银杏叶提取物引起人离体阴茎海绵体平滑肌舒张机制的初步探讨
作者：杨建林 张幼怡 薛兆英 贺占举 石炳毅 那彦群 董尔丹 韩启德 郭应禄
单位：北京大学第一医院 北京大学泌尿外科研究所100034
关键词：
中华医学杂志001124 阴茎勃起是阴茎海绵体、血管、神经及内分泌参与的复杂生理过程。银杏叶提取物(EGb)可以促进血管内皮细胞舒张因子(EDRF)与前列环素释放而引起血管舒张[1]，EGb可以引起兔海绵体和阳痿病人阴茎海绵体舒张[2]。然而，尚少见到关于EGb对正常人阴茎海绵体平滑肌作用的报道。我们采用离体组织灌流的方法观察了EGb对人阴茎海绵体
平滑肌的作用，初步探讨其作用机制。
一、材料与方法
, 百拇医药
1.标本来源于成年健康男性自愿捐献器官者。EGb为中国科学院上海药物研究所陈维洲教授馈赠。左旋硝基精胺酸(L-NNA), 乙酰胆碱(Ach)、去甲肾上腺素(NE)和左旋精氨酸(L-ARG) 等药物皆购自美国Sigma公司。
2.标本制备：将海绵体制成8 mm×3 mm长的条形标本，在37℃下通以体积分数为95%氧气和体积分数为5%二氧化碳饱和的Krebs 溶液中灌流标本。
3.阴茎海绵体舒张效应曲线：首先用10 mmol/L的NE预收缩两次，加10 mmol/L的Ach判定内皮细胞是否完整。加入10 mmol/L的NE达最大收缩；以此收缩张力作为100%，而后行EGb的舒张累积浓度效应曲线。完成EGb第一条累积浓度舒张效应曲线后，冲洗平衡30 min。然后分别加入0.1 mmol/L的L-NNA或0.1 mmol/L的L-arginine和0.1 mmol/L的L-NNA或0.1 mmol/L的L-arginine，再行EGb累积量浓度的舒张效应曲线。
, http://www.100md.com
4.统计学处理：采用配对t检验方法作差异显著性检验，P<0.01为差异有显著意义。
二、结果
EGb可以引起阴茎海绵体的量浓度依赖性舒张反应，EC50为1.6 mg/ml±0.3 mg/ml，最大舒张效应为72.4%±1.5%。当NO合酶抑制剂L-NNA存在时，最大舒张效应降低到8.3%±6.7%。 当同时加入0.1 mmol/L的L-ARG时，最大舒张效应又可达67%±2.8%，EC50值为1.6 mg/ml±0.5 mg/ml。当用机械方法去内皮后，EGb对阴茎海绵体的舒张作用消失。L-NNA与其他两组的最大舒张应比较差异有显著意义(P<0.01)。
三、讨论
传统认为支配阴茎螺旋动脉和小梁平滑肌的交感和副交感神经纤维调节阴茎血流并控制阴茎膨胀和萎软过程，然而阻断交感和副交感神经并不能阻断由电刺激诱发的勃起反应[3-5]，所以必定还有另外一种神经递质参与松弛海绵体平滑肌和介导阴茎勃起。大量的研究证实海绵体内注射一氧化氮(NO)供体可以导致阴茎勃起，NO合酶抑制剂L-NNA可以明显地抑制电刺激神经引起的勃起效应，说明神经原性NO在阴茎勃起中起主要作用[6]。本实验中我们为了观察药物本身对海绵体的舒张效应，我们在离体实验中不采用电场刺激，而是观察EGb对离体海绵体内皮的直接作用，结果显示，EGb以浓度依赖的方式舒张阴茎海绵体平滑肌。在其浓度舒张效应曲线的EC50为1.6 mg/ml±0.3 mg/ml。此时EGb引起海绵体舒张主要通过激活内皮源性NO合酶(eNOS)刺激内皮释放NO。
, http://www.100md.com
为了解EGb舒张海绵体平滑肌的机制，我们观察了NO合酶的抑制剂L-NNA和NO前体L-arginine对EGb舒张作用的影响。结果L-NNA可以完全抑制EGb的舒张作用，而L-arginine可部分逆转L-NNA对EGb的抑制作用。 说明EGb是通过NO途径使海绵体平滑肌舒张的。据文献报道L-NNA可以阻断Ach和NO合酶释放NO，但是不能阻断GC及其以后信号环节[7]。L-arginine不能逆转亚甲兰对GC的抑制作用，也不能逆转磷酸二酯酶对cGMP的降解作用[8]，因此推测EGb可能直接激活NO合酶，而不是作用于GC或cGMP及其后信号转导环节。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39570299)与美国中华医学基金会(93-591)资助项目
参考文献
1，Auguest M, Defeudis FV, Clostre F. The pharmacological basis for the vascular impact of ginkgobiloba extract. In: funfgeld EW(ed), Recent results in pharmacology and clinic. Berlin: Springer-Verlag, 1988.12:169-171.
, http://www.100md.com
2，Paick JS, Lee JH. An experimental study of the effect of ginkgo bilobaextract on the human rabbit corpus cavernosum tissue. J Urol,1996,156:1876-1880.
3，Andersson KE, Hedlund H, Mattiasson A, et al. Relaxation of isolated human corpus spongiosum induced by vasoactive intestinal polypeptide,substance P,carbachol and electrical field stimulation. World J Urol, 1983,1:203-208.
4，Dail WG, McGuffee L, Minorsky N, et al. Responses of smooth muscle strips from penile erectile tissue todrugs and transmural nerve stimulation. J Suton Pharmacol , 1987,8:287-293.
, http://www.100md.com
5，Klinge E, Sjostrand NO. Suppression of the excitatory adrennergic neurotransmission:a possible role of cholinergic nerves in the retractor penis muscle. Acta Physiol Scand , 1997,100:368-376.
6，Ignarro LJ, Buga GM, Wood KS,et al. Nitric oxide and cyclic GMP formation upon electrical field stimulation cause relaxation of corpus cavernosum smooth muscle. Biochem Biophys Res Commun, 1990,170:843-850.
7，Knispel HH, Goessl C, Beckmann R. Basal and Ach-stimulated NO formation mediated relaxation of ribbit covernous smooth muscle. J Urol, 1991,146:1429-1435.
8，Sjostrand NO. The effects of L-arginine and NG-monomethyl L-arginine on the inhibitory neurotransmission of human corpus cavernosum penis. Acta Physiol Scand, 1990,140:297-302.
(收稿日期：1999-11-10), http://www.100md.com
单位：北京大学第一医院 北京大学泌尿外科研究所100034
关键词：
中华医学杂志001124 阴茎勃起是阴茎海绵体、血管、神经及内分泌参与的复杂生理过程。银杏叶提取物(EGb)可以促进血管内皮细胞舒张因子(EDRF)与前列环素释放而引起血管舒张[1]，EGb可以引起兔海绵体和阳痿病人阴茎海绵体舒张[2]。然而，尚少见到关于EGb对正常人阴茎海绵体平滑肌作用的报道。我们采用离体组织灌流的方法观察了EGb对人阴茎海绵体
平滑肌的作用，初步探讨其作用机制。
一、材料与方法
, 百拇医药
1.标本来源于成年健康男性自愿捐献器官者。EGb为中国科学院上海药物研究所陈维洲教授馈赠。左旋硝基精胺酸(L-NNA), 乙酰胆碱(Ach)、去甲肾上腺素(NE)和左旋精氨酸(L-ARG) 等药物皆购自美国Sigma公司。
2.标本制备：将海绵体制成8 mm×3 mm长的条形标本，在37℃下通以体积分数为95%氧气和体积分数为5%二氧化碳饱和的Krebs 溶液中灌流标本。
3.阴茎海绵体舒张效应曲线：首先用10 mmol/L的NE预收缩两次，加10 mmol/L的Ach判定内皮细胞是否完整。加入10 mmol/L的NE达最大收缩；以此收缩张力作为100%，而后行EGb的舒张累积浓度效应曲线。完成EGb第一条累积浓度舒张效应曲线后，冲洗平衡30 min。然后分别加入0.1 mmol/L的L-NNA或0.1 mmol/L的L-arginine和0.1 mmol/L的L-NNA或0.1 mmol/L的L-arginine，再行EGb累积量浓度的舒张效应曲线。
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4.统计学处理：采用配对t检验方法作差异显著性检验，P<0.01为差异有显著意义。
二、结果
EGb可以引起阴茎海绵体的量浓度依赖性舒张反应，EC50为1.6 mg/ml±0.3 mg/ml，最大舒张效应为72.4%±1.5%。当NO合酶抑制剂L-NNA存在时，最大舒张效应降低到8.3%±6.7%。 当同时加入0.1 mmol/L的L-ARG时，最大舒张效应又可达67%±2.8%，EC50值为1.6 mg/ml±0.5 mg/ml。当用机械方法去内皮后，EGb对阴茎海绵体的舒张作用消失。L-NNA与其他两组的最大舒张应比较差异有显著意义(P<0.01)。
三、讨论
传统认为支配阴茎螺旋动脉和小梁平滑肌的交感和副交感神经纤维调节阴茎血流并控制阴茎膨胀和萎软过程，然而阻断交感和副交感神经并不能阻断由电刺激诱发的勃起反应[3-5]，所以必定还有另外一种神经递质参与松弛海绵体平滑肌和介导阴茎勃起。大量的研究证实海绵体内注射一氧化氮(NO)供体可以导致阴茎勃起，NO合酶抑制剂L-NNA可以明显地抑制电刺激神经引起的勃起效应，说明神经原性NO在阴茎勃起中起主要作用[6]。本实验中我们为了观察药物本身对海绵体的舒张效应，我们在离体实验中不采用电场刺激，而是观察EGb对离体海绵体内皮的直接作用，结果显示，EGb以浓度依赖的方式舒张阴茎海绵体平滑肌。在其浓度舒张效应曲线的EC50为1.6 mg/ml±0.3 mg/ml。此时EGb引起海绵体舒张主要通过激活内皮源性NO合酶(eNOS)刺激内皮释放NO。
, http://www.100md.com
为了解EGb舒张海绵体平滑肌的机制，我们观察了NO合酶的抑制剂L-NNA和NO前体L-arginine对EGb舒张作用的影响。结果L-NNA可以完全抑制EGb的舒张作用，而L-arginine可部分逆转L-NNA对EGb的抑制作用。 说明EGb是通过NO途径使海绵体平滑肌舒张的。据文献报道L-NNA可以阻断Ach和NO合酶释放NO，但是不能阻断GC及其以后信号环节[7]。L-arginine不能逆转亚甲兰对GC的抑制作用，也不能逆转磷酸二酯酶对cGMP的降解作用[8]，因此推测EGb可能直接激活NO合酶，而不是作用于GC或cGMP及其后信号转导环节。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39570299)与美国中华医学基金会(93-591)资助项目
参考文献
1，Auguest M, Defeudis FV, Clostre F. The pharmacological basis for the vascular impact of ginkgobiloba extract. In: funfgeld EW(ed), Recent results in pharmacology and clinic. Berlin: Springer-Verlag, 1988.12:169-171.
, http://www.100md.com
2，Paick JS, Lee JH. An experimental study of the effect of ginkgo bilobaextract on the human rabbit corpus cavernosum tissue. J Urol,1996,156:1876-1880.
3，Andersson KE, Hedlund H, Mattiasson A, et al. Relaxation of isolated human corpus spongiosum induced by vasoactive intestinal polypeptide,substance P,carbachol and electrical field stimulation. World J Urol, 1983,1:203-208.
4，Dail WG, McGuffee L, Minorsky N, et al. Responses of smooth muscle strips from penile erectile tissue todrugs and transmural nerve stimulation. J Suton Pharmacol , 1987,8:287-293.
, http://www.100md.com
5，Klinge E, Sjostrand NO. Suppression of the excitatory adrennergic neurotransmission:a possible role of cholinergic nerves in the retractor penis muscle. Acta Physiol Scand , 1997,100:368-376.
6，Ignarro LJ, Buga GM, Wood KS,et al. Nitric oxide and cyclic GMP formation upon electrical field stimulation cause relaxation of corpus cavernosum smooth muscle. Biochem Biophys Res Commun, 1990,170:843-850.
7，Knispel HH, Goessl C, Beckmann R. Basal and Ach-stimulated NO formation mediated relaxation of ribbit covernous smooth muscle. J Urol, 1991,146:1429-1435.
8，Sjostrand NO. The effects of L-arginine and NG-monomethyl L-arginine on the inhibitory neurotransmission of human corpus cavernosum penis. Acta Physiol Scand, 1990,140:297-302.
(收稿日期：1999-11-10), http://www.100md.com