HPLC法测定白石清热冲剂中葛根素的含量
作者：刘东春 殷军 邓世新 赵余庆
单位：沈阳药科大学中药系， 沈阳 110015；邓世新 赵余庆；沈阳飞龙保健品有限公司， 沈阳 110023
关键词：白石清热冲剂；葛根素；高效液相离子对色谱法
沈阳药科大学学报990316 摘 要 用反相高效液相离子对色谱法测定白石清热冲剂中葛根素的含量.色谱柱：spherisorb C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：甲醇-pH 6.8,0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液(27：73)，每升流动相含四丁基溴化铵0.005 mol；检测波长250 mm，测得线性范围0.116～0.580 μg(r=0.999 8)，平均回收率97.2%，相对标准差RSD=1.8%.
分类号 R914
, 百拇医药
Determination of the Content of Puerain in Baishiqingre-granule
Liu Dongchun,Yin Jun,Deng Shixin,Zhao Yuqing
Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract A method was developed for the determination of the content of puerain in Baishiquingre-granule by high performance liquid ion-pair chromatography with a 4.6 mm×250 mm column packed with 10 μm Spherisorb C18 as the stationary phase,a mixtrue of methanol-pH 6.8,0.01 mol/L phosphate salts buffer(27∶73) as the mobile phase which contained tetrabutyl ammonium bromide(TBAB).The concentration of TBAB was 0.005 mol/L.250 nm detection wavelength was selected.The method had a good linearity,a range of 0.116 μg～0.580 μg,and a correlation coefficient r=0.999 8.The mean recovery of puerain was 97.2% with relative standard deviation of 1.8%.The results showed that this method was simple,sensitive,precise and accurate enough to be used in the quality control of baishiqingre-granule.
, 百拇医药
Key words Baishiqingre-granule;puerain;high performance liquid ion-pair chromatography
白石清热冲剂由葛根，白茅根,白花蛇舌草，生石膏，红花等11种中药组成，临床用于外感风热，咳嗽痰黄，上呼吸道感染，效果良好.本文报道了反相高效液相离子对色谱法测定制剂中的葛根素含量，这种方法测定中药制剂中葛根素的含量国内尚未见报道.
1 仪器与材料
高效液相色谱仪：岛津LC-10A；检测器：岛津SPD-10A；数据处理仪：岛津CR-6A.葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)，重蒸馏水，四丁基溴化铵(分析纯，上海青浦新产品研究所)；白石清热冲剂(沈阳飞龙保健品有限公司)；其它试剂均为分析纯.
2 方法与结果
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2.1 色谱条件
流动相：甲醇-pH6.8,0.01 mol/L磷酸盐缓冲剂(27∶73)，每升流动相加入四丁溴化铵0.005 mol；流速：1.0 mol/min；色谱柱：spherisorbC18：10 μm，4.6 mm×250 mm；检测波长：250 mm.
2.2 线性考查
精密称取葛根素对照品适量，加甲醇制成0.05 mg/mL的溶液，作为对照品溶液.分别吸取葛根素对照品溶液(0.058 mg/mL)2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 mL依次进样，按上述色谱条件分析，以葛根素进样量(μg)为横座标，色谱峰面积为纵座标绘制标准曲线，结果表明葛根素进样量0.116～0.580 μg，可得良好的线性关系.直线回归方程为：Y=2.851 471×106X—0.004 597×106(r=0.9998)，结果见表1.
, 百拇医药
2.3 含量测定
本品研细，精密称定10g,置250 mL锥形瓶.加氯仿20 mL超声震荡15 min，放冷，滤过.待滤渣中残留氯仿挥尽之后，将药渣放回锥形瓶中，加乙醇20 mL超声震荡15 min，抽滤.再将药渣转移至锥形瓶，加15 mL乙醇，超声震荡8 min抽滤，同前，再取15 mL乙醇超声震荡8 min，抽滤.合并滤液，滤液置水浴上蒸干，残留物加甲醇适量溶解，定量转移至25 mL量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试样品溶液.
精密称定缺葛根空白对照品细粉10 g，同前操作，制得空白对照品溶液，注入色谱仪6 μL空白对照品溶液，记录色谱图(见图3).从色谱图可见，杂质峰不干扰葛根素峰面积的测定.
测定方法：参照中国药典1995版一部附录VID高效液相色谱法测定.分别精密吸取对照品溶液、样品溶液各6 μL，测定葛根素峰面积(见图1与图2)，计算即得.
, 百拇医药
Tab.1 The linerity of detector response No
1
2
3
4
5
X-Amount of puerain/μg
0.116
0.232
0.348
0.464
0.580
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Y-Peak area/×106
0.329 308
0.660 275
0.984 779
1.301 826
1.662 386
Fig.1 Reference standard
a—Puerain
Fig.2 Sample
, 百拇医药
Fig.3 Sample which was absence of Radix Puerariae
2.4 稳定性实验
精密称取样品10 g,按“3.2”项含量测定方法制备供试液.在第0，1，2，3，4，5 h注入同一供试液6 μL，分别测定葛根素峰面积,测定结果为：0.706 852×106，RSD=1.4%(n=6).
2.5 回收率实验
精密称取已知准确含量样品10 g，精密加入对照品溶液10 ml，使甲醇挥尽后.按样品含量测定项下方法操作，测定结果：平均回收率=97.2%，RSD=1.7%(n=5)，结果见图2.
Tab.2 The recovery of puerain Sample
, 百拇医药
no
Puerain in
sample/mg
Added/mg
Found/mg
Recovery/%
Mean
Recovery/%
RSD/%
1
1.011 4
0.580
, http://www.100md.com
1.537 3
96.6
—
—
2
1.021 3
0.580
1.566 1
97.8
—
—
3
1.003 1
, 百拇医药
0.580
1.571 9
99.3
97.2
1.7
4
1.008 0
0.580
1.507 2
94.9
—
—
5
, http://www.100md.com
1.033 5
0.580
1.568 3
97.2
—
—
3 讨论
a.葛根素(puerarin)为黄酮苷类，pH值对其溶解度影响较大〔1〕，所以采用含有缓冲盐的流动相以得到稳定的色谱峰，加入四丁基溴化铵以提高柱效，经实验验证方法可行，达到预期目的.
b.有文献报道以甲醇-水(20∶80)为流动相，对某种中药制剂中葛根素含量进行测定，在40℃可得适宜的葛根素分离图谱〔2〕.而在室温时，若单纯采用上述流动相则柱效过低，对于没有炉箱的高效液相色谱仪来说上述方法不适用.本文所述反相高效液相离子对色谱法在室温时就可简便、快速、准确地测量，且重现性良好.
参考文献
1 王成，刘土玲，谷士杰.葛根素的溶解性及其结合助溶的研究.中国药学杂志，1993，28(5)：294～296
2 张伟，粟晓黎，田今改.高效液相色谱法测定鼻炎胶囊中葛根素的含量.药物分析杂志，1994，14(4)：43～44
收稿日期:1999-01-25, 百拇医药
单位：沈阳药科大学中药系， 沈阳 110015；邓世新 赵余庆；沈阳飞龙保健品有限公司， 沈阳 110023
关键词：白石清热冲剂；葛根素；高效液相离子对色谱法
沈阳药科大学学报990316 摘 要 用反相高效液相离子对色谱法测定白石清热冲剂中葛根素的含量.色谱柱：spherisorb C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：甲醇-pH 6.8,0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液(27：73)，每升流动相含四丁基溴化铵0.005 mol；检测波长250 mm，测得线性范围0.116～0.580 μg(r=0.999 8)，平均回收率97.2%，相对标准差RSD=1.8%.
分类号 R914
, 百拇医药
Determination of the Content of Puerain in Baishiqingre-granule
Liu Dongchun,Yin Jun,Deng Shixin,Zhao Yuqing
Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract A method was developed for the determination of the content of puerain in Baishiquingre-granule by high performance liquid ion-pair chromatography with a 4.6 mm×250 mm column packed with 10 μm Spherisorb C18 as the stationary phase,a mixtrue of methanol-pH 6.8,0.01 mol/L phosphate salts buffer(27∶73) as the mobile phase which contained tetrabutyl ammonium bromide(TBAB).The concentration of TBAB was 0.005 mol/L.250 nm detection wavelength was selected.The method had a good linearity,a range of 0.116 μg～0.580 μg,and a correlation coefficient r=0.999 8.The mean recovery of puerain was 97.2% with relative standard deviation of 1.8%.The results showed that this method was simple,sensitive,precise and accurate enough to be used in the quality control of baishiqingre-granule.
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Key words Baishiqingre-granule;puerain;high performance liquid ion-pair chromatography
白石清热冲剂由葛根，白茅根,白花蛇舌草，生石膏，红花等11种中药组成，临床用于外感风热，咳嗽痰黄，上呼吸道感染，效果良好.本文报道了反相高效液相离子对色谱法测定制剂中的葛根素含量，这种方法测定中药制剂中葛根素的含量国内尚未见报道.
1 仪器与材料
高效液相色谱仪：岛津LC-10A；检测器：岛津SPD-10A；数据处理仪：岛津CR-6A.葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)，重蒸馏水，四丁基溴化铵(分析纯，上海青浦新产品研究所)；白石清热冲剂(沈阳飞龙保健品有限公司)；其它试剂均为分析纯.
2 方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件
流动相：甲醇-pH6.8,0.01 mol/L磷酸盐缓冲剂(27∶73)，每升流动相加入四丁溴化铵0.005 mol；流速：1.0 mol/min；色谱柱：spherisorbC18：10 μm，4.6 mm×250 mm；检测波长：250 mm.
2.2 线性考查
精密称取葛根素对照品适量，加甲醇制成0.05 mg/mL的溶液，作为对照品溶液.分别吸取葛根素对照品溶液(0.058 mg/mL)2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 mL依次进样，按上述色谱条件分析，以葛根素进样量(μg)为横座标，色谱峰面积为纵座标绘制标准曲线，结果表明葛根素进样量0.116～0.580 μg，可得良好的线性关系.直线回归方程为：Y=2.851 471×106X—0.004 597×106(r=0.9998)，结果见表1.
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2.3 含量测定
本品研细，精密称定10g,置250 mL锥形瓶.加氯仿20 mL超声震荡15 min，放冷，滤过.待滤渣中残留氯仿挥尽之后，将药渣放回锥形瓶中，加乙醇20 mL超声震荡15 min，抽滤.再将药渣转移至锥形瓶，加15 mL乙醇，超声震荡8 min抽滤，同前，再取15 mL乙醇超声震荡8 min，抽滤.合并滤液，滤液置水浴上蒸干，残留物加甲醇适量溶解，定量转移至25 mL量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试样品溶液.
精密称定缺葛根空白对照品细粉10 g，同前操作，制得空白对照品溶液，注入色谱仪6 μL空白对照品溶液，记录色谱图(见图3).从色谱图可见，杂质峰不干扰葛根素峰面积的测定.
测定方法：参照中国药典1995版一部附录VID高效液相色谱法测定.分别精密吸取对照品溶液、样品溶液各6 μL，测定葛根素峰面积(见图1与图2)，计算即得.
, 百拇医药
Tab.1 The linerity of detector response No
1
2
3
4
5
X-Amount of puerain/μg
0.116
0.232
0.348
0.464
0.580
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Y-Peak area/×106
0.329 308
0.660 275
0.984 779
1.301 826
1.662 386
Fig.1 Reference standard
a—Puerain
Fig.2 Sample
, 百拇医药
Fig.3 Sample which was absence of Radix Puerariae
2.4 稳定性实验
精密称取样品10 g,按“3.2”项含量测定方法制备供试液.在第0，1，2，3，4，5 h注入同一供试液6 μL，分别测定葛根素峰面积,测定结果为：0.706 852×106，RSD=1.4%(n=6).
2.5 回收率实验
精密称取已知准确含量样品10 g，精密加入对照品溶液10 ml，使甲醇挥尽后.按样品含量测定项下方法操作，测定结果：平均回收率=97.2%，RSD=1.7%(n=5)，结果见图2.
Tab.2 The recovery of puerain Sample
, 百拇医药
no
Puerain in
sample/mg
Added/mg
Found/mg
Recovery/%
Mean
Recovery/%
RSD/%
1
1.011 4
0.580
, http://www.100md.com
1.537 3
96.6
—
—
2
1.021 3
0.580
1.566 1
97.8
—
—
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1.003 1
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0.580
1.571 9
99.3
97.2
1.7
4
1.008 0
0.580
1.507 2
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5
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1.033 5
0.580
1.568 3
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3 讨论
a.葛根素(puerarin)为黄酮苷类，pH值对其溶解度影响较大〔1〕，所以采用含有缓冲盐的流动相以得到稳定的色谱峰，加入四丁基溴化铵以提高柱效，经实验验证方法可行，达到预期目的.
b.有文献报道以甲醇-水(20∶80)为流动相，对某种中药制剂中葛根素含量进行测定，在40℃可得适宜的葛根素分离图谱〔2〕.而在室温时，若单纯采用上述流动相则柱效过低，对于没有炉箱的高效液相色谱仪来说上述方法不适用.本文所述反相高效液相离子对色谱法在室温时就可简便、快速、准确地测量，且重现性良好.
参考文献
1 王成，刘土玲，谷士杰.葛根素的溶解性及其结合助溶的研究.中国药学杂志，1993，28(5)：294～296
2 张伟，粟晓黎，田今改.高效液相色谱法测定鼻炎胶囊中葛根素的含量.药物分析杂志，1994，14(4)：43～44
收稿日期:1999-01-25, 百拇医药