)肾小球基底膜无明显增厚，未见足突融合及钉突形成。C组(黄芪120 g组)肾小球基底膜增厚，未见钉突形成，偶见足突融合。
肾小球直径变化 结果显示用药后各组中只有B组与D组明显缩小增大的肾小球直径，见表3。
表3 肾小球直径 分组
直径(μm)
A
71±16
B
, 百拇医药
63±8b
C
69±12
D
57±8c
E
78±10
F
57±4
用药后A到F组多个样本均数之间比较经方差检验有显著差异，P<0.05，但多个样本均数间的两两比较仅B组与E组相比有显著差异，bP<0.05，D组与E组相比有非常显著差异，cP<0.01。讨论
, 百拇医药
本课题采用C-BSA制备的大鼠原位免疫复合物肾炎模型。其致病机制是通过带有正电荷的C-BSA(PI>8.5)吸引结合到肾小球基底膜(GBM)上，然后再激活相应的抗体，两者结合后即能在上皮下形成免疫复合物沉积，国内外学者的实践表明该动物模型造价低廉，模型成功率高，重复性好，十分适用于肾病防治的研究工作[6]。故我们采用该模型作为研究之用。
本课题重点在于探索黄芪治疗蛋白尿的量效关系，以期在临床应用黄芪时更为经济有效。通过动物实验的各项指标观察，结果显示黄芪60 g+丹参的效果最显著，黄芪60 g的效果次之，而黄芪15 g及黄芪120 g的效果则较差。故从动物实验的结果看，黄芪治疗蛋白尿的合理剂量在人应是60 g.d-1左右，即约每公斤体重1 g.d-1，与丹参合用则效果更佳。黄芪丹参配伍后在改善24 h尿蛋白，增加清蛋白，改善肾功能，减轻肾脏病理损害等方面优于单用黄芪，说明丹参在治疗中的协同作用是不可忽视的。这可能与其活血化瘀作用可改善肾脏血液循环减轻肾性水肿有关[7，8]。另外，有研究证实：丹参对人肾成纤维细胞增殖有抑制作用，使用丹参治疗有可能对肾脏的间质纤维化病变有一定疗效，从而防止或减少疤痕的形成，延缓尿毒症的发生[8]。在临床应用益气活血法治疗肾炎蛋白尿时，我们一般采用黄芪丹参静脉给药，通过临床摸索，益气药(黄芪)与活血药(丹参)的剂量之比以5∶1为佳，故在本实验的黄芪+丹参组中也以同样的剂量之比配伍，结果显示确有较好效果。
, http://www.100md.com
本课题通过上述动物实验，一方面比较了不同剂量黄芪及黄芪加丹参治疗模型鼠蛋白尿的效果。另一方面由于我们在临床研究中不能广泛进行肾活检，以致缺乏该疗法在肾脏组织学变化方面的直接证据。通过对模型动物肾组织学的电镜观察，初步验证了较大剂量黄芪(60 g.d-1)及黄芪配合丹参可以有效改善肾脏病理损害，减少肾小球基底膜增生等。一定程度上弥补了临床研究中的不足。
[基金项目]上海市卫生局课题(017)
[参考文献]
[1] 戴秋霞(DAI QX)，许其NBD77(XU QT).比较黄芪注射液和参麦注射液对急性病毒性心肌炎的疗效[J].新药与临床(New Drugs Clin Rem)，1997，16：353-355.
[2] 申志强(SHEN ZQ)，孙俊秀(SUN JX).黄芪治疗选择性免疫球蛋白A缺乏[J].新药与临床(New Drugs Clin Rem),1997， 16：246-247.
, http://www.100md.com
[3] 孟景春(Meng JC).黄芪为治慢性肾炎蛋白尿的良药[J].江苏中医杂志(Jiangsu J Tradit Chin Med),1995，16：316.
[4] 黄小平(Huang XP)，李士梅(Li SM).补体对大鼠原位性肾炎的影响——眼镜蛇毒因子干扰作用的探讨[J].中华肾脏病杂志(Chin J Nephrol), 1992, 8:199-201.
[5] 李仪奎.中药药理学实验方法学.第1版[M].上海：上海科学出版社，1991.562.
[6] 刘 杰(Liu J).阳离子化抗原与膜性肾病[J].中华肾脏病杂志(Chin J Nephrol)，1994， 10：314-316.
[7] 金维良(Jin WL)，司海运(Si HY).复方丹参注射液治疗肾性水肿29例[J].山东中医杂志(Shandong J Tradit Chin Med)，1989，6：23.
[8] 黄炯明(Huang JM)，凌发连(Ling FL).复方丹参注射液加用肾上腺皮质激素治疗肾病综合征的疗效观察[J].中国中西医结合杂志(Chin J Integrated Tradit Chin West Med),1989，29：241-242.
[收稿日期]1999-01-29 [接受日期]1999-05-20, 百拇医药