CD44在原发性肝细胞癌中的表达
作者：黄颖 黄建富 殷凤峙
单位：福建医科大学附属协和医院肝胆外科(福州 350001)
关键词：肝细胞癌，原发性；CD44；免疫组织化学
福建医科大学学报990205 目的 探讨CD44在原发性肝细胞癌中的表达及意义。方法 采用高压锅抗原修复免疫组化技术，研究82例原发性肝癌手术标本中CD44的表达。结果 在41%的肝癌组织上可见到CD44的表达。CD44的表达与原发性肝细胞癌有无门静脉瘤栓形成呈密切正相关(P<0.01),CD44的表达与原发性肝细胞癌的预后无显著相关(P>0.05)。结论 CD44赋予肿瘤细胞侵袭转移潜能。
CD44 Expression in Primary Hepatocellular Carcinoma
Huang Ying Huang Jianfu Ying Fengzhi
, http://www.100md.com
(Department of Hepatobiliary,The Affiliated Union Hospital,Fujian Medical University,Fuzhou,350001)
Objective To elucidate the expression and significance of CD44 in primary hepatocellular carcinoma(HCC).Methods The expression of CD44 was investigated in 82 cases of HCC with immunohistochemistry and wet autoclave treatment for antigen retrieval.Results The positive rate of CD44 expression in 82 patients with HCC was 41%(34/82).The expression of CD44 correlated with tumor embolus in portal vein(P<0.01).CD44 had no significant effects on prognosis of HCC(P>0.05).Conclusion CD44 play an important role in the process of invasion and metastasis in HCC.
, 百拇医药
Key words hepatocellular carcinoma，primary;CD44;immunohistochemistry
本文用免疫组化SP法,研究细胞粘附分子CD44在原发性肝细胞癌中的表达情况及其与肝癌的侵袭转移、预后的关系。
1 材料与方法
1.1 一般资料 原发性肝细胞癌82例,均为肝癌根治性切除标本(经病理检查证实)，术前未经任何治疗,手术时间1990年1月～1993年6月,组织选取癌与癌旁交界处,其中70例(85.37%)有完整的随访资料。男性72例,女性10例;年龄51.63±11.60 (7～77)岁。术前检测AFP、HBsAg,记录镜下门静脉瘤栓、肿瘤结节个数、肿瘤直径、肿瘤包膜、癌细胞分化、临床分期等指标。另有正常肝组织20例，取自肝破裂手术切除的正常肝组织；门脉性肝硬化组织20例,为活检标本。
, 百拇医药
1.2 材料 鼠抗人CD44单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒均为福州迈新公司产品，DAB显色试剂盒为Zymed公司产品。本实验所用之标本均为10%福尔马林充分固定后石蜡包埋之存档组织块，4μm病理切片。
1.3 方法 免疫组化染色程序按SP试剂盒说明书进行。每批染色均设立阳性对照，并以PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 光镜下阳性结果判定
A：按切片中显色细胞数比例计分[1]
1分 显色细胞占切片中细胞总数<25%；
2分 显色细胞超过切片中细胞总数的25%。
B：按切片中显色强度(细胞显色有无及深浅)计分。
, 百拇医药
0分 细胞无显色；
1分 呈浅黄色；
2分 呈棕黄色；
3分 呈棕褐色。
C：每例肿瘤积分＝A×B，按积分高低依次为-积分为0～2分;+积分为2.1～6.0分。
1.5 统计学分析 主要应用统计软件包SPSS,其中涉及到χ2检验、Kaplan-Meire寿命表法、Log-rank检验、Cox比例风险模型分析等方法。
2 结 果
2.1 CD44阳性着色仅在原发性肝细胞癌的肝癌细胞膜上见到，呈线性着色(附图)，本组CD44阳性表达率为41.46%(34/82),而在正常肝组织、门脉性肝硬化组织及癌旁组织中未见表达。
, 百拇医药
附图 原发性肝细胞CD44阳性表达 ×400
2.2 CD44与肝癌的临床及病理学指标的关系见表1。
表1 CD44与肝癌的临床及病理学指标的关系 临床及病理学指标
CD44表达
阳性率(%)
-
+
门静脉瘤栓(镜下)
无
36
15
, 百拇医药 29.41
有
12
19
61.29*
瘤细胞分化程度
Ⅰ
10
0
0.00
Ⅱ
30
21
, http://www.100md.com
41.18
Ⅲ～Ⅳ
8
13
61.90
术前AFP(ng/ml)
<400
31
23
42.59
≥400
17
11
, http://www.100md.com
39.29
肿瘤包膜
完整
33
21
38.89
欠完整
15
13
46.43
临床分期
Ⅰ
15
, 百拇医药
10
40.00
Ⅱ
28
21
42.86
Ⅲ
5
3
37.50
*：P<0.01
2.3 肝癌患者术后生存率与CD44表达的关系
2.3.1 按CD44表达阴性、阳性分组后，患者术后1,2,3年生存率阴性组分别为72.68%,54.29%,35.71%,而阳性组为57.14%,30.00%,18.57%，但Log-rank检验显示,二组间术后生存率差异无显著性意义(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.3.2 用Cox比例风险模型作多因素综合分析原发性肝细胞癌的预后(表2)，显示肝癌细胞分化程度、包膜、门静脉瘤栓、术前 AFP值与肝癌患者的预后显著相关，而CD44与肝癌患者的预后无显著相关。
表2 多因素分析原发性肝癌患者的预后 因 素
回归系数
t
P
性别
1.285
1.816
0.075
年龄
, 百拇医药
-0.015
-0.671
0.505
HBsAg
0.014
0.019
0.985
肝硬化
0.143
0.225
0.823
术前AFP
0.221
, 百拇医药
0.420
0.046
门静脉瘤栓
1.132
1.572
0.022
卫星结节
0.272
0.922
0.361
直径
0.024
0.047
, 百拇医药
0.963
包膜
0.154
1.639
0.027
分化程度
0.643
1.919
0.015
临床分期
0.590
1.233
0.040
, 百拇医药
组织学分型
-0.193
-1.037
0.304
CD44
0.257
0.464
0.645
3 讨 论
CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，主要参与细胞-细胞，细胞-基质之间的特异性粘附[2]。目前已发现在转移性和非转移性肿瘤细胞株之间CD44表达水平的差异[3]。本文结果显示仅在癌组织上看到CD44的阳性表达，这与某些报道[4]不尽相同，可能是由于免疫组化技术的局限性，使笔者无法证实癌旁组织中CD44的表达及其与肿瘤的侵袭转移之间的相关性。本研究还显示CD44的表达与癌细胞分化程度、临床分期、术前AFP、包膜等这些与肝癌预后有关的指标无显著相关(P>0.05)。而且，单因素和多因素分析均未发现CD44与肝癌患者的预后显著相关(P>0.05)，但笔者发现在镜下可见到门静脉瘤栓者中CD44表达率为61.29%(19/31)，显著高于未见到门静脉瘤栓者的29.41%(15/51)，说明CD44的表达与有无门静脉瘤栓形成密切正相关(P<0.01).但其中15例未发现血管侵袭,却有CD44表达的上调,这不排除由于取材的原因,那些实际上存在血管侵袭的部分未被取到,而另12例虽然有血管侵袭却未表达CD44,说明可能有一部分肝癌是由于其他因素而不是CD44来影响瘤栓的形成。
, 百拇医药
研究表明，CD44可能参与恶性肿瘤的侵袭转移过程，并赋予肿瘤细胞侵袭转移潜能，可作为判断肝癌恶性度的指标之一。
参考文献
1 Mathew J,Hines J,Obafunwa J,et al.CD44 is expressed in hepatocellular carcinoma showing vascular invasion.J Pathol,1996;179:74
2 Gunthert U,Lorraine N,Summer E,et al.Are CD44 variant isoforms involved in human tumor progression.Cancer Surv,1995;24:19
3 Gunthert U,Horfmann M,Rudy W,et al.A new variant of glycoprotein in CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells.Cell,1991;65:1
4 刘鹏飞，吴孟超，刘 荣,等.原发性肝癌CD44 mRNA表达与肝癌复发的关系.第二军医大学学报,1996;17:561
(收稿:1998-12-23 修回:1999-03-22), 百拇医药
单位：福建医科大学附属协和医院肝胆外科(福州 350001)
关键词：肝细胞癌，原发性；CD44；免疫组织化学
福建医科大学学报990205 目的 探讨CD44在原发性肝细胞癌中的表达及意义。方法 采用高压锅抗原修复免疫组化技术，研究82例原发性肝癌手术标本中CD44的表达。结果 在41%的肝癌组织上可见到CD44的表达。CD44的表达与原发性肝细胞癌有无门静脉瘤栓形成呈密切正相关(P<0.01),CD44的表达与原发性肝细胞癌的预后无显著相关(P>0.05)。结论 CD44赋予肿瘤细胞侵袭转移潜能。
CD44 Expression in Primary Hepatocellular Carcinoma
Huang Ying Huang Jianfu Ying Fengzhi
, http://www.100md.com
(Department of Hepatobiliary,The Affiliated Union Hospital,Fujian Medical University,Fuzhou,350001)
Objective To elucidate the expression and significance of CD44 in primary hepatocellular carcinoma(HCC).Methods The expression of CD44 was investigated in 82 cases of HCC with immunohistochemistry and wet autoclave treatment for antigen retrieval.Results The positive rate of CD44 expression in 82 patients with HCC was 41%(34/82).The expression of CD44 correlated with tumor embolus in portal vein(P<0.01).CD44 had no significant effects on prognosis of HCC(P>0.05).Conclusion CD44 play an important role in the process of invasion and metastasis in HCC.
, 百拇医药
Key words hepatocellular carcinoma，primary;CD44;immunohistochemistry
本文用免疫组化SP法,研究细胞粘附分子CD44在原发性肝细胞癌中的表达情况及其与肝癌的侵袭转移、预后的关系。
1 材料与方法
1.1 一般资料 原发性肝细胞癌82例,均为肝癌根治性切除标本(经病理检查证实)，术前未经任何治疗,手术时间1990年1月～1993年6月,组织选取癌与癌旁交界处,其中70例(85.37%)有完整的随访资料。男性72例,女性10例;年龄51.63±11.60 (7～77)岁。术前检测AFP、HBsAg,记录镜下门静脉瘤栓、肿瘤结节个数、肿瘤直径、肿瘤包膜、癌细胞分化、临床分期等指标。另有正常肝组织20例，取自肝破裂手术切除的正常肝组织；门脉性肝硬化组织20例,为活检标本。
, 百拇医药
1.2 材料 鼠抗人CD44单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒均为福州迈新公司产品，DAB显色试剂盒为Zymed公司产品。本实验所用之标本均为10%福尔马林充分固定后石蜡包埋之存档组织块，4μm病理切片。
1.3 方法 免疫组化染色程序按SP试剂盒说明书进行。每批染色均设立阳性对照，并以PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 光镜下阳性结果判定
A：按切片中显色细胞数比例计分[1]
1分 显色细胞占切片中细胞总数<25%；
2分 显色细胞超过切片中细胞总数的25%。
B：按切片中显色强度(细胞显色有无及深浅)计分。
, 百拇医药
0分 细胞无显色；
1分 呈浅黄色；
2分 呈棕黄色；
3分 呈棕褐色。
C：每例肿瘤积分＝A×B，按积分高低依次为-积分为0～2分;+积分为2.1～6.0分。
1.5 统计学分析 主要应用统计软件包SPSS,其中涉及到χ2检验、Kaplan-Meire寿命表法、Log-rank检验、Cox比例风险模型分析等方法。
2 结 果
2.1 CD44阳性着色仅在原发性肝细胞癌的肝癌细胞膜上见到，呈线性着色(附图)，本组CD44阳性表达率为41.46%(34/82),而在正常肝组织、门脉性肝硬化组织及癌旁组织中未见表达。
, 百拇医药
附图 原发性肝细胞CD44阳性表达 ×400
2.2 CD44与肝癌的临床及病理学指标的关系见表1。
表1 CD44与肝癌的临床及病理学指标的关系 临床及病理学指标
CD44表达
阳性率(%)
-
+
门静脉瘤栓(镜下)
无
36
15
, 百拇医药 29.41
有
12
19
61.29*
瘤细胞分化程度
Ⅰ
10
0
0.00
Ⅱ
30
21
, http://www.100md.com
41.18
Ⅲ～Ⅳ
8
13
61.90
术前AFP(ng/ml)
<400
31
23
42.59
≥400
17
11
, http://www.100md.com
39.29
肿瘤包膜
完整
33
21
38.89
欠完整
15
13
46.43
临床分期
Ⅰ
15
, 百拇医药
10
40.00
Ⅱ
28
21
42.86
Ⅲ
5
3
37.50
*：P<0.01
2.3 肝癌患者术后生存率与CD44表达的关系
2.3.1 按CD44表达阴性、阳性分组后，患者术后1,2,3年生存率阴性组分别为72.68%,54.29%,35.71%,而阳性组为57.14%,30.00%,18.57%，但Log-rank检验显示,二组间术后生存率差异无显著性意义(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.3.2 用Cox比例风险模型作多因素综合分析原发性肝细胞癌的预后(表2)，显示肝癌细胞分化程度、包膜、门静脉瘤栓、术前 AFP值与肝癌患者的预后显著相关，而CD44与肝癌患者的预后无显著相关。
表2 多因素分析原发性肝癌患者的预后 因 素
回归系数
t
P
性别
1.285
1.816
0.075
年龄
, 百拇医药
-0.015
-0.671
0.505
HBsAg
0.014
0.019
0.985
肝硬化
0.143
0.225
0.823
术前AFP
0.221
, 百拇医药
0.420
0.046
门静脉瘤栓
1.132
1.572
0.022
卫星结节
0.272
0.922
0.361
直径
0.024
0.047
, 百拇医药
0.963
包膜
0.154
1.639
0.027
分化程度
0.643
1.919
0.015
临床分期
0.590
1.233
0.040
, 百拇医药
组织学分型
-0.193
-1.037
0.304
CD44
0.257
0.464
0.645
3 讨 论
CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，主要参与细胞-细胞，细胞-基质之间的特异性粘附[2]。目前已发现在转移性和非转移性肿瘤细胞株之间CD44表达水平的差异[3]。本文结果显示仅在癌组织上看到CD44的阳性表达，这与某些报道[4]不尽相同，可能是由于免疫组化技术的局限性，使笔者无法证实癌旁组织中CD44的表达及其与肿瘤的侵袭转移之间的相关性。本研究还显示CD44的表达与癌细胞分化程度、临床分期、术前AFP、包膜等这些与肝癌预后有关的指标无显著相关(P>0.05)。而且，单因素和多因素分析均未发现CD44与肝癌患者的预后显著相关(P>0.05)，但笔者发现在镜下可见到门静脉瘤栓者中CD44表达率为61.29%(19/31)，显著高于未见到门静脉瘤栓者的29.41%(15/51)，说明CD44的表达与有无门静脉瘤栓形成密切正相关(P<0.01).但其中15例未发现血管侵袭,却有CD44表达的上调,这不排除由于取材的原因,那些实际上存在血管侵袭的部分未被取到,而另12例虽然有血管侵袭却未表达CD44,说明可能有一部分肝癌是由于其他因素而不是CD44来影响瘤栓的形成。
, 百拇医药
研究表明，CD44可能参与恶性肿瘤的侵袭转移过程，并赋予肿瘤细胞侵袭转移潜能，可作为判断肝癌恶性度的指标之一。
参考文献
1 Mathew J,Hines J,Obafunwa J,et al.CD44 is expressed in hepatocellular carcinoma showing vascular invasion.J Pathol,1996;179:74
2 Gunthert U,Lorraine N,Summer E,et al.Are CD44 variant isoforms involved in human tumor progression.Cancer Surv,1995;24:19
3 Gunthert U,Horfmann M,Rudy W,et al.A new variant of glycoprotein in CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells.Cell,1991;65:1
4 刘鹏飞，吴孟超，刘 荣,等.原发性肝癌CD44 mRNA表达与肝癌复发的关系.第二军医大学学报,1996;17:561
(收稿:1998-12-23 修回:1999-03-22), 百拇医药