超临界流体萃取-胶束电动毛细管色谱法测定银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素的含量
作者：佘佳红 柳正良 王春燕 陈燕
单位：佘佳红(第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室，上海，200433)；柳正良(药学院药物分析教研室)；王春燕(药学院药物分析教研室)；陈燕(药学院药物分析教研室)
关键词：超临界流体萃取；色谱法，胶束电动毛细管；银杏叶粗提物；斛皮素；山奈素
第二军医大学学报001018 [摘要] 目的：以超临界流体萃取(SFE) 银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素，以胶束电动毛细管色谱法(MECC)测定这两种成分的含量 。方法：采用正交设计法考察SFE提取工艺，SFE条件：压力42 mPa； 温度60 ℃；静态萃取时间4 min；动态萃取体积4 ml；改性剂0.2 ml乙醇。MECC条件：空心 熔融石英毛细管柱(55 cm×75 μm)；缓冲液为磷酸二氢钠-硼砂=25-6.25 mmol/L(pH 8. 5)；SDS 35 mmol/L；检测波长254 nm。结果：SFE时改性剂对萃取效 率的影响最大；MECC以肉桂酸为内标，在21.2～106.0 μg/ml和20.0～100.0 μg/ml范围内 ，槲皮素和山奈素均呈良好的线性关系和重现性。40,60和80 μl槲皮素的加样回收率分别 为93.87%,94.02%和94.10%；40,60和80 μl山奈素的加样回收率分别为94.50%,94.17%和94. 25%。结论：SFE与MECC法联用，简便快速，可用于银杏叶粗提物中的 黄酮类成分的分离分析。
, 百拇医药
[中图分类号] R 284.1 [文献标识码] A
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0958-03
Determination of quercetin and kaempferol in Ginkgo biloba extract by supe rcritical fluid extraction and micellar electrokinetic capillary chromato -graphy
SHE Jia-Hong
(Depart ment of Health Toxicology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, http://www.100md.com
LIU Zheng-Liang， WANG Chun-Yan, CHEN Yan
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy)
[ABSTRACT]Objective: To establish a method for the determina tion of quercetin and kaempferol in Ginkgo biloba extract. Methods: A simple, rapid and reproducible supercritical fluid extract (SFE) and c apillary electrophoretic method were developed for it. SFE was selected by ortho gonal design method. SFE conditions: temperature 60 ℃, pressure 42 mPa, static extraction 4 min, dynamic extraction volume 4 ml and 0.2 ml ethanol as modifier. MECC conditions were 55 cm×75 μm fused silica capillary column. The running b uffer contained 25 mmol/L sodium dihydrophosphate, 6.25 mmol/L sodium borate ( pH=8.5) and 35 mmol/L sodium dodecyl sulfate(SDS). The detection wave-len gth was at 254 nm. Results: The influence of modifier on extraction rate in SFE was the most. The linear range for quercetin and kaempferol was 21.2-106.0 , 20.0-100.0 μg/ml, respectively, when cinnamic acid was in an internal s tandard. The recovery of quercetin for 40, 60 and 80 μl was 93.87%, 94.02 % and 94.10%, respectively. The recovery of kaempferol for 40, 60 and 80 μl was 94.50 %, 94.17% and 94.25%, respectively. Conclusion: SFE-MECC is con venient and accurate method, and can be used as a measure of quality control for Ginkgo biloba extract.
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[KEY WORDS]supercritical fluid extract; chromatography, mi cellar electrokinetic capillary; Ginkgo biloba extract; quercetin; kaempferol
银杏叶及其制剂的质量控制是以其有效成分之一的黄酮类化合物为主要指标。由于银杏 叶所含的黄酮类化合物种类多，对照品不易一一得到，使直接测定黄酮甙不能实现。鉴于黄 酮甙的甙元基本是槲皮素、山奈素和异鼠李素，因此采用将黄酮甙水解，测其甙元含量后， 乘以转化因子来计算总黄酮甙的含量。目前国内外多采用HPLC定量测得甙元的含量[1 ～3]。90年代发展起来的高效毛细管电泳法(HPCE)具有高效、低耗、快速的特点，而 胶束电动毛细管色谱(MECC)的出现，更拓展了HPCE在药物分析领域中的应用范围。本研究 以超临界流体萃取法(SFE)萃取银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素，应用MECC法进行含量测定 。
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1 材料和方法
1.1 药品和试剂 山奈素(美国Sigma公司)；槲皮素，肉桂酸(中国药品生物制品 检定所)；银杏叶粗提物(江苏联江制药厂，总黄酮含量为16%)；二氧化碳(99%，上海酒精总 厂)；盐酸、磷酸、乙醇、十二烷基磺酸钠(SDS)、磷酸二氢钠、硼砂、氢氧化钠均为分析纯 。
1.2 仪器 ISCO100DX,100DM注射泵，SFX2-10超临界流体萃取器(美国ISCO公司) ；Waterscapillaryionanalyzer(美国Waters公司)。
1.3 SFE条件 压力42 mPa；温度60℃；改性剂0.2 ml乙醇；动态萃取体积4 ml； 静态萃取时间4 min；接收液乙醇。
1.4 水解条件 将萃取液置于50 ml烧瓶中，加入1.5 ml 3 mol/L的盐酸溶液，混 匀，水浴回流30 min，迅速冷却至室温，用甲醇定容于25 ml容量瓶中，混匀后进样测定。
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1.5 胶束电动毛细管色谱条件 空心熔融石英毛细管柱(55 cm×75 μm)；电压 18 kV；缓冲液的终浓度25 mmol/L NaH2PO4 6.25 mmol/L-Na2B4O7； SDS 35 m mol/L； pH 8.5；温度29℃；检测波长254 nm； 进样时间8 s。
2 结果和讨论
2.1 SFE条件的选择 选取对SFE萃取效率有较大影响的4个因素：A,温度；B,压力 ；C,改性剂加入量；D,动态萃取体积进行考察，各因素各取三个水平，按L9(34)正交表 进行实验(表1)。
表 1 正交设计的因素
Tab 1 The factors of orthogonal design Factors
, http://www.100md.com
level
Temperature
(A,t/℃)
Pressure
(B,p/mPa)
Modifier
volumn
(C,V/ml)
Dynamic extra-
ction volumn
(D,V/ml)
1
, 百拇医药
55
28
0.10
5
2
60
35
0.15
4
3
65
42
0.20
3
, 百拇医药
方差分析结果表明，改性剂的加入量对SFE的影响最大，而压力、温度、动态萃取体积 在本实验设计中对萃取效率影响不大。在本实验正交设计中各因素对结果没有统计学上的意 义。根据直观分析结果，选定萃取的条件为A2B3C3D2，即温度为60℃；压力为42 m Pa；加入的改性剂量为0.20 ml；动态萃取体积为4 ml。
2.2 胶束电动毛细管色谱条件的选择
2.2.1 操作电压和温度的影响 一般当柱长确定时，迁移时间随操作电压的增加 而缩短，但由此产生的柱内焦耳热也会增加，因此存在一个极点，同时柱效也最佳。将毛细 管电压设定为16, 18, 20 kV进行实验，结果发现18 kV较好。温度的变化会影响粘度、电渗 流大小以及保留时间，设置温度分别为25，27，29，31℃，考察柱效以及保留时间的变化， 选择最佳温度为29℃。
, 百拇医药
2.2.2 离子强度的影响 随着毛细管柱内缓冲溶液浓度的增加，带电粒子在柱内 的迁移速率下降，导致迁移时间延长，表现为样品保留时间变长。当缓冲液浓度增加时，电 流及相应的焦耳热随之增加，但在一定范围内增加缓冲液浓度，其柱效会随之明显提高。配 制3种不同浓度的缓冲液，即20 mmol/L NaH2PO4-5.0 mmol/L Na2B4O7， 25 mmol/L NaH2-
PO4-6.25 mmol/L Na2B4O7和30 mmol/L NaH2-PO 4-6.25 mmol/L Na2B4O7，根据柱效、保留时间及电流大小，选择缓冲液浓度为25 mmol/L NaH2PO4-6.25 mmol/L Na2B4O7溶液， pH 8.5。
, 百拇医药
2.2.3 SDS的影响 当未加SDS时，银杏叶粗提物是以毛细管区带电泳(CZE)的方 式根据组分的质荷比的不同而分离，槲皮素和山奈素此时无法分离。SDS加入后，形成的胶 束在色谱分离中作为一分配相，其浓度大小对分离有很大影响，在选定的缓冲溶液中，加入 不同浓度的SDS，考察其对组分的分离影响，结果见图1。从图中可见，槲皮素和山奈素的分 离度随SDS浓度的增大而改善；但迁移时间、电流以及产生的焦耳热也增加，综合考虑各因 素的影响，选定35 mmol/L的SDS为加入的表面活性剂量。
2.2.4 pH值的影响 缓冲液的pH值对分离也有较大的影响，我们考察了pH值为8.0 ，8.5，9.0对组分分离的影响。当pH值为8.0，8.5时，两组分能完全分离，但pH值为8.0时 ，分析时间较长。当pH值为9.0时，两者不能完全分离，故选定缓冲液的pH值为8.5进行分离 。
, 百拇医药 图 1 SDS浓度对迁移时间的影响
Fig 1 Effect of SDS concentration on migration time
△： Quercetin； ▲： Kaempferol
2.3 标准曲线 精密称取槲皮素、山奈素和肉桂酸的对照品(内标) 各10.60，10. 00, 10.10 mg，分别加甲醇溶解，定容于10 ml容量瓶中，得3种对照品标准溶液的质量浓度 分别为1.060，1.000和1.010 mg/ml。精密量取槲皮素标准液(1.060 mg/ml)和山奈素标准液 (1.000 mg/ml)各20，40，60，80，100 μl,分别置于1.0 ml容量瓶中，各精密加入肉桂酸 内标液20 μl，加缓冲液至刻度,混匀后进样测定,以槲皮素的峰面积和山奈素的峰面积分别 与内标的峰面积之比(Y)与进样浓度(X)进行回归，得回归方程: Y槲皮素 ＝0.038 22+0.033 70 X， r＝0.998 9 (n=5)； Y山 奈素＝-0.129 1+0.039 04 X， r＝0.999 1 (n=5)。
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2.4 样品测定 称取银杏叶粗提物20 mg 3份，按SFE条件萃取，接收于同一10 ml 容量瓶中；按水解条件进行操作，混匀后进样测定,色谱图见图2。 测得银杏叶粗提物中含 槲皮素的量为1.761 mg，山奈素的量为1.344 mg,计算黄酮甙含量＝2.64×山奈素+2.51× 槲皮素=7.97 mg；即银杏叶粗提物中含黄酮甙含量为13.28%。
2.5 加样回收率实验 精密称取银杏叶粗提物20 mg，分别加入40，60，80 μl的 槲皮素及山奈素标准液，并加入内标液，按样品测定方法进行萃取和测定，计算回收率。槲 皮素的加样回收率为(93.87±1.610)%，(94.02±3.56)%和(94.10±0.28)%；山奈 素为(94.50±1.95)%，(94.17±2.86)%和(94.25±0.21)% 。
2.6 精密度的测定 精密量取槲皮素标准溶液及山奈素标准溶液各40,60,80 μl ,分别置于1 ml容量瓶中，各加入内标液20 μl，加甲醇至刻度,混匀后进行精密度测定，测 得结果RSD槲皮素分别为1.08%,0.33%和0.83%，RSD山奈素 分别为0.92%，1.29%和1.40%。
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图 2 标准品(A)和样品(B)溶
液的胶束电动毛细管色谱图
Fig 2 Electrophoretograms of standard
(A) and sample (B) solutions
1： Inter-standard； 2： Quercertin； 3： Kaempferol
以上结果表明，SFE简便、快速、萃取效率高，且无环境污染，是具有较大优越性的提 取方法。改性剂的使用大大提高了其萃取效率，为银杏叶粗提物纯化的工业化生产提供了一 种新手段。与HPLC相比，MECC法高效的特点使其避免HPLC分离酸性成分时的顾此失彼，既要 防止拖尾现象，又要保护色谱柱；MECC的低耗既使实验成本降低，又可避免HPLC使用有机溶 剂对人体、环境造成的危害；MECC操作简便，对样品纯度的要求不象HPLC严格，其中SDS的 加入对两种黄酮甙元的分离具有关键的意义。SFE-MECC法提取测定银杏叶粗提物中黄酮类 化合物的含量，为银杏叶及其制剂的质量控制提供了一种新方法。
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[作者简介]佘佳红(1973-)，女(汉族)，硕士，助教.
[参 考 文 献]
[1] Hasler A,Sticher O,Meier B. Indentification and determination of the flavonoids from Ginkgo biloba by high-performance liquid chromatogr aphy. J Chromatogr,1992,605:41-48.
[2] 池静端，何秀峰，刘爱茹，等. HPLC法测定银杏叶中6种黄酮成分的含量. 药 学学报，1997,32(8):625-628.
[3] 粟晓黎，鲁 静. 银杏叶制剂总黄酮醇苷HPLC测定方法对比研究. 药物分析 杂志,1998,18(3):186-189.
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[4] Sheu SJ,Lu CF. Determination of six bioactive components of Hsiao-Ch eng-Chi-Tang by capillary electrophoresis. J High Resol Chromatogr,1995,18(1): 269-270.
[5] Hawthorne SB. Comparison of hydrodistillation and supercritical fluid extraction for the determination of essential oils in aromatic plants. J Chrom atogr,1993,634:297-308.
[收稿日期] 2000-03-10
[修回日期] 2000-06-22, 百拇医药
单位：佘佳红(第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室，上海，200433)；柳正良(药学院药物分析教研室)；王春燕(药学院药物分析教研室)；陈燕(药学院药物分析教研室)
关键词：超临界流体萃取；色谱法，胶束电动毛细管；银杏叶粗提物；斛皮素；山奈素
第二军医大学学报001018 [摘要] 目的：以超临界流体萃取(SFE) 银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素，以胶束电动毛细管色谱法(MECC)测定这两种成分的含量 。方法：采用正交设计法考察SFE提取工艺，SFE条件：压力42 mPa； 温度60 ℃；静态萃取时间4 min；动态萃取体积4 ml；改性剂0.2 ml乙醇。MECC条件：空心 熔融石英毛细管柱(55 cm×75 μm)；缓冲液为磷酸二氢钠-硼砂=25-6.25 mmol/L(pH 8. 5)；SDS 35 mmol/L；检测波长254 nm。结果：SFE时改性剂对萃取效 率的影响最大；MECC以肉桂酸为内标，在21.2～106.0 μg/ml和20.0～100.0 μg/ml范围内 ，槲皮素和山奈素均呈良好的线性关系和重现性。40,60和80 μl槲皮素的加样回收率分别 为93.87%,94.02%和94.10%；40,60和80 μl山奈素的加样回收率分别为94.50%,94.17%和94. 25%。结论：SFE与MECC法联用，简便快速，可用于银杏叶粗提物中的 黄酮类成分的分离分析。
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[中图分类号] R 284.1 [文献标识码] A
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0958-03
Determination of quercetin and kaempferol in Ginkgo biloba extract by supe rcritical fluid extraction and micellar electrokinetic capillary chromato -graphy
SHE Jia-Hong
(Depart ment of Health Toxicology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
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LIU Zheng-Liang， WANG Chun-Yan, CHEN Yan
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy)
[ABSTRACT]Objective: To establish a method for the determina tion of quercetin and kaempferol in Ginkgo biloba extract. Methods: A simple, rapid and reproducible supercritical fluid extract (SFE) and c apillary electrophoretic method were developed for it. SFE was selected by ortho gonal design method. SFE conditions: temperature 60 ℃, pressure 42 mPa, static extraction 4 min, dynamic extraction volume 4 ml and 0.2 ml ethanol as modifier. MECC conditions were 55 cm×75 μm fused silica capillary column. The running b uffer contained 25 mmol/L sodium dihydrophosphate, 6.25 mmol/L sodium borate ( pH=8.5) and 35 mmol/L sodium dodecyl sulfate(SDS). The detection wave-len gth was at 254 nm. Results: The influence of modifier on extraction rate in SFE was the most. The linear range for quercetin and kaempferol was 21.2-106.0 , 20.0-100.0 μg/ml, respectively, when cinnamic acid was in an internal s tandard. The recovery of quercetin for 40, 60 and 80 μl was 93.87%, 94.02 % and 94.10%, respectively. The recovery of kaempferol for 40, 60 and 80 μl was 94.50 %, 94.17% and 94.25%, respectively. Conclusion: SFE-MECC is con venient and accurate method, and can be used as a measure of quality control for Ginkgo biloba extract.
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[KEY WORDS]supercritical fluid extract; chromatography, mi cellar electrokinetic capillary; Ginkgo biloba extract; quercetin; kaempferol
银杏叶及其制剂的质量控制是以其有效成分之一的黄酮类化合物为主要指标。由于银杏 叶所含的黄酮类化合物种类多，对照品不易一一得到，使直接测定黄酮甙不能实现。鉴于黄 酮甙的甙元基本是槲皮素、山奈素和异鼠李素，因此采用将黄酮甙水解，测其甙元含量后， 乘以转化因子来计算总黄酮甙的含量。目前国内外多采用HPLC定量测得甙元的含量[1 ～3]。90年代发展起来的高效毛细管电泳法(HPCE)具有高效、低耗、快速的特点，而 胶束电动毛细管色谱(MECC)的出现，更拓展了HPCE在药物分析领域中的应用范围。本研究 以超临界流体萃取法(SFE)萃取银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素，应用MECC法进行含量测定 。
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1 材料和方法
1.1 药品和试剂 山奈素(美国Sigma公司)；槲皮素，肉桂酸(中国药品生物制品 检定所)；银杏叶粗提物(江苏联江制药厂，总黄酮含量为16%)；二氧化碳(99%，上海酒精总 厂)；盐酸、磷酸、乙醇、十二烷基磺酸钠(SDS)、磷酸二氢钠、硼砂、氢氧化钠均为分析纯 。
1.2 仪器 ISCO100DX,100DM注射泵，SFX2-10超临界流体萃取器(美国ISCO公司) ；Waterscapillaryionanalyzer(美国Waters公司)。
1.3 SFE条件 压力42 mPa；温度60℃；改性剂0.2 ml乙醇；动态萃取体积4 ml； 静态萃取时间4 min；接收液乙醇。
1.4 水解条件 将萃取液置于50 ml烧瓶中，加入1.5 ml 3 mol/L的盐酸溶液，混 匀，水浴回流30 min，迅速冷却至室温，用甲醇定容于25 ml容量瓶中，混匀后进样测定。
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1.5 胶束电动毛细管色谱条件 空心熔融石英毛细管柱(55 cm×75 μm)；电压 18 kV；缓冲液的终浓度25 mmol/L NaH2PO4 6.25 mmol/L-Na2B4O7； SDS 35 m mol/L； pH 8.5；温度29℃；检测波长254 nm； 进样时间8 s。
2 结果和讨论
2.1 SFE条件的选择 选取对SFE萃取效率有较大影响的4个因素：A,温度；B,压力 ；C,改性剂加入量；D,动态萃取体积进行考察，各因素各取三个水平，按L9(34)正交表 进行实验(表1)。
表 1 正交设计的因素
Tab 1 The factors of orthogonal design Factors
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level
Temperature
(A,t/℃)
Pressure
(B,p/mPa)
Modifier
volumn
(C,V/ml)
Dynamic extra-
ction volumn
(D,V/ml)
1
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55
28
0.10
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60
35
0.15
4
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0.20
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方差分析结果表明，改性剂的加入量对SFE的影响最大，而压力、温度、动态萃取体积 在本实验设计中对萃取效率影响不大。在本实验正交设计中各因素对结果没有统计学上的意 义。根据直观分析结果，选定萃取的条件为A2B3C3D2，即温度为60℃；压力为42 m Pa；加入的改性剂量为0.20 ml；动态萃取体积为4 ml。
2.2 胶束电动毛细管色谱条件的选择
2.2.1 操作电压和温度的影响 一般当柱长确定时，迁移时间随操作电压的增加 而缩短，但由此产生的柱内焦耳热也会增加，因此存在一个极点，同时柱效也最佳。将毛细 管电压设定为16, 18, 20 kV进行实验，结果发现18 kV较好。温度的变化会影响粘度、电渗 流大小以及保留时间，设置温度分别为25，27，29，31℃，考察柱效以及保留时间的变化， 选择最佳温度为29℃。
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2.2.2 离子强度的影响 随着毛细管柱内缓冲溶液浓度的增加，带电粒子在柱内 的迁移速率下降，导致迁移时间延长，表现为样品保留时间变长。当缓冲液浓度增加时，电 流及相应的焦耳热随之增加，但在一定范围内增加缓冲液浓度，其柱效会随之明显提高。配 制3种不同浓度的缓冲液，即20 mmol/L NaH2PO4-5.0 mmol/L Na2B4O7， 25 mmol/L NaH2-
PO4-6.25 mmol/L Na2B4O7和30 mmol/L NaH2-PO 4-6.25 mmol/L Na2B4O7，根据柱效、保留时间及电流大小，选择缓冲液浓度为25 mmol/L NaH2PO4-6.25 mmol/L Na2B4O7溶液， pH 8.5。
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2.2.3 SDS的影响 当未加SDS时，银杏叶粗提物是以毛细管区带电泳(CZE)的方 式根据组分的质荷比的不同而分离，槲皮素和山奈素此时无法分离。SDS加入后，形成的胶 束在色谱分离中作为一分配相，其浓度大小对分离有很大影响，在选定的缓冲溶液中，加入 不同浓度的SDS，考察其对组分的分离影响，结果见图1。从图中可见，槲皮素和山奈素的分 离度随SDS浓度的增大而改善；但迁移时间、电流以及产生的焦耳热也增加，综合考虑各因 素的影响，选定35 mmol/L的SDS为加入的表面活性剂量。
2.2.4 pH值的影响 缓冲液的pH值对分离也有较大的影响，我们考察了pH值为8.0 ，8.5，9.0对组分分离的影响。当pH值为8.0，8.5时，两组分能完全分离，但pH值为8.0时 ，分析时间较长。当pH值为9.0时，两者不能完全分离，故选定缓冲液的pH值为8.5进行分离 。
, 百拇医药 图 1 SDS浓度对迁移时间的影响
Fig 1 Effect of SDS concentration on migration time
△： Quercetin； ▲： Kaempferol
2.3 标准曲线 精密称取槲皮素、山奈素和肉桂酸的对照品(内标) 各10.60，10. 00, 10.10 mg，分别加甲醇溶解，定容于10 ml容量瓶中，得3种对照品标准溶液的质量浓度 分别为1.060，1.000和1.010 mg/ml。精密量取槲皮素标准液(1.060 mg/ml)和山奈素标准液 (1.000 mg/ml)各20，40，60，80，100 μl,分别置于1.0 ml容量瓶中，各精密加入肉桂酸 内标液20 μl，加缓冲液至刻度,混匀后进样测定,以槲皮素的峰面积和山奈素的峰面积分别 与内标的峰面积之比(Y)与进样浓度(X)进行回归，得回归方程: Y槲皮素 ＝0.038 22+0.033 70 X， r＝0.998 9 (n=5)； Y山 奈素＝-0.129 1+0.039 04 X， r＝0.999 1 (n=5)。
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2.4 样品测定 称取银杏叶粗提物20 mg 3份，按SFE条件萃取，接收于同一10 ml 容量瓶中；按水解条件进行操作，混匀后进样测定,色谱图见图2。 测得银杏叶粗提物中含 槲皮素的量为1.761 mg，山奈素的量为1.344 mg,计算黄酮甙含量＝2.64×山奈素+2.51× 槲皮素=7.97 mg；即银杏叶粗提物中含黄酮甙含量为13.28%。
2.5 加样回收率实验 精密称取银杏叶粗提物20 mg，分别加入40，60，80 μl的 槲皮素及山奈素标准液，并加入内标液，按样品测定方法进行萃取和测定，计算回收率。槲 皮素的加样回收率为(93.87±1.610)%，(94.02±3.56)%和(94.10±0.28)%；山奈 素为(94.50±1.95)%，(94.17±2.86)%和(94.25±0.21)% 。
2.6 精密度的测定 精密量取槲皮素标准溶液及山奈素标准溶液各40,60,80 μl ,分别置于1 ml容量瓶中，各加入内标液20 μl，加甲醇至刻度,混匀后进行精密度测定，测 得结果RSD槲皮素分别为1.08%,0.33%和0.83%，RSD山奈素 分别为0.92%，1.29%和1.40%。
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图 2 标准品(A)和样品(B)溶
液的胶束电动毛细管色谱图
Fig 2 Electrophoretograms of standard
(A) and sample (B) solutions
1： Inter-standard； 2： Quercertin； 3： Kaempferol
以上结果表明，SFE简便、快速、萃取效率高，且无环境污染，是具有较大优越性的提 取方法。改性剂的使用大大提高了其萃取效率，为银杏叶粗提物纯化的工业化生产提供了一 种新手段。与HPLC相比，MECC法高效的特点使其避免HPLC分离酸性成分时的顾此失彼，既要 防止拖尾现象，又要保护色谱柱；MECC的低耗既使实验成本降低，又可避免HPLC使用有机溶 剂对人体、环境造成的危害；MECC操作简便，对样品纯度的要求不象HPLC严格，其中SDS的 加入对两种黄酮甙元的分离具有关键的意义。SFE-MECC法提取测定银杏叶粗提物中黄酮类 化合物的含量，为银杏叶及其制剂的质量控制提供了一种新方法。
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[作者简介]佘佳红(1973-)，女(汉族)，硕士，助教.
[参 考 文 献]
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[收稿日期] 2000-03-10
[修回日期] 2000-06-22, 百拇医药