不饱和脂肪酸对02和HLF细胞增殖及合成细胞外基质的影响
作者：范建高1 曾民德2 洪 健3 李继强2 邱德凯2
单位：1上海市第一人民医院消化科 上海市 200080；2上海市消化疾病研究所 上海市 200001；3上海市免疫学研究所 上海市 200025
关键词：脂肪酸类，不饱和/代谢；肝/细胞学；成纤维细胞；细胞外基质；肝硬化/病因学
华人消化杂志980614.htm Effects of free unsaturated fatty acids on proliferation of L-02 and HLF cell lines and synthesis of extracellular matrix
FAN Jian-Gao1, ZENG Min-De2, HONG Jian3, LI Ji-Qiang2 and QIU De-Kai2
, 百拇医药
1Shanghai First People＇s Hospital, Shanghai 200080, China
2Shanghai Institute of Digestive Diseases, Shanghai 200001, China
3Shanghai Institute of Immunology, Shanghai 200025, China
Subject headings fatty acidi, unsaturated/metabolism; liver/cytology; fibroblasts; extracellular matrix; liver cirrhosis/etiology
Abstract
, 百拇医药
AIM To explore the influences of free unsaturated fatty acids on proliferation of hepatocytes and fibroblasts and synthesis of extracellular matrix.
METHODS The effects of oleic acid, linoleic acid, arachidonic acid on proliferation of normal adult hepatocyte line (L-02) and human lung fibroblasts (HLF) and synthesis of collagen and hyaluronic acid (HA) were observed by means of MTT, the incorporation of 3H-proline and radioimmunoassay, respectively.
, 百拇医药
RESULTS Oleic acid, linoleic acid influenced the proliferation of L-02 and/or HLF cell lines, and promoted the synthesis of collagen and HA. However, arachidonic acid did not influence the ability of extra cellular matrix synthesis of L-02 and HLF cells.
CONCLUSION Excess of free polyunsaturated fatty acid in the liver might promote the initiation and development of liver fibrosis.
中国图书资料分类号 R575.2
, 百拇医药
摘 要
目的 探讨不饱和脂肪酸对肝细胞和成纤维细胞增殖及合成细胞外基质的影响.
方法 以MTT法、透明质酸(HA)RIA法及3H-脯氨酸掺入法，观察4种不同浓度的油酸、亚油酸和花生四烯酸对无血清培养正常成人肝细胞(L-02)、人胚肺成纤维细胞(HLF)增殖及合成细胞外基质(ECM)的影响.
结果 油酸、亚油酸可影响HLF细胞和(或)L-02细胞增殖，并促进其合成胶原和HA，而花生四烯酸对其增殖及合成ECM的影响不明显.
结论 肝内游离的不饱和脂肪酸增多可促进肝纤维化的发生和发展.
0 引言
大量研究资料表明，游离脂肪酸，特别是不饱和脂肪酸与酒精性和非酒精性脂肪性肝炎的发生和发展密切相关[1-3]. 然而，游离脂肪酸在脂肪性肝炎形成中的具体作用及其机制尚未明确. 为此，我们观察油酸、亚油酸和花生四烯酸等不饱和脂肪酸对人肝细胞和成纤维细胞生物学活性的影响，从细胞水平探讨不饱和脂肪酸对肝纤维化形成的影响.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 正常成人肝细胞株(L-02)和人胚肺成纤维细胞株(HLF)由中国科学院上海细胞研究所提供. 油酸、亚油酸和花生四烯酸均为Sigma公司产品；RPMI-1640培养基为Gibco公司产品；四甲基偶氮唑蓝(MTT)为Fluka产品；二甲基亚砜(DMSO)为Merck公司产品；PPO为BDH进口分装，POPOP为上海试剂一厂产品；3H-L-脯氨酸为中国原子能研究所产品；透明质酸(HA)放免测定试剂盒为上海海军医学研究所产品. EL309酶标阅读仪为美国产品，YSJ-75液闪读数仪为中国科学院原子核研究所产品，SN-682放射免疫γ计数仪为中科院上海原子核研究所日环仪器厂产品.
1.2 方法 处理因素：对照组加无血清等浓度的无水乙醇RPMI-1640培养液；油酸、亚油酸和花生四烯酸组分别加入终浓度为2.5×10-4mol/L(A)，5×10-4mol/L(B)，1×10-3mol/L(C)，2×10-3mol/L(D)的油酸、亚油酸和花生四烯酸，临用前均用无水乙醇配制成2×10-3mol/L的工作液. 细胞增殖率的测定：取对数生长期的L-02细胞和HLF细胞，分别用含100mL/L小牛血清的1640培养液调整细胞浓度为7.5×107/L和1×107/L，以每孔0.2mL分别加入96孔的Nunc培养板内，置37℃，50mL/L CO2 培养箱内培养24h后，换不含小牛血清的1640培养液，分别加入不同种类及浓度的处理因素，每剂量组设3复孔，每孔加入等容积的处理因素. 48h后，每孔加入5g/L的MTT 10μL，继续培养4h后，倒掉培养液，每孔加入DMSO 50μL，30min后在酶标阅读仪上测定540nm处A(OD值). 细胞合成胶原蛋白的测定：如上所述，两株细胞在加入不同处理因素后，每孔同时加入3H-L-脯氨酸37kBq，掺入24h. 然后将培养液移出，加入1mol/L的氢氧化钾50μL. 15min后再加入200g/L三氯乙酸50μL，10min左右见Nunc孔内有蛋白析出，然后用负压12孔多头收集器收集于49号玻璃纤维膜上，用生理盐水洗涤，再用乙醇冲洗，在室温干燥后，置入闪烁瓶内，加入2mL闪烁液，12h后在液闪读数仪上测定样品的放射性(cpm值). 细胞分泌HA含量的测定：如上所述，两株细胞加入不同处理因素后，继续培养48h，取培养上清液，每个样品作双复管，按试剂盒操作步骤在放射免疫γ计数仪测定HA含量(μg/L)，以HA标准浓度为横坐标，以相应的B/B0为纵坐标，绘制标准曲线，据其计算样品HA含量，取其均值.
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 不饱和脂肪酸对L-02细胞增殖和合成ECM的影响 油酸、亚油酸和花生四烯酸均可促进L-02细胞增殖，且呈浓度依赖性(表1). 油酸、亚油酸在B，C，D浓度时，花生四烯酸在C，D浓度时可促进L-02细胞3H-脯氨酸的掺入率及HA的合成，其中以亚油酸的作用最强.
2.2 不饱和脂肪酸对HLF细胞增殖和合成ECM的影响 油酸、亚油酸对HLF细胞增殖无明显影响，花生四烯酸仅在B和C 2个浓度时可促进HLF细胞增殖，且无浓度依赖关系(表2). 油酸组(B，C，D浓度)、亚油酸组(C，D浓度)可显著促进HLF细胞3H-脯氨酸的掺入率及HA的合成，并呈浓度依赖性，花生四烯酸对HLF细胞3H-脯氨酸的掺入率及HA的合成无明显影响.表1 多不饱和脂肪酸对L-02细胞生物学活性的影响(n=3) 组别
浓度
, http://www.100md.com
mmol/L
A值
min-1
HA(mg/L)
对照组
0.279±0.065
3092±976
38.9±13.2
油酸组
0.25
0.316±0.152
6153±4132
, http://www.100md.com
53.2±25.4
0.50
0.458±0.097a
14092±3177b
76.4±11.7b
1.00
0.742±0.085b
15783±2844b
89.1±17.6b
2.00
, http://www.100md.com
0.754±0.037b
17229±8877b
94.2±15.9b
亚油酸组
0.25
0.211±0.067
2979±660
35.2±8.30
0.50
0.531±0.068b
11398±4478b
, http://www.100md.com
63.5±9.50b
1.00
0.556±0.016b
20361±1602b
97.6±18.3b
2.00
0.657±0.027b
23193±4196b
108.7±21.5b
化生四
, 百拇医药
0.25
0.744±0.076b
2407±574
31.2±8.7
烯酸组
0.50
0.803±0.005b
3126±678
41.1±9.5
1.00
0.85±0.187b
, 百拇医药
6653±915b
53.6±18.2a
2.00
0.942±0.283b
9253±2146b
81.2±15.4b
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
表2 多不饱和脂肪酸对HLF细胞生物学活性的影响(n=3) 组别
浓度
, 百拇医药
mmol/L
A值
min-1
HA(mg/L)
对照组
0.236±0.062
2196±594
27.1±8.9
油酸组
0.25
0.191±0.014
1431±413
, 百拇医药
17.3±10.2
0.50
0.236±0.065
3659±752a
43.2±9.4a
1.00
0.257±0.021
5264±284b
57.6±13.1b
2.00
0.264±0.022
, 百拇医药
6020±532b
73.4±14.8b
亚油酸组
0.25
0.131±0.067
1921±257
19.2±8.10
0.50
0.360±0.095
2783±794
34.5±10.8
, http://www.100md.com
1.00
0.275±0.072
3327±382a
41.3±10.0a
2.00
0.198±0.052
7816±1022b
79.3±15.4b
化生四
0.25
0.367±0.115
, 百拇医药
2044±568
28.6±11.3
烯酸组
0.50
0.748±0.042b
2148±271
27.5±10.7
1.00
0.667±0.079b
2374±275
32.4±8.7
, 百拇医药 2.00
0.271±0.009
3072±2800
35.2±13.9
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
3 讨论
氧化磷酸化和脂肪酸β氧化受损在脂肪性肝疾患的发生中起重要作用[4]. 临床上，从脂肪肝至脂肪性肝硬变的转化过程中，脂肪性肝炎是一个重要的中间阶段，脂肪肝的严重程度未必与肥胖程度以及高脂血症和高血糖相关，而可能与导致肝细胞损伤和纤维化的重症糖尿病、酗酒及禁食饥饿、体重骤减等有关[1-3]. 在此状态下，脂肪组织释放亚麻酸、 亚油酸等游离的多不饱和脂肪酸(USFA)增多，致血液和(或)肝细胞内USFA含量升高，且USFA常优于饱和脂肪酸(SFA)合成磷酯和甘油三酯，从而影响肝细胞内蓄积的中性脂肪的性质及其过氧应激脂质过氧化损伤的易感性[5]. 动物实验研究显示，富含油酸、亚油酸等USFA的玉米油和鱼油通过激活肝内脂质过氧化反应，促进酒精、四氯化碳引起的大鼠肝损伤，而富含棕榈酸等SFA的棕榈油则通过减少环氧合酶和肿瘤坏死因子α的含量及抗脂质过氧化，可逆转酒精所致的肝损伤[6，7]. 并且，SFA可抑制肝组织对USFA的摄取[5]. 提示游离脂肪酸的组成及其含量与酒精性和非酒精性脂肪性肝炎的发生发展密切相关[1-3]. 然而，游离脂肪酸在脂肪性肝炎发病中的具体作用至今尚未明确，各种脂肪酸对体外培养肝细胞和成纤维细胞生物学活性有无影响亦未见文献报道.
, 百拇医药
结果表明，油酸、亚油酸可促进L-02细胞增殖和合成ECM，并呈浓度-效应关系；油酸、亚油酸对HLF细胞增殖无明显促进作用，在低浓度时对其胶原蛋白和HA的合成无明显影响，在中、高浓度时则有明显促进作用；提示肝组织内游离的油酸、亚油酸等USFA增多可通过促进产基质细胞(主要是肝细胞)增殖和(或)合成ECM，参与脂肪肝纤维化的形成. 本研究中花生四烯酸虽能促进L-02和HLF细胞的增殖，但对两株细胞ECM的合成并无显著影响，其机制尚待阐明. 我们应用乙醇作为脂肪酸的溶剂可能会对实验结果产生一定影响，有必要进一步研究无乙醇状态下脂肪酸对产ECM细胞的影响，但本实验亦提示USFA可能通过加强酒精等损肝因素的脂质过氧化反应，促进产基质细胞合成ECM，从而促进肝纤维化的发生和发展[1，8].
范建高，1966-05-15生，江苏省兴化县人，汉族. 医学博士、消化科主治医师，主要从事慢性肝炎、酒精性肝病及脂肪肝的基础和临床研究，发表论文36篇，综述及专题笔谈16篇，译文10篇，主编及参与《肝病基础理论与实践》等8部专著的编写.
, 百拇医药
通讯作者 范建高，200080，第一人民医院消化科，上海市武进路85号.
Correspondence to:FAN Jian-Gao, Shanghai First People＇s Hospital, 85 Wujinlu, Shanghai 200080, China
Tel. +86*21*63240090-3141
收稿日期 1997-12-18 修回日期 1998-03-18
4 参考文献
1 范建高，李继强，曾民德. 脂肪肝与肝纤维化的关系及其机制. 国外医学消化分册，1997；17(2)：84-86
2 寺本民生. 肥胖与脂肪肝. 日本医学介绍，1995；16(10)：440-442
, 百拇医药
3 Sheth SG, Gordon FD, Chopra S. Nonalcoholic steatohepatitis. Ann Intern Med, 1997;26(2):137-145
4 Deschamps D, Debeco V, Fisch C, Fromenty B, Guillouzo A, Pessayre D. Inhibition by perhexiline of oxidative phosphorylation and the β-oxidation of fatty acids: possible role in pseudoalcoholic liver lesions. Hepatology, 1994;19(4):948-961
5 Sorrentino D, Stump DD, Ness KV, Simard A, Schwab AJ, Zhou SL et al. Oleate uptake by isolated hepatocytes and the perfused rat liver is competitively inhibited by palmitate. Am J Physiol, 1996;270(G):385-391
, 百拇医药
6 Nanji AA, Sadrzadeh SM, Yang EK, Fogt F, Meydani M, Dannenberg AJ. Dietary saturated fatty acids: a novel treatment for alcoholic liver disease. Gastroenterology, 1995;109(2):547-534
7 Nanji AA, Zakim D, Rahemtulla A, Daly T, Miao L, Zhao S et al. Didtary saturated fatty acids down-regulate cyclooxygenase-2 and tumor necrosis factor alpha and reverse fibrosis in alcohol-induced liver disease in the rat. Hepatology, 1997;26(6):1538-1545
8 范建高，曾民德，李继强，邱德凯，李超群，李蓉蓉 et al. 肝内脂肪和脂质过氧化与肝纤维化关系的实验研究. 中华内科杂志， 1997；36(12)：808-811, 百拇医药(范建高1 曾民德2 洪 健3 李继强2 邱德凯2)
单位：1上海市第一人民医院消化科 上海市 200080；2上海市消化疾病研究所 上海市 200001；3上海市免疫学研究所 上海市 200025
关键词：脂肪酸类，不饱和/代谢；肝/细胞学；成纤维细胞；细胞外基质；肝硬化/病因学
华人消化杂志980614.htm Effects of free unsaturated fatty acids on proliferation of L-02 and HLF cell lines and synthesis of extracellular matrix
FAN Jian-Gao1, ZENG Min-De2, HONG Jian3, LI Ji-Qiang2 and QIU De-Kai2
, 百拇医药
1Shanghai First People＇s Hospital, Shanghai 200080, China
2Shanghai Institute of Digestive Diseases, Shanghai 200001, China
3Shanghai Institute of Immunology, Shanghai 200025, China
Subject headings fatty acidi, unsaturated/metabolism; liver/cytology; fibroblasts; extracellular matrix; liver cirrhosis/etiology
Abstract
, 百拇医药
AIM To explore the influences of free unsaturated fatty acids on proliferation of hepatocytes and fibroblasts and synthesis of extracellular matrix.
METHODS The effects of oleic acid, linoleic acid, arachidonic acid on proliferation of normal adult hepatocyte line (L-02) and human lung fibroblasts (HLF) and synthesis of collagen and hyaluronic acid (HA) were observed by means of MTT, the incorporation of 3H-proline and radioimmunoassay, respectively.
, 百拇医药
RESULTS Oleic acid, linoleic acid influenced the proliferation of L-02 and/or HLF cell lines, and promoted the synthesis of collagen and HA. However, arachidonic acid did not influence the ability of extra cellular matrix synthesis of L-02 and HLF cells.
CONCLUSION Excess of free polyunsaturated fatty acid in the liver might promote the initiation and development of liver fibrosis.
中国图书资料分类号 R575.2
, 百拇医药
摘 要
目的 探讨不饱和脂肪酸对肝细胞和成纤维细胞增殖及合成细胞外基质的影响.
方法 以MTT法、透明质酸(HA)RIA法及3H-脯氨酸掺入法，观察4种不同浓度的油酸、亚油酸和花生四烯酸对无血清培养正常成人肝细胞(L-02)、人胚肺成纤维细胞(HLF)增殖及合成细胞外基质(ECM)的影响.
结果 油酸、亚油酸可影响HLF细胞和(或)L-02细胞增殖，并促进其合成胶原和HA，而花生四烯酸对其增殖及合成ECM的影响不明显.
结论 肝内游离的不饱和脂肪酸增多可促进肝纤维化的发生和发展.
0 引言
大量研究资料表明，游离脂肪酸，特别是不饱和脂肪酸与酒精性和非酒精性脂肪性肝炎的发生和发展密切相关[1-3]. 然而，游离脂肪酸在脂肪性肝炎形成中的具体作用及其机制尚未明确. 为此，我们观察油酸、亚油酸和花生四烯酸等不饱和脂肪酸对人肝细胞和成纤维细胞生物学活性的影响，从细胞水平探讨不饱和脂肪酸对肝纤维化形成的影响.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 正常成人肝细胞株(L-02)和人胚肺成纤维细胞株(HLF)由中国科学院上海细胞研究所提供. 油酸、亚油酸和花生四烯酸均为Sigma公司产品；RPMI-1640培养基为Gibco公司产品；四甲基偶氮唑蓝(MTT)为Fluka产品；二甲基亚砜(DMSO)为Merck公司产品；PPO为BDH进口分装，POPOP为上海试剂一厂产品；3H-L-脯氨酸为中国原子能研究所产品；透明质酸(HA)放免测定试剂盒为上海海军医学研究所产品. EL309酶标阅读仪为美国产品，YSJ-75液闪读数仪为中国科学院原子核研究所产品，SN-682放射免疫γ计数仪为中科院上海原子核研究所日环仪器厂产品.
1.2 方法 处理因素：对照组加无血清等浓度的无水乙醇RPMI-1640培养液；油酸、亚油酸和花生四烯酸组分别加入终浓度为2.5×10-4mol/L(A)，5×10-4mol/L(B)，1×10-3mol/L(C)，2×10-3mol/L(D)的油酸、亚油酸和花生四烯酸，临用前均用无水乙醇配制成2×10-3mol/L的工作液. 细胞增殖率的测定：取对数生长期的L-02细胞和HLF细胞，分别用含100mL/L小牛血清的1640培养液调整细胞浓度为7.5×107/L和1×107/L，以每孔0.2mL分别加入96孔的Nunc培养板内，置37℃，50mL/L CO2 培养箱内培养24h后，换不含小牛血清的1640培养液，分别加入不同种类及浓度的处理因素，每剂量组设3复孔，每孔加入等容积的处理因素. 48h后，每孔加入5g/L的MTT 10μL，继续培养4h后，倒掉培养液，每孔加入DMSO 50μL，30min后在酶标阅读仪上测定540nm处A(OD值). 细胞合成胶原蛋白的测定：如上所述，两株细胞在加入不同处理因素后，每孔同时加入3H-L-脯氨酸37kBq，掺入24h. 然后将培养液移出，加入1mol/L的氢氧化钾50μL. 15min后再加入200g/L三氯乙酸50μL，10min左右见Nunc孔内有蛋白析出，然后用负压12孔多头收集器收集于49号玻璃纤维膜上，用生理盐水洗涤，再用乙醇冲洗，在室温干燥后，置入闪烁瓶内，加入2mL闪烁液，12h后在液闪读数仪上测定样品的放射性(cpm值). 细胞分泌HA含量的测定：如上所述，两株细胞加入不同处理因素后，继续培养48h，取培养上清液，每个样品作双复管，按试剂盒操作步骤在放射免疫γ计数仪测定HA含量(μg/L)，以HA标准浓度为横坐标，以相应的B/B0为纵坐标，绘制标准曲线，据其计算样品HA含量，取其均值.
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2 结果
2.1 不饱和脂肪酸对L-02细胞增殖和合成ECM的影响 油酸、亚油酸和花生四烯酸均可促进L-02细胞增殖，且呈浓度依赖性(表1). 油酸、亚油酸在B，C，D浓度时，花生四烯酸在C，D浓度时可促进L-02细胞3H-脯氨酸的掺入率及HA的合成，其中以亚油酸的作用最强.
2.2 不饱和脂肪酸对HLF细胞增殖和合成ECM的影响 油酸、亚油酸对HLF细胞增殖无明显影响，花生四烯酸仅在B和C 2个浓度时可促进HLF细胞增殖，且无浓度依赖关系(表2). 油酸组(B，C，D浓度)、亚油酸组(C，D浓度)可显著促进HLF细胞3H-脯氨酸的掺入率及HA的合成，并呈浓度依赖性，花生四烯酸对HLF细胞3H-脯氨酸的掺入率及HA的合成无明显影响.表1 多不饱和脂肪酸对L-02细胞生物学活性的影响(n=3) 组别
浓度
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mmol/L
A值
min-1
HA(mg/L)
对照组
0.279±0.065
3092±976
38.9±13.2
油酸组
0.25
0.316±0.152
6153±4132
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53.2±25.4
0.50
0.458±0.097a
14092±3177b
76.4±11.7b
1.00
0.742±0.085b
15783±2844b
89.1±17.6b
2.00
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0.754±0.037b
17229±8877b
94.2±15.9b
亚油酸组
0.25
0.211±0.067
2979±660
35.2±8.30
0.50
0.531±0.068b
11398±4478b
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63.5±9.50b
1.00
0.556±0.016b
20361±1602b
97.6±18.3b
2.00
0.657±0.027b
23193±4196b
108.7±21.5b
化生四
, 百拇医药
0.25
0.744±0.076b
2407±574
31.2±8.7
烯酸组
0.50
0.803±0.005b
3126±678
41.1±9.5
1.00
0.85±0.187b
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6653±915b
53.6±18.2a
2.00
0.942±0.283b
9253±2146b
81.2±15.4b
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
表2 多不饱和脂肪酸对HLF细胞生物学活性的影响(n=3) 组别
浓度
, 百拇医药
mmol/L
A值
min-1
HA(mg/L)
对照组
0.236±0.062
2196±594
27.1±8.9
油酸组
0.25
0.191±0.014
1431±413
, 百拇医药
17.3±10.2
0.50
0.236±0.065
3659±752a
43.2±9.4a
1.00
0.257±0.021
5264±284b
57.6±13.1b
2.00
0.264±0.022
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6020±532b
73.4±14.8b
亚油酸组
0.25
0.131±0.067
1921±257
19.2±8.10
0.50
0.360±0.095
2783±794
34.5±10.8
, http://www.100md.com
1.00
0.275±0.072
3327±382a
41.3±10.0a
2.00
0.198±0.052
7816±1022b
79.3±15.4b
化生四
0.25
0.367±0.115
, 百拇医药
2044±568
28.6±11.3
烯酸组
0.50
0.748±0.042b
2148±271
27.5±10.7
1.00
0.667±0.079b
2374±275
32.4±8.7
, 百拇医药 2.00
0.271±0.009
3072±2800
35.2±13.9
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
3 讨论
氧化磷酸化和脂肪酸β氧化受损在脂肪性肝疾患的发生中起重要作用[4]. 临床上，从脂肪肝至脂肪性肝硬变的转化过程中，脂肪性肝炎是一个重要的中间阶段，脂肪肝的严重程度未必与肥胖程度以及高脂血症和高血糖相关，而可能与导致肝细胞损伤和纤维化的重症糖尿病、酗酒及禁食饥饿、体重骤减等有关[1-3]. 在此状态下，脂肪组织释放亚麻酸、 亚油酸等游离的多不饱和脂肪酸(USFA)增多，致血液和(或)肝细胞内USFA含量升高，且USFA常优于饱和脂肪酸(SFA)合成磷酯和甘油三酯，从而影响肝细胞内蓄积的中性脂肪的性质及其过氧应激脂质过氧化损伤的易感性[5]. 动物实验研究显示，富含油酸、亚油酸等USFA的玉米油和鱼油通过激活肝内脂质过氧化反应，促进酒精、四氯化碳引起的大鼠肝损伤，而富含棕榈酸等SFA的棕榈油则通过减少环氧合酶和肿瘤坏死因子α的含量及抗脂质过氧化，可逆转酒精所致的肝损伤[6，7]. 并且，SFA可抑制肝组织对USFA的摄取[5]. 提示游离脂肪酸的组成及其含量与酒精性和非酒精性脂肪性肝炎的发生发展密切相关[1-3]. 然而，游离脂肪酸在脂肪性肝炎发病中的具体作用至今尚未明确，各种脂肪酸对体外培养肝细胞和成纤维细胞生物学活性有无影响亦未见文献报道.
, 百拇医药
结果表明，油酸、亚油酸可促进L-02细胞增殖和合成ECM，并呈浓度-效应关系；油酸、亚油酸对HLF细胞增殖无明显促进作用，在低浓度时对其胶原蛋白和HA的合成无明显影响，在中、高浓度时则有明显促进作用；提示肝组织内游离的油酸、亚油酸等USFA增多可通过促进产基质细胞(主要是肝细胞)增殖和(或)合成ECM，参与脂肪肝纤维化的形成. 本研究中花生四烯酸虽能促进L-02和HLF细胞的增殖，但对两株细胞ECM的合成并无显著影响，其机制尚待阐明. 我们应用乙醇作为脂肪酸的溶剂可能会对实验结果产生一定影响，有必要进一步研究无乙醇状态下脂肪酸对产ECM细胞的影响，但本实验亦提示USFA可能通过加强酒精等损肝因素的脂质过氧化反应，促进产基质细胞合成ECM，从而促进肝纤维化的发生和发展[1，8].
范建高，1966-05-15生，江苏省兴化县人，汉族. 医学博士、消化科主治医师，主要从事慢性肝炎、酒精性肝病及脂肪肝的基础和临床研究，发表论文36篇，综述及专题笔谈16篇，译文10篇，主编及参与《肝病基础理论与实践》等8部专著的编写.
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通讯作者 范建高，200080，第一人民医院消化科，上海市武进路85号.
Correspondence to:FAN Jian-Gao, Shanghai First People＇s Hospital, 85 Wujinlu, Shanghai 200080, China
Tel. +86*21*63240090-3141
收稿日期 1997-12-18 修回日期 1998-03-18
4 参考文献
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