iNOS和ET-1在大鼠糖尿病早期肾组织中的动态表达及意义
作者：陈明 曾瑜 黄颂敏 田青 刘聪
单位：陈明 曾瑜(四川泸州医学院附院肾内科 646000)；黄颂敏 田青 刘聪(华西医科大学附一院肾内科)
关键词：糖尿病；一氧化氮；内皮素
中国现代医学杂志000911 为探讨诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮素-1(ET-1)在糖尿病(DM)大 鼠早期肾组织中的动态表达及意义。利用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病动物模型，免疫组化 及计算机图像分析定位、半定量检测iNOS和ET-1在肾组织中的表达。结果显示：在DM大鼠肾 组 织中，iNOS以第2周表达最多而第4周表达下调，对照组中未见表达；ET-1在正常大鼠及DM大 鼠肾组织中均有表达，髓质多于皮质，DM大鼠肾小球中第1，2周较对照组明显降低，第4 周 却升高，在肾小管-间质区随病程延长而逐渐增加。由此提示NO、ET参与了DM早期肾小球高 灌注和肾小管-间质的损伤。
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分类号 R587.2 R692
EXPRESSION OF INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE AND ENDOTHENLIN-1 IN KIDNEY OF EARLY DIABETIC RATS
Chen Ming Huang Songming Zhe Yu,et al.
(Department of Nephrology, the Affiliated Hospital, Lu Zhou Medical Colle ge, Sichuan 646000)
[Abstract]Objective: To clarify the expression of inducibl e nitric oxide syntha se (iNOIS) and endothelin-1 (ET-1) in kidney of diabetic rats and their effects. Methods: Diabetes Mellitus was induced by an abdominal injectio n streptozotocin (55mg.kg-1 body weight). Expressions of INOS and ET-1 were examined by immunohi stochemical staining and then half-guanitative analysis by Mia-2000 pathology co mputer image analyzer. Results: The expression of iNOS was signi ficantly increas ed in different levels in diabetes groups, however; no remarkable staining was o bserved in normal control group: In diabetes rats, iNOS reached its peak in the 2nd week and wild decreased in the 4th week (P<0.05, compared with the 2nd week) ; the positive staining of ET-1 were observed in normal control and diabetes rat s; in glomeruli of diabete rats, the expression of ET-1 were decreased in the 1s t, 2nd week (6.943±0.170, 6.674±0.264 vs 8.088±0.383, P<0.05), but in tu buloi nterstitum, ET-1 were steadly increased with the course of diabetes. Con clusions: The iNOS and ET-1 may bepathogenetic factors of early diabetic nep hropathic hyperafiltration, hyperfusion and injury of diabetic tubulointerstium.
, 百拇医药
Key words:Diabetes; Nitrie Oxide; Endothelin
一氧化氮(Nitric Oxide,NO)和内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)是近年 研究较活跃的自分泌、旁分泌血管活性物质。既往多从血、尿中检测NO的代谢产物NO-2 /NO-3和ET-1间接探讨二者在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)中的效应，由于使 用方法、技术不同，选择研究对象的差异，结论不一[1，2]。为此，本研究直接 检测iNOS、ET-1在大鼠糖尿病(Diabete Mellite,DM)早期肾组织中的动态表达，为早期防治 DN的发生与进展提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物模型的建立
, 百拇医药
选取健康雄性Wistar大鼠24只(一级实验动物，由华西医科大学动物实验中心提供)，体重2 25±26g,鼠龄3～4个月。随机分成正常对照组(A)和实验1周(B)、2周(C)、4周(D)组，每组6 只动物。一次性腹腔内注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ 55mg/kg体重)复制DM动物模型 [3]，3d后取尾静脉测血糖，以血糖>16.65mmol/L为DM成模标准。标准饲料，不限 饮水铁笼饲养，每隔3d复查血糖1次，持续>16.65mmol/L的动物纳入研究[3]。分 别于成模后1周、2周、4周断头处死动物，清洁取肾，修块后于4%多聚甲醛中固定，常规石 蜡包埋，切成5μm厚切片备检。
1.2 免疫组化染色
取切片常规ABC染色法检测实验大鼠肾组织中iNOS、ET-1的表达。其中兔抗鼠iNOS抗体(Sant a Cruz CO提供)兔抗鼠ET-1抗体(SigmaCO提供)工作浓度分别为1∶80，1∶1000，iNO S阳性对照为大鼠腹主动脉切片，用0.1mPBS缓冲液分别代替Ⅰ抗、Ⅱ抗及ABC复合物作空白 对照。
, 百拇医药
1.3 染色结果观察
1.3.1 光镜观察 以棕黄色作为阳性标示，以阳性细胞占一个视野的百分 比作为定级标准，观察阳性细胞种类及阳性细胞在肾脏各区域的分布(包括肾小球、皮质肾 小管-间质、外髓肾小管-间质、内髓肾小管-间质)。
1.3.2 图像分析 选取同一染色条件下的组化切片，于400倍光镜下每张切 片随机选择肾小球、皮质肾小管-间质、外髓肾小管-间质、内髓肾小管-间质各10个视野， 利用Mia-2000型病理图像分析系统(由四川联合大学图形、图像研究中心提供)测定iNOS、ET -1阳性着色的面积比×平均灰度，并求均值。
1.4 统计处理
所有计量资料均以
±s表示，行单因素方差分析。
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2 实验结果
2.1 光镜观察结果
iNOS在DM各组均有表达，主要分布于小球内皮细胞、小管上皮细胞、系膜细胞、血管内皮细 胞及局灶浸润的单核、巨噬细胞胞浆之中，以外髓肾小管-间质区域表达明显，尤以第2周表 达最多，第4周呈下降趋势，而对照组未见阳性表达。实验组和对照组大鼠肾小球内皮细胞 、系膜细胞、血管平滑肌细胞、肾小管上皮细胞胞浆之中均有ET-1表达，其中髓质多于皮质 ；DM大鼠第1，2周肾小球内ET-1的表达较对照组下降，第4周较对照组增高，但肾小管-间质 中随病程延长均有不断增加改变。
2.2 图像分析结果
iNOS和ET-1在实验大鼠肾脏中的表达同光镜观察结果基本一致，详见表1，2。
表1 DM大鼠肾组织中iNOS的表达(平均灰度×面积比) 实验
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分组
例数
肾小球
皮质肾小管
-间质
外髓肾小管
-间质
内髓肾 小管
-间质
A
6
0
0
, 百拇医药 0
0
B
6
6.469±0.2732)
10.091±0.7182)
14.403±0.7962)
8.712±0.6701)
C
6
16.107±1.019
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20.093±1.005
25.270±1.298
17.482±0.933
D
6
10.479±0.7991)
12.864±0.8012)
16.694±0.7341)
14.807±0.7691)
注：1)与第2周组(C组)比较P<0.05
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2)与第2周组(C组)比较P<0.01表2 DM大鼠肾组织中ET-1的表达(平均灰度×面积比) 实验
分组
例数
肾小球
皮质肾小管
-间质
外髓肾小管
-间质
内髓肾 小管
-间质
A
6
, 百拇医药
8.088±0.383
8.945±0.216
10.849±0.813
11.965±0.283
B
6
6.943±0.1701)
8.703±0.155
10.855±0.154
12.564±0.418
C
, 百拇医药 6
6.674±0.2651)
9.376±0.173
11.702±0.2081)
13.88 6±0.2481)
D
6
10.957±0.2031)
12.183±0.2152)
13.456±0.8571)
, 百拇医药
17.808±0.2652)
注：1)与正常组(A组)比较P<0.05
2)与正常组(A组)比较P<0.013 讨论
3.1 iNOS在DM早期肾组织中的动态表达及意义
NO是一种信息传递分子，易弥散，半衰期仅数秒，在组织中直接测定非常困难。研究表明在 病理状态下直接检测组织中诱生型一氧化氮合酶可客观反映组织中NO的含量[4]， 因此，本实验直接检测肾组织中iNOS的表达。结果发现对照组大鼠肾组织中未见iNOS表达， DM 大鼠肾组织中均有表达，表明iNOS只在病理状态下才可被激活。本实验提示大鼠DM早期肾组 织内iNOS的表达呈先高后低动态变化，这种变化的原因可能系：DM时高血糖可使细胞外液扩 容，肾血管切应力增加；DM初期，一些细胞因子如白介素-1、肿瘤坏死因子-α，干扰素-γ 产生增加；DM时氨基酸代谢紊乱，尤其是甲基胍增加，这三方面因素通过多种途径作用上调 iNOS的表达[5]。随着DM进展糖基化终末产物(AGEs)、氧自由基及多元醇通路的代 谢产物增加，又使iNOS的合成下调[6]。
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Pugliese G[7]提出STZ诱导速发性DM动物模型在成模后第7～14天存在着明显肾小 球高灌注。而本实验结果显示该期肾小球内iNOS表达明显增加，使NO生成增多，扩张肾小球 入、出球动脉，舒张肾小球系膜细胞导致肾小球高灌的发生[8]，由此可见NO是导 致DM肾小球高灌的一个重要原因。
NO不仅可扩张血管，长期持续高表达还可干扰细胞能量代谢，抑制DNA合成，氧化、烷化DNA 及抑制DNA修复酶造成细胞毒性反应[9]。本实验显示DM早期iNOS不仅在肾小球内 高表达，尤其在肾小管-间质区明显增加，提示NO也可能参与DM早期肾小管-间质损伤。
3.2 ET-1在DM早期肾组织中的表达及意义
ET-1是一种21个氨基酸的小分子多肽，肾脏不仅是它的效应器官，也是它的主要合成代谢场 所[10]。本实验提示ET-1在肾组织中广泛表达，尤其在髓质中表达较多，可能是 ：肾皮质部血管 丰富，血流速度相对较快，增加了ET-1转运；肾髓质中中性肽链裂解酶较皮质部生成少，导 致髓质中ET-1降解减慢[11]。
, 百拇医药
ET-1主要通过增加细胞内Ca2+浓度收缩肾脏血管中平滑肌细胞和系膜细胞，尤其是 收缩入球动脉强于出球动脉，过度表达可降低肾小球滤过率和滤过分数[2]。本实 验显示在DM7～14d肾小内ET-1的表达下调，这可使肾小球滤过率和滤过分数增加，导致肾小 球高灌注、高滤过，可见ET-1在DM早期也参与其高灌注、高滤过的发生。但ET-1下降的原因 尚不清楚，值得进一步研究。
ET-1不仅收缩肾血管，还可促进细胞生长、增殖，促进细胞外基质合成，影响肾小管重吸收 [2]。本实验发现ET-1在DM早期肾髓质中持续升高，这可能是既往组织学发现DN肾 小管损伤较早较重的原因之一，尚应进一步探索。
综上所述，NO和ET-1这一对血管活性物质参与了肾小球高灌高滤过的发生，也可能参与DM早 期肾小管、间质的损伤，应早期予以调整，以避免和/或延缓糖尿病肾病的发生和发展。
, 百拇医药
参考文献
1，Kone BC.Nitric oxide in renal health and disease.Am J Kidney Dis,1997; 30:311～333
2，Kohan DE.Endothelins in the normal and diseased kidney.Am J Kidney Dis ,1997;29:2～26
3，于德民，吴 税，尹 潍，等.实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究.中国糖 尿病杂志，1995；3：105～108
4，中国医学科学院，中华医学会中华医学杂志编辑委员会.全国一氧化氮基础与临 床学术研讨会纪要.中华医学杂志，1998；78：16～18
5，Saura M,Lopes S,Puyol MR,et al.Regulation of inducible nitric oxide sy nthase expression in rat mesangial cells and isolated glomeruli.Kidney Int,1995; 47:500～509
, 百拇医药
6，Tilton RG,Chang K,Hasan KS,et al.Prevention of diabetic vascular disf u nction by guanidine:Inhibition of nitric oxide synthase verus advanced glycosate endproducts formation.Diabetes,1993;42:221～226
7，Pugliese G,Pricci F,Pesce C,et al.Early,but not advanced.Glomerulopat hy is reversed by pancreatic islet transplants in experimental diabetic rats-cor relation with glomerular extracellular matrix mRNA levels.Diabetes,1997;46:1198 ～1206
, 百拇医药
8，李 兴，原向红.Ⅱ型糖尿病血清NO及CPO的变化和临床意义.中国现代医学杂志 ，1999；9(9)：20～21
9，Liu RH,Hotchkiss JH.Potential genotoxicity of chronically elevated nit ric oxide:a reviews.Mutat Res,1995;339:73～89
10，王云彦，张庆林，王淑贞，等.内皮素-1在脑瘤患者手术前后调节作用的研究. 中国现代医学杂志，1998；4(8)：15～16
11，Pulpillic B,Brunori M,Misciglia N,et al.Presence and distribution of endothelin-1 gene expression in human kidney.Am J Physiol,1994;267:F679～687
1999-12-11收稿, http://www.100md.com
单位：陈明 曾瑜(四川泸州医学院附院肾内科 646000)；黄颂敏 田青 刘聪(华西医科大学附一院肾内科)
关键词：糖尿病；一氧化氮；内皮素
中国现代医学杂志000911 为探讨诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮素-1(ET-1)在糖尿病(DM)大 鼠早期肾组织中的动态表达及意义。利用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病动物模型，免疫组化 及计算机图像分析定位、半定量检测iNOS和ET-1在肾组织中的表达。结果显示：在DM大鼠肾 组 织中，iNOS以第2周表达最多而第4周表达下调，对照组中未见表达；ET-1在正常大鼠及DM大 鼠肾组织中均有表达，髓质多于皮质，DM大鼠肾小球中第1，2周较对照组明显降低，第4 周 却升高，在肾小管-间质区随病程延长而逐渐增加。由此提示NO、ET参与了DM早期肾小球高 灌注和肾小管-间质的损伤。
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分类号 R587.2 R692
EXPRESSION OF INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE AND ENDOTHENLIN-1 IN KIDNEY OF EARLY DIABETIC RATS
Chen Ming Huang Songming Zhe Yu,et al.
(Department of Nephrology, the Affiliated Hospital, Lu Zhou Medical Colle ge, Sichuan 646000)
[Abstract]Objective: To clarify the expression of inducibl e nitric oxide syntha se (iNOIS) and endothelin-1 (ET-1) in kidney of diabetic rats and their effects. Methods: Diabetes Mellitus was induced by an abdominal injectio n streptozotocin (55mg.kg-1 body weight). Expressions of INOS and ET-1 were examined by immunohi stochemical staining and then half-guanitative analysis by Mia-2000 pathology co mputer image analyzer. Results: The expression of iNOS was signi ficantly increas ed in different levels in diabetes groups, however; no remarkable staining was o bserved in normal control group: In diabetes rats, iNOS reached its peak in the 2nd week and wild decreased in the 4th week (P<0.05, compared with the 2nd week) ; the positive staining of ET-1 were observed in normal control and diabetes rat s; in glomeruli of diabete rats, the expression of ET-1 were decreased in the 1s t, 2nd week (6.943±0.170, 6.674±0.264 vs 8.088±0.383, P<0.05), but in tu buloi nterstitum, ET-1 were steadly increased with the course of diabetes. Con clusions: The iNOS and ET-1 may bepathogenetic factors of early diabetic nep hropathic hyperafiltration, hyperfusion and injury of diabetic tubulointerstium.
, 百拇医药
Key words:Diabetes; Nitrie Oxide; Endothelin
一氧化氮(Nitric Oxide,NO)和内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)是近年 研究较活跃的自分泌、旁分泌血管活性物质。既往多从血、尿中检测NO的代谢产物NO-2 /NO-3和ET-1间接探讨二者在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)中的效应，由于使 用方法、技术不同，选择研究对象的差异，结论不一[1，2]。为此，本研究直接 检测iNOS、ET-1在大鼠糖尿病(Diabete Mellite,DM)早期肾组织中的动态表达，为早期防治 DN的发生与进展提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物模型的建立
, 百拇医药
选取健康雄性Wistar大鼠24只(一级实验动物，由华西医科大学动物实验中心提供)，体重2 25±26g,鼠龄3～4个月。随机分成正常对照组(A)和实验1周(B)、2周(C)、4周(D)组，每组6 只动物。一次性腹腔内注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ 55mg/kg体重)复制DM动物模型 [3]，3d后取尾静脉测血糖，以血糖>16.65mmol/L为DM成模标准。标准饲料，不限 饮水铁笼饲养，每隔3d复查血糖1次，持续>16.65mmol/L的动物纳入研究[3]。分 别于成模后1周、2周、4周断头处死动物，清洁取肾，修块后于4%多聚甲醛中固定，常规石 蜡包埋，切成5μm厚切片备检。
1.2 免疫组化染色
取切片常规ABC染色法检测实验大鼠肾组织中iNOS、ET-1的表达。其中兔抗鼠iNOS抗体(Sant a Cruz CO提供)兔抗鼠ET-1抗体(SigmaCO提供)工作浓度分别为1∶80，1∶1000，iNO S阳性对照为大鼠腹主动脉切片，用0.1mPBS缓冲液分别代替Ⅰ抗、Ⅱ抗及ABC复合物作空白 对照。
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1.3 染色结果观察
1.3.1 光镜观察 以棕黄色作为阳性标示，以阳性细胞占一个视野的百分 比作为定级标准，观察阳性细胞种类及阳性细胞在肾脏各区域的分布(包括肾小球、皮质肾 小管-间质、外髓肾小管-间质、内髓肾小管-间质)。
1.3.2 图像分析 选取同一染色条件下的组化切片，于400倍光镜下每张切 片随机选择肾小球、皮质肾小管-间质、外髓肾小管-间质、内髓肾小管-间质各10个视野， 利用Mia-2000型病理图像分析系统(由四川联合大学图形、图像研究中心提供)测定iNOS、ET -1阳性着色的面积比×平均灰度，并求均值。
1.4 统计处理
所有计量资料均以
±s表示，行单因素方差分析。, http://www.100md.com
2 实验结果
2.1 光镜观察结果
iNOS在DM各组均有表达，主要分布于小球内皮细胞、小管上皮细胞、系膜细胞、血管内皮细 胞及局灶浸润的单核、巨噬细胞胞浆之中，以外髓肾小管-间质区域表达明显，尤以第2周表 达最多，第4周呈下降趋势，而对照组未见阳性表达。实验组和对照组大鼠肾小球内皮细胞 、系膜细胞、血管平滑肌细胞、肾小管上皮细胞胞浆之中均有ET-1表达，其中髓质多于皮质 ；DM大鼠第1，2周肾小球内ET-1的表达较对照组下降，第4周较对照组增高，但肾小管-间质 中随病程延长均有不断增加改变。
2.2 图像分析结果
iNOS和ET-1在实验大鼠肾脏中的表达同光镜观察结果基本一致，详见表1，2。
表1 DM大鼠肾组织中iNOS的表达(平均灰度×面积比) 实验
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分组
例数
肾小球
皮质肾小管
-间质
外髓肾小管
-间质
内髓肾 小管
-间质
A
6
0
0
, 百拇医药 0
0
B
6
6.469±0.2732)
10.091±0.7182)
14.403±0.7962)
8.712±0.6701)
C
6
16.107±1.019
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20.093±1.005
25.270±1.298
17.482±0.933
D
6
10.479±0.7991)
12.864±0.8012)
16.694±0.7341)
14.807±0.7691)
注：1)与第2周组(C组)比较P<0.05
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2)与第2周组(C组)比较P<0.01表2 DM大鼠肾组织中ET-1的表达(平均灰度×面积比) 实验
分组
例数
肾小球
皮质肾小管
-间质
外髓肾小管
-间质
内髓肾 小管
-间质
A
6
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8.088±0.383
8.945±0.216
10.849±0.813
11.965±0.283
B
6
6.943±0.1701)
8.703±0.155
10.855±0.154
12.564±0.418
C
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6.674±0.2651)
9.376±0.173
11.702±0.2081)
13.88 6±0.2481)
D
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10.957±0.2031)
12.183±0.2152)
13.456±0.8571)
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17.808±0.2652)
注：1)与正常组(A组)比较P<0.05
2)与正常组(A组)比较P<0.013 讨论
3.1 iNOS在DM早期肾组织中的动态表达及意义
NO是一种信息传递分子，易弥散，半衰期仅数秒，在组织中直接测定非常困难。研究表明在 病理状态下直接检测组织中诱生型一氧化氮合酶可客观反映组织中NO的含量[4]， 因此，本实验直接检测肾组织中iNOS的表达。结果发现对照组大鼠肾组织中未见iNOS表达， DM 大鼠肾组织中均有表达，表明iNOS只在病理状态下才可被激活。本实验提示大鼠DM早期肾组 织内iNOS的表达呈先高后低动态变化，这种变化的原因可能系：DM时高血糖可使细胞外液扩 容，肾血管切应力增加；DM初期，一些细胞因子如白介素-1、肿瘤坏死因子-α，干扰素-γ 产生增加；DM时氨基酸代谢紊乱，尤其是甲基胍增加，这三方面因素通过多种途径作用上调 iNOS的表达[5]。随着DM进展糖基化终末产物(AGEs)、氧自由基及多元醇通路的代 谢产物增加，又使iNOS的合成下调[6]。
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Pugliese G[7]提出STZ诱导速发性DM动物模型在成模后第7～14天存在着明显肾小 球高灌注。而本实验结果显示该期肾小球内iNOS表达明显增加，使NO生成增多，扩张肾小球 入、出球动脉，舒张肾小球系膜细胞导致肾小球高灌的发生[8]，由此可见NO是导 致DM肾小球高灌的一个重要原因。
NO不仅可扩张血管，长期持续高表达还可干扰细胞能量代谢，抑制DNA合成，氧化、烷化DNA 及抑制DNA修复酶造成细胞毒性反应[9]。本实验显示DM早期iNOS不仅在肾小球内 高表达，尤其在肾小管-间质区明显增加，提示NO也可能参与DM早期肾小管-间质损伤。
3.2 ET-1在DM早期肾组织中的表达及意义
ET-1是一种21个氨基酸的小分子多肽，肾脏不仅是它的效应器官，也是它的主要合成代谢场 所[10]。本实验提示ET-1在肾组织中广泛表达，尤其在髓质中表达较多，可能是 ：肾皮质部血管 丰富，血流速度相对较快，增加了ET-1转运；肾髓质中中性肽链裂解酶较皮质部生成少，导 致髓质中ET-1降解减慢[11]。
, 百拇医药
ET-1主要通过增加细胞内Ca2+浓度收缩肾脏血管中平滑肌细胞和系膜细胞，尤其是 收缩入球动脉强于出球动脉，过度表达可降低肾小球滤过率和滤过分数[2]。本实 验显示在DM7～14d肾小内ET-1的表达下调，这可使肾小球滤过率和滤过分数增加，导致肾小 球高灌注、高滤过，可见ET-1在DM早期也参与其高灌注、高滤过的发生。但ET-1下降的原因 尚不清楚，值得进一步研究。
ET-1不仅收缩肾血管，还可促进细胞生长、增殖，促进细胞外基质合成，影响肾小管重吸收 [2]。本实验发现ET-1在DM早期肾髓质中持续升高，这可能是既往组织学发现DN肾 小管损伤较早较重的原因之一，尚应进一步探索。
综上所述，NO和ET-1这一对血管活性物质参与了肾小球高灌高滤过的发生，也可能参与DM早 期肾小管、间质的损伤，应早期予以调整，以避免和/或延缓糖尿病肾病的发生和发展。
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参考文献
1，Kone BC.Nitric oxide in renal health and disease.Am J Kidney Dis,1997; 30:311～333
2，Kohan DE.Endothelins in the normal and diseased kidney.Am J Kidney Dis ,1997;29:2～26
3，于德民，吴 税，尹 潍，等.实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究.中国糖 尿病杂志，1995；3：105～108
4，中国医学科学院，中华医学会中华医学杂志编辑委员会.全国一氧化氮基础与临 床学术研讨会纪要.中华医学杂志，1998；78：16～18
5，Saura M,Lopes S,Puyol MR,et al.Regulation of inducible nitric oxide sy nthase expression in rat mesangial cells and isolated glomeruli.Kidney Int,1995; 47:500～509
, 百拇医药
6，Tilton RG,Chang K,Hasan KS,et al.Prevention of diabetic vascular disf u nction by guanidine:Inhibition of nitric oxide synthase verus advanced glycosate endproducts formation.Diabetes,1993;42:221～226
7，Pugliese G,Pricci F,Pesce C,et al.Early,but not advanced.Glomerulopat hy is reversed by pancreatic islet transplants in experimental diabetic rats-cor relation with glomerular extracellular matrix mRNA levels.Diabetes,1997;46:1198 ～1206
, 百拇医药
8，李 兴，原向红.Ⅱ型糖尿病血清NO及CPO的变化和临床意义.中国现代医学杂志 ，1999；9(9)：20～21
9，Liu RH,Hotchkiss JH.Potential genotoxicity of chronically elevated nit ric oxide:a reviews.Mutat Res,1995;339:73～89
10，王云彦，张庆林，王淑贞，等.内皮素-1在脑瘤患者手术前后调节作用的研究. 中国现代医学杂志，1998；4(8)：15～16
11，Pulpillic B,Brunori M,Misciglia N,et al.Presence and distribution of endothelin-1 gene expression in human kidney.Am J Physiol,1994;267:F679～687
1999-12-11收稿, http://www.100md.com