120例系统性红斑狼疮患者抗中性粒细胞胞浆抗体的检测
作者：张锐 徐胜前 王芬 徐建华
单位：安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科，合肥 230022
关键词：红斑狼疮；系统性；免疫学；中性白细胞；免疫学
安徽医科大学学报000122
摘要 目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的阳性检出率及其与病情的相关性。方法 应用间接免疫荧光技术(IIF)检测。结果 120例SLE患者中，ANCA阳性31例，阳性率25.8%。其中P-ANCA阳性者20例，阳性率16.6%；C-ANCA阳性者11例，阳性率9.2%；且滴度越高临床病情越重。66例活动组SLE中ANCA阳性为23例，阳性率为34.8%，明显高于非活动组54例中的8例阳性率14.8%(P<0.05)。正常对照20例均为阴性。结论 ANCA在SLE患者中有一定的阳性检出率，且与疾病的严重程度具有相关性。
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中图分类号 R392.33；R593.241
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0060-02
抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophilic cytoplasmic antibodies,ANCA)是一群与人中性粒细胞胞浆成分反应，与临床一些炎症疾病密切相关的抗体〔1〕。自从Davies等〔1〕在坏死性肾小球肾炎和系统性血管炎患者循环物中首先发现ANCA以来，在国际上逐渐引起人们的重视。现已证实，ANCA是系统性坏死性血管炎的血清标志抗体，被广泛应用于血管炎的诊断和鉴别诊断。但ANCA在SLE诊断中的意义至今仍有争议〔2〕。Schnabel等〔3〕报道在SLE中仅存在核周型ANCA(P-ANCA)，而Pauzner等〔4〕报道在SLE中还发现存在胞浆型ANCA(C-ANCA)，本文用间接免疫荧光技术(IIF)对120例SLE患者作血清ANCA的检测，以探索ANCA与SLE的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 病例选择 SLE患者120例，均符合美国风湿病学会1982年诊断标准。正常献血员20例。所有血清标本置-20℃冰箱保存备检。
1.1.2 试剂来源 ANCA阳性参考血清、荧光素标记的羊抗人IgG均购自北京中山生物技术有限公司。
1.1.3 所用仪器 电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)，荧光显微镜(重庆光学仪器厂)。
1.2 方法
1.2.1 中性粒细胞基质片的制备 按Borregaard等法〔5〕，取健康人肝素抗凝血，加等量含1.5% Dextran-T500生理盐水，室温斜置45 min后，吸取上层血浆用淋巴细胞分离液分离，取底部中性粒细胞层，用冷蒸馏水溶解残留红细胞，1 min后加等量1.8% NaCl恢复等渗，并用Hanks液洗涤3次后，再用1.8% NaCl等渗液调细胞浓度为(4.5～5.5)×107.L-1，取其涂成薄片。经无水乙醇固定和干燥后，于-20℃保存备用。
, 百拇医药
1.2.2 检测方法 将被检血清用pH7.4 0.01 mol.L-1 PBS缓冲液作1∶20稀释，滴加于基质片上，置湿盒37℃恒温水浴箱孵育30 min，用pH7.4 0.01 mol.L-1 PBS缓冲液洗涤3次，每次10 min再用荧光标记的羊抗人IgG复染37℃孵育30 min，用pH7.4 0.01 mol.L-1 PBS缓冲液洗涤3次，凉干。最后用荧光显微镜观察结果。结果阳性者再作1∶20、1∶40、1∶80稀释检测。结果判断〔6〕：凡在中性粒细胞胞浆内出现弥漫的细颗粒绿色荧光者为C-ANCA，在中性粒细胞胞核周围出现绿色荧光者为P-ANCA。同时，利用基质片中存在少量淋巴细胞和嗜酸性粒细胞来区分是ANA还是真正的P-ANCA，前者与淋巴细胞和嗜酸性粒细胞发生反应，后者则不能。
2 结果
, 百拇医药 2.1 SLE患者中ANCA的阳性率 120例SLE患者中ANCA阳性者31例，阳性率25.8%；其中1∶80稀释阳性者8例，1∶40稀释阳性者13例，1∶20稀释阳性者10例；P-ANCA阳性者20例，C-ANCA阳性者11例。正常对照组20例均为阴性。见表1。
2.2 SLE患者活动组与非活动组ANCA阳性率比较 120例SLE患者根据Urowitzde分类标准〔7〕分为活动组和非活动组，结果提示：66例活动组中ANCA阳性率为34.8%(23/66)，54例非活动组中ANCA阳性率为14.8%(8/54)，两组阳性率相比差异有显著性(P<0.05)。见表2。
表1 SLE患者中ANCA的阳性率 组别
n
P-ANCA阳性数(%)
, 百拇医药 C-ANCA阳性数
(%)
合计(%)
SLE组
120
20(16.67)
11(9.16)
31(25.83)
对照组
20
0
0
0
, 百拇医药
表2 SLE患者活动组与非活动组ANCA阳性率比较 组别
n
ANCA阳性数
阳性率(%)
活动组
66
23
34.8*
非活动组
54
8
14.8
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χ2检验，与非活动组相比，*P<0.053 讨论
ANCA自从1990年发现以来一直被作为系统性血管炎的血清学标记性抗体，尤其对于血管炎的诊断与鉴别诊断具有重要的意义。IIF法可将ANCA分为C-ANCA和P-ANCA以及非典型ANCA(X-ANCA)。其中C-ANCA主要靶抗原是蛋白酶3(PR-3)，临床主要见于Wegener肉芽肿，具有特异性且其滴度与病情呈正相关。此外，镜下也可见多动脉炎、结节性多动脉炎等。P-ANCA的主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，临床主要见于坏死性新月体肾炎，镜下也可见于多动脉炎、SLE等。X-ANCA的主要靶抗原目前还不十分清楚，镜下与P-ANCA不易区分，故有的实验室将其归入P-ANCA，临床上主要与溃疡性结肠炎、自身免疫性肝炎有关。ANCA在SLE中的发病机制尚未完全清楚，有作者提出ANCA是通过激活毛细血管中的中性粒细胞、单核细胞，引起溶菌酶的释放，导致血管损伤，或ANCA引发T细胞介导的细胞免疫协同造成组织损伤的结果〔1〕。有关ANCA在SLE中的作用及其特异性仍有争议，还有待作更深的研究。
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本文120例SLE患者中发现C-ANCA和P-ANCA两种类型的ANCA。ANCA的阳性率为25.8%(31/120)，其中C-ANCA的阳性率为9.2%(11/120)，与Pauzner等报道的10.5%基本一致〔4〕。P-ANCA的阳性率为16.6%(20/120)，低于文献报道的25%〔3，4〕。在31例ANCA阳性中，1∶80稀释阳性有8例，1∶40稀释阳性者13例，1∶20稀释阳性者10例。1∶80阳性者多为病情恶化或复发者，临床上有明显的肾损害、大量蛋白尿存在、有新出现的浆膜腔积液和面部皮疹，双手雷诺现象明显，属病情活动组；活动组SLE患者与非活动组SLE患者相比临床上还具有显著的脱发、网状青斑、口腔溃疡等，这些均提示活动组SLE患者较非活动组具有更明显的血管炎。这与活动组SLE患者ANCA的阳性率明显高于非活动组的结果是一致的。因此，有理由认为SLE患者中ANCA的出现提示了临床上血管炎的存在，它表明了病情的活动性，故可以作为临床上判断病情活动的一个有用的指标。
, 百拇医药 由上可知，测定SLE患者血液中ANCA可协助SLE的治疗，同时根据ANCA滴度的高低了解其病情变化。
作者简介：张锐 徐胜前 王芬 徐建华张 锐，女，33岁，检验师
参考文献
1，Jennette JC, Falk RJ. Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies and associated disease:a review. Am J Kidney Dis,1990;15(6):517～529
2，林善硖，卢燕文.抗中性粒细胞胞浆抗体检测在肾脏病诊治中的应用.中国实用内科杂志，1995；6(15)：337～379
3，Schnabel A, Csernok E, Isenberg DA et al. Antineutrophil cytoplasmic antibodies in systemic lupus erythematosus prevalence. Arthritis Rheum,1995;38(5):633～637
, http://www.100md.com
4，Pauzner R, Urowtz M, Gladman D et al. Antineutrophil cytoplasmic antibodies in systemic lupus erythematosus. J Rheumatol,1994;21(9):1670～1673
5，Borregaard N, Heiple JM, Simon ER et al. Subcellular localization of the b-cytochrome component of the human neutrophil microbicidal oxidase:translocation during activation. J Cel Biol,1983;97(1):52～61
6，Weislander J. How are antineutrophil cytoplasmic autoantibodies detected? Am J Kidney Dis,1991;18(2):154～158
7，蒋明，田新平，李学旺等.系统性红斑狼疮的临床.见：蒋明主编.风湿病学.北京：科学技术出版社，1996：1037
1999-09-13收稿，1999-11-22修回, 百拇医药
单位：安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科，合肥 230022
关键词：红斑狼疮；系统性；免疫学；中性白细胞；免疫学
安徽医科大学学报000122
摘要 目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的阳性检出率及其与病情的相关性。方法 应用间接免疫荧光技术(IIF)检测。结果 120例SLE患者中，ANCA阳性31例，阳性率25.8%。其中P-ANCA阳性者20例，阳性率16.6%；C-ANCA阳性者11例，阳性率9.2%；且滴度越高临床病情越重。66例活动组SLE中ANCA阳性为23例，阳性率为34.8%，明显高于非活动组54例中的8例阳性率14.8%(P<0.05)。正常对照20例均为阴性。结论 ANCA在SLE患者中有一定的阳性检出率，且与疾病的严重程度具有相关性。
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中图分类号 R392.33；R593.241
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0060-02
抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophilic cytoplasmic antibodies,ANCA)是一群与人中性粒细胞胞浆成分反应，与临床一些炎症疾病密切相关的抗体〔1〕。自从Davies等〔1〕在坏死性肾小球肾炎和系统性血管炎患者循环物中首先发现ANCA以来，在国际上逐渐引起人们的重视。现已证实，ANCA是系统性坏死性血管炎的血清标志抗体，被广泛应用于血管炎的诊断和鉴别诊断。但ANCA在SLE诊断中的意义至今仍有争议〔2〕。Schnabel等〔3〕报道在SLE中仅存在核周型ANCA(P-ANCA)，而Pauzner等〔4〕报道在SLE中还发现存在胞浆型ANCA(C-ANCA)，本文用间接免疫荧光技术(IIF)对120例SLE患者作血清ANCA的检测，以探索ANCA与SLE的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 病例选择 SLE患者120例，均符合美国风湿病学会1982年诊断标准。正常献血员20例。所有血清标本置-20℃冰箱保存备检。
1.1.2 试剂来源 ANCA阳性参考血清、荧光素标记的羊抗人IgG均购自北京中山生物技术有限公司。
1.1.3 所用仪器 电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)，荧光显微镜(重庆光学仪器厂)。
1.2 方法
1.2.1 中性粒细胞基质片的制备 按Borregaard等法〔5〕，取健康人肝素抗凝血，加等量含1.5% Dextran-T500生理盐水，室温斜置45 min后，吸取上层血浆用淋巴细胞分离液分离，取底部中性粒细胞层，用冷蒸馏水溶解残留红细胞，1 min后加等量1.8% NaCl恢复等渗，并用Hanks液洗涤3次后，再用1.8% NaCl等渗液调细胞浓度为(4.5～5.5)×107.L-1，取其涂成薄片。经无水乙醇固定和干燥后，于-20℃保存备用。
, 百拇医药
1.2.2 检测方法 将被检血清用pH7.4 0.01 mol.L-1 PBS缓冲液作1∶20稀释，滴加于基质片上，置湿盒37℃恒温水浴箱孵育30 min，用pH7.4 0.01 mol.L-1 PBS缓冲液洗涤3次，每次10 min再用荧光标记的羊抗人IgG复染37℃孵育30 min，用pH7.4 0.01 mol.L-1 PBS缓冲液洗涤3次，凉干。最后用荧光显微镜观察结果。结果阳性者再作1∶20、1∶40、1∶80稀释检测。结果判断〔6〕：凡在中性粒细胞胞浆内出现弥漫的细颗粒绿色荧光者为C-ANCA，在中性粒细胞胞核周围出现绿色荧光者为P-ANCA。同时，利用基质片中存在少量淋巴细胞和嗜酸性粒细胞来区分是ANA还是真正的P-ANCA，前者与淋巴细胞和嗜酸性粒细胞发生反应，后者则不能。
2 结果
, 百拇医药 2.1 SLE患者中ANCA的阳性率 120例SLE患者中ANCA阳性者31例，阳性率25.8%；其中1∶80稀释阳性者8例，1∶40稀释阳性者13例，1∶20稀释阳性者10例；P-ANCA阳性者20例，C-ANCA阳性者11例。正常对照组20例均为阴性。见表1。
2.2 SLE患者活动组与非活动组ANCA阳性率比较 120例SLE患者根据Urowitzde分类标准〔7〕分为活动组和非活动组，结果提示：66例活动组中ANCA阳性率为34.8%(23/66)，54例非活动组中ANCA阳性率为14.8%(8/54)，两组阳性率相比差异有显著性(P<0.05)。见表2。
表1 SLE患者中ANCA的阳性率 组别
n
P-ANCA阳性数(%)
, 百拇医药 C-ANCA阳性数
(%)
合计(%)
SLE组
120
20(16.67)
11(9.16)
31(25.83)
对照组
20
0
0
0
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表2 SLE患者活动组与非活动组ANCA阳性率比较 组别
n
ANCA阳性数
阳性率(%)
活动组
66
23
34.8*
非活动组
54
8
14.8
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χ2检验，与非活动组相比，*P<0.053 讨论
ANCA自从1990年发现以来一直被作为系统性血管炎的血清学标记性抗体，尤其对于血管炎的诊断与鉴别诊断具有重要的意义。IIF法可将ANCA分为C-ANCA和P-ANCA以及非典型ANCA(X-ANCA)。其中C-ANCA主要靶抗原是蛋白酶3(PR-3)，临床主要见于Wegener肉芽肿，具有特异性且其滴度与病情呈正相关。此外，镜下也可见多动脉炎、结节性多动脉炎等。P-ANCA的主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，临床主要见于坏死性新月体肾炎，镜下也可见于多动脉炎、SLE等。X-ANCA的主要靶抗原目前还不十分清楚，镜下与P-ANCA不易区分，故有的实验室将其归入P-ANCA，临床上主要与溃疡性结肠炎、自身免疫性肝炎有关。ANCA在SLE中的发病机制尚未完全清楚，有作者提出ANCA是通过激活毛细血管中的中性粒细胞、单核细胞，引起溶菌酶的释放，导致血管损伤，或ANCA引发T细胞介导的细胞免疫协同造成组织损伤的结果〔1〕。有关ANCA在SLE中的作用及其特异性仍有争议，还有待作更深的研究。
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本文120例SLE患者中发现C-ANCA和P-ANCA两种类型的ANCA。ANCA的阳性率为25.8%(31/120)，其中C-ANCA的阳性率为9.2%(11/120)，与Pauzner等报道的10.5%基本一致〔4〕。P-ANCA的阳性率为16.6%(20/120)，低于文献报道的25%〔3，4〕。在31例ANCA阳性中，1∶80稀释阳性有8例，1∶40稀释阳性者13例，1∶20稀释阳性者10例。1∶80阳性者多为病情恶化或复发者，临床上有明显的肾损害、大量蛋白尿存在、有新出现的浆膜腔积液和面部皮疹，双手雷诺现象明显，属病情活动组；活动组SLE患者与非活动组SLE患者相比临床上还具有显著的脱发、网状青斑、口腔溃疡等，这些均提示活动组SLE患者较非活动组具有更明显的血管炎。这与活动组SLE患者ANCA的阳性率明显高于非活动组的结果是一致的。因此，有理由认为SLE患者中ANCA的出现提示了临床上血管炎的存在，它表明了病情的活动性，故可以作为临床上判断病情活动的一个有用的指标。
, 百拇医药 由上可知，测定SLE患者血液中ANCA可协助SLE的治疗，同时根据ANCA滴度的高低了解其病情变化。
作者简介：张锐 徐胜前 王芬 徐建华张 锐，女，33岁，检验师
参考文献
1，Jennette JC, Falk RJ. Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies and associated disease:a review. Am J Kidney Dis,1990;15(6):517～529
2，林善硖，卢燕文.抗中性粒细胞胞浆抗体检测在肾脏病诊治中的应用.中国实用内科杂志，1995；6(15)：337～379
3，Schnabel A, Csernok E, Isenberg DA et al. Antineutrophil cytoplasmic antibodies in systemic lupus erythematosus prevalence. Arthritis Rheum,1995;38(5):633～637
, http://www.100md.com
4，Pauzner R, Urowtz M, Gladman D et al. Antineutrophil cytoplasmic antibodies in systemic lupus erythematosus. J Rheumatol,1994;21(9):1670～1673
5，Borregaard N, Heiple JM, Simon ER et al. Subcellular localization of the b-cytochrome component of the human neutrophil microbicidal oxidase:translocation during activation. J Cel Biol,1983;97(1):52～61
6，Weislander J. How are antineutrophil cytoplasmic autoantibodies detected? Am J Kidney Dis,1991;18(2):154～158
7，蒋明，田新平，李学旺等.系统性红斑狼疮的临床.见：蒋明主编.风湿病学.北京：科学技术出版社，1996：1037
1999-09-13收稿，1999-11-22修回, 百拇医药