对标准化尿碘测定方法应用过程中几个问题的讨论与建议
作者：阎玉芹 陈祖培
单位：天津医科大学 内分泌研究所，天津 300070
关键词：
中国地方病学杂志990419 中图分类号 O613.44;R446.12;O652 [文献标识码] C [文章编号] 1000-4955(1999)04-0295-03
尿碘水平是监测及评价人群或个体碘营养状况的重要指标之一，尤其随着国家碘缺乏病防治工作的进展而逐渐消除碘缺乏病以后，甲肿率作为监测及评价人群或个体碘营养指标的灵敏性和实用性可能会逐渐下降，而尿碘指标则会变得更加实用。为保证尿碘指标的准确性和可比性，我国研制了尿碘测定的标准方法。《尿碘的砷铈催化分光光度测定方法》[1]。作为待颁布的国家行业标准自1996年下半年起已经在全国广泛应用，特别在1997年度完成的全国碘缺乏病病情监测中已定为全国统一的尿碘测定方法[2]。
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该标准方法在两年的应用中，大多数实验室包括省、市、县级实验室均反映良好，充分肯定了该方法的建立确实是立足于国产仪器、试剂的现状以及省、县级实验室的实际条件，适用于一般实验室可操作的好方法；并在实践中充分体会到了该方法检测灵敏度高、重现性好、结果准确、操作简便易掌握的主要特征。但是，某些专业人员在应用过程中仍遇到一些问题。作者针对所反映上来的有关共性问题，归纳成两个方面进行讨论，并提出我们的认识和建议，目的是进一步规范操作技术，正确评价人群或个体碘营养水平。仅供同道们参考。
1 标准化方法在应用过程中遇到的有关技术问题
1.1 关于尿碘检测范围：本方法碘标准曲线范围为0～300μg/L，有效尿碘检测范围5～300μg/L，已较国际推荐方法[3]的检测范围0～150μg/L拓宽了一倍。根据我国《研制生物样品监测检验方法指南》[4]的要求：在规定的样品体积内，一般应在浓度为0.3～3倍于生理剂量的范围内建立标准曲线。因考虑以尿碘浓度评价机体碘营养水平的生理切点值一般定为100μg/L，所以本方法建立时将碘浓度的检测上限定为300μg/L(即3倍于尿碘生理切点值)。但在1997年度的碘缺乏病病情监测工作中发现有相当比率的尿样因碘含量过高需要反复稀释后重新测定，给检测工作带来很大麻烦。分析原因主要由于近两年来我国儿童在普及碘盐的基础上，又普遍补服了碘油以及加碘保健品等综合影响的结果，致使儿童尿碘水平显著增高。1997年全国碘缺乏病监测结果显示已有18个省儿童尿碘中位数达到300μg/L以上，并有相当比率的尿样超出了800μg/L[5]。根据国际组织最新推荐以及国内外专家所期望的人群最佳尿碘水平应在100～200μg/L[6～8]，因此各地应加强盐碘监测，保证合格碘盐浓度，合理使用碘油及加碘食品，有望随着科学补碘的进展，人群尿碘水平终会达到最佳状态。那么从长远角度考虑，当前标准方法的检测范围0～300μg/L是完全能够满足人群最佳尿碘水平(100～200μg/L)检测用的，期待全国停用碘油一年后的1999年国家碘缺乏病监测结果将会得到验证。另外，本方法在应用时，对预计碘含量偏高的尿样可直接取样0.1ml,再加上0.1ml水补齐，可使检测范围拓展到600μg/L。
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需要说明的是，当前的尿碘测定方法仍属微量碘测定，对于那些碘含量特高，需要进行几十倍或几百倍稀释后才能进入本方法的检测范围的尿样一般不适合本方法测定，因为这种高倍数的反复稀释所造成结果的误差将是很大的。
1.2 氯酸溶液的配制问题：氯酸溶液配制不规范，常常是造成每批配制后的标准曲线变异很大、结果不准确的主要原因，也是基层实验室和缺乏经验的检测人员最易碰到的问题。由于氯酸配制质量可直接影响测定结果，所以应普遍引起重视。这里再次强调必严格按照方法要求进行氯酸配制。另外，最好保证氯酸钾试剂至少为分析纯，高氯酸为优级纯；建议各实验室应根据当地试剂的供应情况，相对固定购买某个厂家产品以保证试剂的纯度及其稳定性，同时要建立起本实验室配制氯酸的程序和经验，尽量减少每批配制之间的差异,以保证碘标准系列的0管和300μg/L管的吸光度值相对稳定。
1.3 每批样品消化需要设置空白和标准系列：由于尿样在消化过程中缺乏特异性终点指示，另外每批消化温度及时间很难控制一致，所以每批样品消化均需设置空白(0管)和标准系列。有的实验室在大批样本测定时，同时开放两台恒温消解仪或控温油浴箱，此时每台恒温装置应分别设置一套空白和标准系列，因两台仪器很难掌握消化条件完全一致。
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1.4 关于砷铈反应的温度与时间控制：基于我国南北方气温水平对实验室温度影响的实际情况，为使实验室在一年中的大多数时间内能按本方法进行尿碘检测，故选用砷铈反应温度为30℃，建议最好使用超级恒温水浴控温(30±0.2℃)。实验证明当反应温度>30℃时，由于反应体系中剩余氯酸等活性氯对砷铈反应的作用加剧而影响测定结果的准确度。为使标准曲线在0～300μg/L碘浓度范围内具有较好的线性关系、良好的斜率、以及保证吸光度值落在1.0～0.15之间，经实验证明砷铈反应时间应选择为15分钟才能达到上述要求。另外，本方法在不改变试剂浓度和用量情况下，也适合于砷铈反应温度为25℃，反应时间为25分钟条件下准确测定尿碘含量[9]，许多实验室在春冬季节可采用此反应条件测定尿碘。
这里需要强调的是，在操作时必须严格控制样品管与标准系列管的反应温度和时间的一致性。实验证明当样品管相对标准系列管反应温度差±1℃或反应时间差±1分钟时，可导致尿碘测定结果的误差高达10%以上[10]。
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1.5 关于测定尿比重筛选尿样问题：由于收集随意一次尿样测定尿碘含量常因被检者饮水、出汗等因素造成尿样稀释或浓缩而使尿碘浓度减低或增高，不能反应真实尿碘水平。为克服这一弊端，标准方法要求事先采用尿比重计(即尿比密计)测量尿样比重筛选比重在生理范围(即1.010～1.030)的尿样作为尿碘测定用，对比重<1.010，或>1.030的尿样应弃去不用，重新采尿。作者建议目前做到这点就可以了，尚无必要将尿碘浓度校正到标准尿比重(1.020)下的碘浓度。
在实际工作中，应根据其工作目的、精度要求、人力及物力等实际情况，灵活掌握尿样筛选问题。当进行人群碘营养监测时，在保证足够样本量的前提条件下，可不考虑尿样筛选问题，这要由防治监测人员根据工作目的和精度要求做出决定。在判断个体碘营养水平时，作者建议必须考虑尿样筛选问题，可采用收集晨尿的办法，一般会避免尿稀释或尿浓缩；如果收集随意一次尿样则要事先测量尿比重进行尿样筛选，以保证检测结果的可靠性。
1.6 关于尿样保存问题：经样品稳定性实验研究证明，尿样经冷冻以后，尿碘测定结果常不稳定或测定值多呈下降趋势。尿样置4℃冰箱保存效果最佳，可稳定1个月左右；若按尿样体积1%(V/V)加入浓盐酸，于4℃下可稳定2个月。现场收集尿样封盖后，可于常温下直接运回实验室置4℃冰箱保存，尽快测定。
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2 正确利用尿碘值评价人群或个体碘营养水平
根据尿碘检测数据正确评价人群或个体碘营养状况，必须考虑尿样的代表性(即样本数量和质量)，以及正确使用尿碘指标及其评价标准。
2.1 样本数量：用于人群碘营养监测与评价时必须保证足够的样本数量。目前全国统一病情监测采用PPS抽样法评价全省水平，推荐尿碘样本量为360份，可达到满意的可信区间及相对精度等。如果在较小范围内或对某一特定人群做点状抽查时，建议样本量至少50份以上(50～100)为宜。
用于判断个体碘营养水平，采集一次尿样很难作出正确判断，因为一次尿碘测定结果只能反应前一天的碘摄入水平。建议在采尿的前几天内避免食用含碘高的特殊饮食，要在通常饮食情况下收集尿样；有条件者最好间隔一定天数连续收集2～3次尿样进行测定，根据动态观察结果才能有把握做出正确判断。
2.2 尿样质量：保证尿样质量目前主要考虑两个方面，一是避免采集稀释或浓缩尿样，解决办法是事先测量尿比重筛选尿样或采集晨尿；二是保证尿样稳定，置4℃冰箱保存效果最佳，尽早测定，避免冷冻尿样。
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2.3 尿碘指标及其评价标准：监测及评价人群碘营养状况的尿碘指标主要有3项：(1)尿碘平均水平(以中位数表示之)；(2)尿碘<100μg/L的比率；(3)尿碘<50μg/L的比率。评价个体碘营养状况时，可根据尿碘测定结果进行判定，但应该参考连续几次尿碘测定结果的波动范围进行综合判断就更有把握。
对于尿碘指标的评价标准，国际组织已明确提出8～10岁学龄儿童的尿碘中位数应≥100μg/L，尿碘<100μg/L的比率应<50%，而<50μg/L的比率<20%[11]。ICCIDD最新推荐，儿童及成人的尿碘中位数范围应在100～200μg/L[12]。但对于孕妇及哺乳妇女的尿碘中位数水平我们建议应≥150μg/L，最佳中位数范围应在150～300μg/L。其他人群的尿碘水平标准可以参照学龄儿童标准。
如果一个人群的尿碘中位数≥100μg/L(孕妇及哺乳妇女应≥150μg/L),其中尿碘<100μg/L的比率小于50%，而<50μg/L的比率小于20%，则可判断该人群不存在碘缺乏。此时没有必要过份担心那些少数的低碘尿样，因为它们对整体评价没有实际意义，正因为尿碘水平受前一天碘摄入量的影响很大，在群体采样时必然存在一定数量的低碘尿样，但只要没有超出正常的分布频率就可以了，这当然要在足够的样本数量前提下。
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作者简介：阎玉芹，女，1946年生，研究所
参考文献
[1] 阎玉芹，刘列钧，张亚平，等.尿碘的砷铈催化分光光度测定方法[J].中国地方病学杂志，1997，16(1)：37.
[2] 中华人民共和国卫生部.关于开展第二次碘缺乏病抽样监测的通知[R].卫地发[1997]第2号，1997.
[3] ICCIDD/UNICEF/WHO.Methods for measuring Iodine in urine[R].Neterlands,1993.18.
[4] 研制生物样品监测检验方法指南[S].中华人民共和国国家标准，1993.
[5] 中国地方病防治研究中心.全国碘缺乏病病情监测抽样调查报告[R].(讨论稿)，1998.
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[6] WHO/UNICEF/ICCIDD.Recommended Iodine Levels in salt and guidelines for monitoring their adequacy and effectiveness[R].Geneva,1996.
[7] 陈祖培，阎玉芹.当前碘缺乏病防治工作中值得严肃关注的问题[J].中国地方病防治杂志，1997，12(5)：311.
[8] 陈祖培.碘缺乏病防治研究进展和当前存在的问题[J].中国地方病学杂志，1998，17(4)：263.
[9] 包日新，徐俊杰.砷铈反应采用25℃、25分钟对标准化的尿碘测定方法的实验室验证[J].中国地方病防治杂志，1998，13(4)：209.
[10] 张亚平，陈惠琴.氯酸温和消化尿碘测定法影响因素的研究[J].中华预防医学杂志，1997，31(3)：172.
[11] WHO/UNICEF/ICCIDD.Indicators fro assessing Iodine Deficency Disorders and their control through salt Iodization[R].Geneva,1994.36.
[12] Delange F.Indicators for assessing the prevalence of IDD and for the monitoring of preventive program[A].中国消除碘缺乏病战略[C].国际研讨会汇编，1998.95.
收稿日期1998-10-26, 百拇医药
单位：天津医科大学 内分泌研究所，天津 300070
关键词：
中国地方病学杂志990419 中图分类号 O613.44;R446.12;O652 [文献标识码] C [文章编号] 1000-4955(1999)04-0295-03
尿碘水平是监测及评价人群或个体碘营养状况的重要指标之一，尤其随着国家碘缺乏病防治工作的进展而逐渐消除碘缺乏病以后，甲肿率作为监测及评价人群或个体碘营养指标的灵敏性和实用性可能会逐渐下降，而尿碘指标则会变得更加实用。为保证尿碘指标的准确性和可比性，我国研制了尿碘测定的标准方法。《尿碘的砷铈催化分光光度测定方法》[1]。作为待颁布的国家行业标准自1996年下半年起已经在全国广泛应用，特别在1997年度完成的全国碘缺乏病病情监测中已定为全国统一的尿碘测定方法[2]。
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该标准方法在两年的应用中，大多数实验室包括省、市、县级实验室均反映良好，充分肯定了该方法的建立确实是立足于国产仪器、试剂的现状以及省、县级实验室的实际条件，适用于一般实验室可操作的好方法；并在实践中充分体会到了该方法检测灵敏度高、重现性好、结果准确、操作简便易掌握的主要特征。但是，某些专业人员在应用过程中仍遇到一些问题。作者针对所反映上来的有关共性问题，归纳成两个方面进行讨论，并提出我们的认识和建议，目的是进一步规范操作技术，正确评价人群或个体碘营养水平。仅供同道们参考。
1 标准化方法在应用过程中遇到的有关技术问题
1.1 关于尿碘检测范围：本方法碘标准曲线范围为0～300μg/L，有效尿碘检测范围5～300μg/L，已较国际推荐方法[3]的检测范围0～150μg/L拓宽了一倍。根据我国《研制生物样品监测检验方法指南》[4]的要求：在规定的样品体积内，一般应在浓度为0.3～3倍于生理剂量的范围内建立标准曲线。因考虑以尿碘浓度评价机体碘营养水平的生理切点值一般定为100μg/L，所以本方法建立时将碘浓度的检测上限定为300μg/L(即3倍于尿碘生理切点值)。但在1997年度的碘缺乏病病情监测工作中发现有相当比率的尿样因碘含量过高需要反复稀释后重新测定，给检测工作带来很大麻烦。分析原因主要由于近两年来我国儿童在普及碘盐的基础上，又普遍补服了碘油以及加碘保健品等综合影响的结果，致使儿童尿碘水平显著增高。1997年全国碘缺乏病监测结果显示已有18个省儿童尿碘中位数达到300μg/L以上，并有相当比率的尿样超出了800μg/L[5]。根据国际组织最新推荐以及国内外专家所期望的人群最佳尿碘水平应在100～200μg/L[6～8]，因此各地应加强盐碘监测，保证合格碘盐浓度，合理使用碘油及加碘食品，有望随着科学补碘的进展，人群尿碘水平终会达到最佳状态。那么从长远角度考虑，当前标准方法的检测范围0～300μg/L是完全能够满足人群最佳尿碘水平(100～200μg/L)检测用的，期待全国停用碘油一年后的1999年国家碘缺乏病监测结果将会得到验证。另外，本方法在应用时，对预计碘含量偏高的尿样可直接取样0.1ml,再加上0.1ml水补齐，可使检测范围拓展到600μg/L。
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需要说明的是，当前的尿碘测定方法仍属微量碘测定，对于那些碘含量特高，需要进行几十倍或几百倍稀释后才能进入本方法的检测范围的尿样一般不适合本方法测定，因为这种高倍数的反复稀释所造成结果的误差将是很大的。
1.2 氯酸溶液的配制问题：氯酸溶液配制不规范，常常是造成每批配制后的标准曲线变异很大、结果不准确的主要原因，也是基层实验室和缺乏经验的检测人员最易碰到的问题。由于氯酸配制质量可直接影响测定结果，所以应普遍引起重视。这里再次强调必严格按照方法要求进行氯酸配制。另外，最好保证氯酸钾试剂至少为分析纯，高氯酸为优级纯；建议各实验室应根据当地试剂的供应情况，相对固定购买某个厂家产品以保证试剂的纯度及其稳定性，同时要建立起本实验室配制氯酸的程序和经验，尽量减少每批配制之间的差异,以保证碘标准系列的0管和300μg/L管的吸光度值相对稳定。
1.3 每批样品消化需要设置空白和标准系列：由于尿样在消化过程中缺乏特异性终点指示，另外每批消化温度及时间很难控制一致，所以每批样品消化均需设置空白(0管)和标准系列。有的实验室在大批样本测定时，同时开放两台恒温消解仪或控温油浴箱，此时每台恒温装置应分别设置一套空白和标准系列，因两台仪器很难掌握消化条件完全一致。
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1.4 关于砷铈反应的温度与时间控制：基于我国南北方气温水平对实验室温度影响的实际情况，为使实验室在一年中的大多数时间内能按本方法进行尿碘检测，故选用砷铈反应温度为30℃，建议最好使用超级恒温水浴控温(30±0.2℃)。实验证明当反应温度>30℃时，由于反应体系中剩余氯酸等活性氯对砷铈反应的作用加剧而影响测定结果的准确度。为使标准曲线在0～300μg/L碘浓度范围内具有较好的线性关系、良好的斜率、以及保证吸光度值落在1.0～0.15之间，经实验证明砷铈反应时间应选择为15分钟才能达到上述要求。另外，本方法在不改变试剂浓度和用量情况下，也适合于砷铈反应温度为25℃，反应时间为25分钟条件下准确测定尿碘含量[9]，许多实验室在春冬季节可采用此反应条件测定尿碘。
这里需要强调的是，在操作时必须严格控制样品管与标准系列管的反应温度和时间的一致性。实验证明当样品管相对标准系列管反应温度差±1℃或反应时间差±1分钟时，可导致尿碘测定结果的误差高达10%以上[10]。
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1.5 关于测定尿比重筛选尿样问题：由于收集随意一次尿样测定尿碘含量常因被检者饮水、出汗等因素造成尿样稀释或浓缩而使尿碘浓度减低或增高，不能反应真实尿碘水平。为克服这一弊端，标准方法要求事先采用尿比重计(即尿比密计)测量尿样比重筛选比重在生理范围(即1.010～1.030)的尿样作为尿碘测定用，对比重<1.010，或>1.030的尿样应弃去不用，重新采尿。作者建议目前做到这点就可以了，尚无必要将尿碘浓度校正到标准尿比重(1.020)下的碘浓度。
在实际工作中，应根据其工作目的、精度要求、人力及物力等实际情况，灵活掌握尿样筛选问题。当进行人群碘营养监测时，在保证足够样本量的前提条件下，可不考虑尿样筛选问题，这要由防治监测人员根据工作目的和精度要求做出决定。在判断个体碘营养水平时，作者建议必须考虑尿样筛选问题，可采用收集晨尿的办法，一般会避免尿稀释或尿浓缩；如果收集随意一次尿样则要事先测量尿比重进行尿样筛选，以保证检测结果的可靠性。
1.6 关于尿样保存问题：经样品稳定性实验研究证明，尿样经冷冻以后，尿碘测定结果常不稳定或测定值多呈下降趋势。尿样置4℃冰箱保存效果最佳，可稳定1个月左右；若按尿样体积1%(V/V)加入浓盐酸，于4℃下可稳定2个月。现场收集尿样封盖后，可于常温下直接运回实验室置4℃冰箱保存，尽快测定。
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2 正确利用尿碘值评价人群或个体碘营养水平
根据尿碘检测数据正确评价人群或个体碘营养状况，必须考虑尿样的代表性(即样本数量和质量)，以及正确使用尿碘指标及其评价标准。
2.1 样本数量：用于人群碘营养监测与评价时必须保证足够的样本数量。目前全国统一病情监测采用PPS抽样法评价全省水平，推荐尿碘样本量为360份，可达到满意的可信区间及相对精度等。如果在较小范围内或对某一特定人群做点状抽查时，建议样本量至少50份以上(50～100)为宜。
用于判断个体碘营养水平，采集一次尿样很难作出正确判断，因为一次尿碘测定结果只能反应前一天的碘摄入水平。建议在采尿的前几天内避免食用含碘高的特殊饮食，要在通常饮食情况下收集尿样；有条件者最好间隔一定天数连续收集2～3次尿样进行测定，根据动态观察结果才能有把握做出正确判断。
2.2 尿样质量：保证尿样质量目前主要考虑两个方面，一是避免采集稀释或浓缩尿样，解决办法是事先测量尿比重筛选尿样或采集晨尿；二是保证尿样稳定，置4℃冰箱保存效果最佳，尽早测定，避免冷冻尿样。
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2.3 尿碘指标及其评价标准：监测及评价人群碘营养状况的尿碘指标主要有3项：(1)尿碘平均水平(以中位数表示之)；(2)尿碘<100μg/L的比率；(3)尿碘<50μg/L的比率。评价个体碘营养状况时，可根据尿碘测定结果进行判定，但应该参考连续几次尿碘测定结果的波动范围进行综合判断就更有把握。
对于尿碘指标的评价标准，国际组织已明确提出8～10岁学龄儿童的尿碘中位数应≥100μg/L，尿碘<100μg/L的比率应<50%，而<50μg/L的比率<20%[11]。ICCIDD最新推荐，儿童及成人的尿碘中位数范围应在100～200μg/L[12]。但对于孕妇及哺乳妇女的尿碘中位数水平我们建议应≥150μg/L，最佳中位数范围应在150～300μg/L。其他人群的尿碘水平标准可以参照学龄儿童标准。
如果一个人群的尿碘中位数≥100μg/L(孕妇及哺乳妇女应≥150μg/L),其中尿碘<100μg/L的比率小于50%，而<50μg/L的比率小于20%，则可判断该人群不存在碘缺乏。此时没有必要过份担心那些少数的低碘尿样，因为它们对整体评价没有实际意义，正因为尿碘水平受前一天碘摄入量的影响很大，在群体采样时必然存在一定数量的低碘尿样，但只要没有超出正常的分布频率就可以了，这当然要在足够的样本数量前提下。
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参考文献
[1] 阎玉芹，刘列钧，张亚平，等.尿碘的砷铈催化分光光度测定方法[J].中国地方病学杂志，1997，16(1)：37.
[2] 中华人民共和国卫生部.关于开展第二次碘缺乏病抽样监测的通知[R].卫地发[1997]第2号，1997.
[3] ICCIDD/UNICEF/WHO.Methods for measuring Iodine in urine[R].Neterlands,1993.18.
[4] 研制生物样品监测检验方法指南[S].中华人民共和国国家标准，1993.
[5] 中国地方病防治研究中心.全国碘缺乏病病情监测抽样调查报告[R].(讨论稿)，1998.
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[6] WHO/UNICEF/ICCIDD.Recommended Iodine Levels in salt and guidelines for monitoring their adequacy and effectiveness[R].Geneva,1996.
[7] 陈祖培，阎玉芹.当前碘缺乏病防治工作中值得严肃关注的问题[J].中国地方病防治杂志，1997，12(5)：311.
[8] 陈祖培.碘缺乏病防治研究进展和当前存在的问题[J].中国地方病学杂志，1998，17(4)：263.
[9] 包日新，徐俊杰.砷铈反应采用25℃、25分钟对标准化的尿碘测定方法的实验室验证[J].中国地方病防治杂志，1998，13(4)：209.
[10] 张亚平，陈惠琴.氯酸温和消化尿碘测定法影响因素的研究[J].中华预防医学杂志，1997，31(3)：172.
[11] WHO/UNICEF/ICCIDD.Indicators fro assessing Iodine Deficency Disorders and their control through salt Iodization[R].Geneva,1994.36.
[12] Delange F.Indicators for assessing the prevalence of IDD and for the monitoring of preventive program[A].中国消除碘缺乏病战略[C].国际研讨会汇编，1998.95.
收稿日期1998-10-26, 百拇医药