脑梗塞患者血清T细胞亚群动态变化及临床意义
作者：周盛年 迟兆富 刘黎青 陆伟 郭斌 张轶 俞桂珍
单位：周盛年 迟兆富 刘黎青 陆伟 郭斌 张轶(山东医科大学附属医院 山东济南250012)；俞桂珍(山东省荣军总医院)
关键词：
山东医药001907 我们观察了65例脑梗塞患者急性期、亚急性期及恢复期T淋巴细胞亚群的动态变化，旨在探讨T淋巴细胞亚群与脑梗塞发生发展的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 65例脑梗塞患者(下称观察组)，均符合1986年全国脑血管病会议制定的诊断标准，并经颅脑CT或MRI证实，其中男41例，女24例；年龄35～82岁，平均56.86±4.78岁。对照组为56例健康查体正常者，3周内未服用任何药物，亦未患感染性疾病，其中男35例，女21例；年龄38～85岁，平均56.69±4.92岁。两组性别、年龄基本匹配，P>0.05。
, http://www.100md.com
1.2 方法 两组均于上午8～9时空腹抽取肘静脉血5ml，其中3ml加肝素(500μl/ml)防凝，2ml自凝，分离血清。取防凝血3ml，加等量无Ca2+、Mg2+ Hanks液，充分混匀，叠加在Ficoll-Hypaque分层液上，离心(2000r/min)30分钟。用毛细管轻轻吸出单个核细胞层，用Hanks液洗涤3次，调细胞浓度至2×106/ml备用。兔抗小鼠r球蛋白抗体致敏的SPA菌体冻干试剂1支，加入PBS(pH＝7.4)1ml溶解，洗涤离心2次，去清留渣，加1∶16稀释的兔抗r球蛋白抗体，置37℃、30分钟，再用PBS洗涤3次，恢复原体积(5ml)，4℃保存备用。将2×106/ml单个核细胞悬液分装在4支试管中，分别加入OKT3(CD3)、OKT4(CD4)、OKT8(CD8)单克隆抗体和单克隆抗体稀释液(pH＝7.4，PBS，1%NaN3，4%灭活血清)100μl，充分混匀，放置4℃，30分钟。取出后用Hanks液洗涤2次，再各加100μl致敏的SPA菌体试剂，混匀，1000r离心5分钟；置4℃、30分钟后，再以500r离心4分钟，洗3次，最后留少许液体，加1%伊红10μl和10μl细胞悬液混合，湿片镜检。淋巴细胞吸附10个以上SPA菌体者为阳性花环，计数200个细胞，算出阳性花环的百分率。所用CD系列单克隆抗体购自北京医科大学微生物与免疫学教研室，淋巴细胞分离液系上海试剂二厂产品(比重1.077±0.002)。
, 百拇医药
2 结果
两组检测结果见表1。由表1可见，脑梗塞急性期、亚急性期CD4明显降低，而CD8明显升高；急性期、亚急性期和恢复期CD4/CD8明显降低，急性期出现比值倒置，与对照组比较有极显著差异，P<0.01。随着脑梗塞的恢复，CD4逐渐升高，CD8逐渐降低，CD4/CD8逐渐升高。恢复后期与对照组比较无显著差异。
表1 两组检测结果比较(
±s)
例数
CD3(%)
, 百拇医药
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
观察组
急性期
亚急性期
恢复期
恢复后期
对照组
65
63
63
62
, 百拇医药
56
60.4725±6.0917
60.5631±5.1329
60.8427±5.1527
60.8376±5.4138
61.0126±5.4033
30.3901±4.7682**
34.3826±3.9627*
35.7625±3.1024
36.1418±3.4756
, 百拇医药
37.1846±3.9124
33.8964±3.6219*
28.2963±2.9145
27.3549±3.2507
27.2154±3.5328
26.4721±2.8126
0.9248±0.2253**
1.2418±0.1927**
1.3275±0.1792*
1.3519±0.1526
, 百拇医药
1.4281±0.1921
注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
3 讨论
血液中的T细胞是机体免疫系统的重要组成部分，是组织免疫反应的参与者和体液免疫反应的免疫调节因素。T细胞按其功能和表面标志可分为四个主要亚群， 即诱导―辅助性T细胞(Ti/Th)、杀伤性T细胞(Tc)、抑制性T细胞(Ts)及迟发型超敏反应性T细胞。CD3是所有T细胞表面的共同标志，CD4是Ti/Th的表面标志，而CD8存在于Ts/Tc细胞表面。免疫应答发生时，静止的Th细胞在识别由细胞递呈的抗原后，细胞表面即表达白细胞介素-1受体(IL-IR)，成为诱导性T细胞(Ti)，并接受巨噬细胞产生的IL-1信号而活化，随后表达白细胞介素-2受体(IL-2R)，成为活化Th细胞，当其与IL-2(自分泌或旁分泌)相结合后即发生母细胞化而形成效应Th-细胞，并分泌IL-2、IL-4、IFN-γ等一系列细胞因子。细胞因子作用于T细胞，使T细胞不断增殖分化和成熟，增殖的T细胞最终分化为致敏的T细胞效应细胞(如杀伤性T细胞)和迟发型超敏反应性T细胞，并产生免疫应答。此外，Th还辅助B细胞产生抗体，促进体液免疫反应。而Ts细胞一旦被激活，可反过来对以上免疫反应发挥抑制作用。
, 百拇医药
近年来的研究表明，机体存在着神经―内分泌―免疫网络[1]，神经系统的下丘脑释放促皮质释放因子，促使垂体释放促肾上腺皮质激素，促肾上腺皮质激素又促进肾上腺释放肾上腺皮质类固醇。肾上腺皮质类固醇作用于淋巴细胞产生免疫抑制[2]。此外，多种神经递质(如乙酰胆碱)和神经肽(如内啡肽、生长抑素等)也能与淋巴细胞、单核/巨噬细胞结合而影响其功能。另一方面，免疫系统也可以影响神经内分泌系统的功能。实验证明，大鼠的免疫反应可促使大鼠前下丘脑和视前区放电频率显著增高，淋巴细胞在体外也能产生ACTH，ACTH作用于肾上腺皮质而不依赖经典的神经调节轴。此外，淋巴细胞分泌的细胞因子IL-1、INF、IFN-γ等能诱导下丘脑合成释放促皮质醇释放因子(CRF)，诱导垂体合成释放ACTH。
本文结果显示，脑梗塞急性期、亚急性期CD4明显下降，CD8明显升高，两期CD4/CD8亦明显降低。其Th百分比降低和Ts细胞活性低下，可能是导致免疫应答紊乱的重要原因。由于CD8增高及CD4/CD8下降，Ts活性低下、体液免疫亢进，故增高的CD8细胞大多为Tc细胞。关于CD4降低在脑血管病中的作用及临床意义可能有以下几个方面：①增加感染发生机会。血液中辅助性T细胞减少可降低T细胞增殖分化的能力，减少细胞免疫应答的发生，同时由于辅助性T细胞在抗体产生中也起着辅助和诱导作用，故辅助性T细胞的减少必然会影响体液免疫应答。因此，患者免疫状况低下，易于发生炎症感染并发症。②可能有助于减轻脑水肿。脑水肿的发生与缺血再灌注时白细胞三烯(白三烯)增加有关，辅助性T细胞减少可降低白三烯生成。动物实验表明，鼠MCA梗塞时，应用辐射可以使之全身免疫抑制，从而减轻脑水肿。③加重血管壁损伤。辅助性T细胞降低使脑血管病时产生的大量抗原物质堆积，这些物质可通过旁路激活途径激活补体系统，激活的补体系统可以诱发和扩大血管壁的炎症反应，促进T细胞向血管平滑肌细胞趋化和粘附，加重血管壁损伤[3]。④影响神经内分泌功能。辅助性T细胞分泌细胞因子IL-1、TNF等均参与下丘脑的功能调节，影响神经递质和神经肽的释放，辅助性T细胞减少会加重脑血管病时的神经内分泌紊乱。⑤参与高血压的维持。研究表明，免疫低下在高血压的形成和进展中起着重要作用。有人对自发性高血压大鼠进行观察，发现其T细胞降低存在着免疫抑制现象[4]，而如果给大鼠进行胸腺移植，使其T细胞数量升至正常，则血压可随之恢复至正常范围。
, 百拇医药
综 上所述，T淋巴细胞亚群在脑梗塞的发病过程中呈动态变化；其血清含量与患者预后有一定关系。但这些变化的因果关系如何，尚有待于进一步研究。
山东省科委立项资助课题(编号：941175851)
参考文献
1，Fieier S， Neuroendocrine-immunenetwork. Florida. CRC Press.
1990.
2，Spencer RL.Corticosterone tegulation of type Ⅱ adrenal steroid receptorsin brain，pituitary，and immune tissue.Brain Res，1991，549.236.
3，Zielak D.Lmmune mechamsms in experimental and essentral hypertension Am Physiology，1991，260：R459.
4，Talecichi.N.Immunological depression in spowtancously hypertensive rats.Clin Exp Immund，1980，40：120.
(2000-06-10收稿), http://www.100md.com
单位：周盛年 迟兆富 刘黎青 陆伟 郭斌 张轶(山东医科大学附属医院 山东济南250012)；俞桂珍(山东省荣军总医院)
关键词：
山东医药001907 我们观察了65例脑梗塞患者急性期、亚急性期及恢复期T淋巴细胞亚群的动态变化，旨在探讨T淋巴细胞亚群与脑梗塞发生发展的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 65例脑梗塞患者(下称观察组)，均符合1986年全国脑血管病会议制定的诊断标准，并经颅脑CT或MRI证实，其中男41例，女24例；年龄35～82岁，平均56.86±4.78岁。对照组为56例健康查体正常者，3周内未服用任何药物，亦未患感染性疾病，其中男35例，女21例；年龄38～85岁，平均56.69±4.92岁。两组性别、年龄基本匹配，P>0.05。
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1.2 方法 两组均于上午8～9时空腹抽取肘静脉血5ml，其中3ml加肝素(500μl/ml)防凝，2ml自凝，分离血清。取防凝血3ml，加等量无Ca2+、Mg2+ Hanks液，充分混匀，叠加在Ficoll-Hypaque分层液上，离心(2000r/min)30分钟。用毛细管轻轻吸出单个核细胞层，用Hanks液洗涤3次，调细胞浓度至2×106/ml备用。兔抗小鼠r球蛋白抗体致敏的SPA菌体冻干试剂1支，加入PBS(pH＝7.4)1ml溶解，洗涤离心2次，去清留渣，加1∶16稀释的兔抗r球蛋白抗体，置37℃、30分钟，再用PBS洗涤3次，恢复原体积(5ml)，4℃保存备用。将2×106/ml单个核细胞悬液分装在4支试管中，分别加入OKT3(CD3)、OKT4(CD4)、OKT8(CD8)单克隆抗体和单克隆抗体稀释液(pH＝7.4，PBS，1%NaN3，4%灭活血清)100μl，充分混匀，放置4℃，30分钟。取出后用Hanks液洗涤2次，再各加100μl致敏的SPA菌体试剂，混匀，1000r离心5分钟；置4℃、30分钟后，再以500r离心4分钟，洗3次，最后留少许液体，加1%伊红10μl和10μl细胞悬液混合，湿片镜检。淋巴细胞吸附10个以上SPA菌体者为阳性花环，计数200个细胞，算出阳性花环的百分率。所用CD系列单克隆抗体购自北京医科大学微生物与免疫学教研室，淋巴细胞分离液系上海试剂二厂产品(比重1.077±0.002)。
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2 结果
两组检测结果见表1。由表1可见，脑梗塞急性期、亚急性期CD4明显降低，而CD8明显升高；急性期、亚急性期和恢复期CD4/CD8明显降低，急性期出现比值倒置，与对照组比较有极显著差异，P<0.01。随着脑梗塞的恢复，CD4逐渐升高，CD8逐渐降低，CD4/CD8逐渐升高。恢复后期与对照组比较无显著差异。
表1 两组检测结果比较(
±s)例数
CD3(%)
, 百拇医药
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
观察组
急性期
亚急性期
恢复期
恢复后期
对照组
65
63
63
62
, 百拇医药
56
60.4725±6.0917
60.5631±5.1329
60.8427±5.1527
60.8376±5.4138
61.0126±5.4033
30.3901±4.7682**
34.3826±3.9627*
35.7625±3.1024
36.1418±3.4756
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37.1846±3.9124
33.8964±3.6219*
28.2963±2.9145
27.3549±3.2507
27.2154±3.5328
26.4721±2.8126
0.9248±0.2253**
1.2418±0.1927**
1.3275±0.1792*
1.3519±0.1526
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1.4281±0.1921
注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
3 讨论
血液中的T细胞是机体免疫系统的重要组成部分，是组织免疫反应的参与者和体液免疫反应的免疫调节因素。T细胞按其功能和表面标志可分为四个主要亚群， 即诱导―辅助性T细胞(Ti/Th)、杀伤性T细胞(Tc)、抑制性T细胞(Ts)及迟发型超敏反应性T细胞。CD3是所有T细胞表面的共同标志，CD4是Ti/Th的表面标志，而CD8存在于Ts/Tc细胞表面。免疫应答发生时，静止的Th细胞在识别由细胞递呈的抗原后，细胞表面即表达白细胞介素-1受体(IL-IR)，成为诱导性T细胞(Ti)，并接受巨噬细胞产生的IL-1信号而活化，随后表达白细胞介素-2受体(IL-2R)，成为活化Th细胞，当其与IL-2(自分泌或旁分泌)相结合后即发生母细胞化而形成效应Th-细胞，并分泌IL-2、IL-4、IFN-γ等一系列细胞因子。细胞因子作用于T细胞，使T细胞不断增殖分化和成熟，增殖的T细胞最终分化为致敏的T细胞效应细胞(如杀伤性T细胞)和迟发型超敏反应性T细胞，并产生免疫应答。此外，Th还辅助B细胞产生抗体，促进体液免疫反应。而Ts细胞一旦被激活，可反过来对以上免疫反应发挥抑制作用。
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近年来的研究表明，机体存在着神经―内分泌―免疫网络[1]，神经系统的下丘脑释放促皮质释放因子，促使垂体释放促肾上腺皮质激素，促肾上腺皮质激素又促进肾上腺释放肾上腺皮质类固醇。肾上腺皮质类固醇作用于淋巴细胞产生免疫抑制[2]。此外，多种神经递质(如乙酰胆碱)和神经肽(如内啡肽、生长抑素等)也能与淋巴细胞、单核/巨噬细胞结合而影响其功能。另一方面，免疫系统也可以影响神经内分泌系统的功能。实验证明，大鼠的免疫反应可促使大鼠前下丘脑和视前区放电频率显著增高，淋巴细胞在体外也能产生ACTH，ACTH作用于肾上腺皮质而不依赖经典的神经调节轴。此外，淋巴细胞分泌的细胞因子IL-1、INF、IFN-γ等能诱导下丘脑合成释放促皮质醇释放因子(CRF)，诱导垂体合成释放ACTH。
本文结果显示，脑梗塞急性期、亚急性期CD4明显下降，CD8明显升高，两期CD4/CD8亦明显降低。其Th百分比降低和Ts细胞活性低下，可能是导致免疫应答紊乱的重要原因。由于CD8增高及CD4/CD8下降，Ts活性低下、体液免疫亢进，故增高的CD8细胞大多为Tc细胞。关于CD4降低在脑血管病中的作用及临床意义可能有以下几个方面：①增加感染发生机会。血液中辅助性T细胞减少可降低T细胞增殖分化的能力，减少细胞免疫应答的发生，同时由于辅助性T细胞在抗体产生中也起着辅助和诱导作用，故辅助性T细胞的减少必然会影响体液免疫应答。因此，患者免疫状况低下，易于发生炎症感染并发症。②可能有助于减轻脑水肿。脑水肿的发生与缺血再灌注时白细胞三烯(白三烯)增加有关，辅助性T细胞减少可降低白三烯生成。动物实验表明，鼠MCA梗塞时，应用辐射可以使之全身免疫抑制，从而减轻脑水肿。③加重血管壁损伤。辅助性T细胞降低使脑血管病时产生的大量抗原物质堆积，这些物质可通过旁路激活途径激活补体系统，激活的补体系统可以诱发和扩大血管壁的炎症反应，促进T细胞向血管平滑肌细胞趋化和粘附，加重血管壁损伤[3]。④影响神经内分泌功能。辅助性T细胞分泌细胞因子IL-1、TNF等均参与下丘脑的功能调节，影响神经递质和神经肽的释放，辅助性T细胞减少会加重脑血管病时的神经内分泌紊乱。⑤参与高血压的维持。研究表明，免疫低下在高血压的形成和进展中起着重要作用。有人对自发性高血压大鼠进行观察，发现其T细胞降低存在着免疫抑制现象[4]，而如果给大鼠进行胸腺移植，使其T细胞数量升至正常，则血压可随之恢复至正常范围。
, 百拇医药
综 上所述，T淋巴细胞亚群在脑梗塞的发病过程中呈动态变化；其血清含量与患者预后有一定关系。但这些变化的因果关系如何，尚有待于进一步研究。
山东省科委立项资助课题(编号：941175851)
参考文献
1，Fieier S， Neuroendocrine-immunenetwork. Florida. CRC Press.
1990.
2，Spencer RL.Corticosterone tegulation of type Ⅱ adrenal steroid receptorsin brain，pituitary，and immune tissue.Brain Res，1991，549.236.
3，Zielak D.Lmmune mechamsms in experimental and essentral hypertension Am Physiology，1991，260：R459.
4，Talecichi.N.Immunological depression in spowtancously hypertensive rats.Clin Exp Immund，1980，40：120.
(2000-06-10收稿), http://www.100md.com