采用氯化锂和紫外线复合诱变方法筛选四环素高产菌株
作者：袁琳
单位：袁琳(宁夏制药厂菌种站，宁夏 永宁 750100)
关键词：金色链霉菌；复合诱变；突变株
宁夏医学杂志000610 【摘要】 目的 筛选优良高产四环素生产菌株，以提高生产发酵水平。方法 采用氯化锂和紫外线复合诱变单孢子悬浮液。结果 经过初筛、复筛，获得活性提高12.3%～37%的变株。结论 氯化锂与紫外线复合诱变四环素产生菌可以获得高产菌株，同时氯化锂的使用对于菌株发酵的最终成品质量无任何不良影响。
【中图分类号】 TQ465.4 【文献标识码】 A
文章编号：1001-5949(2000)06-0340-02
To select high-yield strains of tetracycline by using complex mutagenesis of LiCl and ultraviolet rays
, 百拇医药
YUAN Lin
(Dept.of antibiotic-producing microorganisms，Ningxia pharmaceutical factory，Yongning，Ningxia 750100，China)
【Abstract】 Objectives To select high-yield strains of tetracycline and improve the ferment level of production.Methods By using complex mutagenesis of LiCl and ultraviolet rays，we deal with the simple spore suspension.Results Through the preliminary selection and the continuous selection，we have acqirued some Mutant strains，whose activity improve about 12.3%～37%.Conclusions The method dealing the tetracycline-bearer with complex mutagenesis of LiCl and ultraviolet rays may acquire high-yield srains.At the same time，LiCl has not any negative influence on the final production quality.
, 百拇医药
【Key words】 Tetracycline；Streptomyces arueofaciens；Complex mutagenesis▲
氯化锂是一种碱金属卤化物，其本身并无诱变作用，但在抗生素生产菌的诱变育种中表明与一些诱变因子具有协同作用[1，2]。紫外线是一种非电离辅射，对原核生物而言是一种比较好的诱变因素，它直接作用于DNA，使生物的遗传物质发生一系列的生物学效应并进而导致变异[2，3]。本实验采用的是复合诱变处理，可以扩大突变的范围，提高诱变效果。据报道采用氯化锂前处理的诱变效果较好[1]。
1 材料与方法
1.1 出发菌株：Streptomyces arueofaciens B3-1。
1.2 培养基与培养条件
, 百拇医药
1.2.1 斜面培养基：麸皮、琼脂，PH7.0～8.0，温度35℃。
1.2.2 平板培养基：面粉、蛋白胨、KH2PO4，PH自然，温度35℃。
1.2.3 种子和发酵培养基：淀粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨、CaCO3、NaBr，PH自然，温度30℃，220转/分钟振荡培养。
1.3 发酵单位测定：采用与发酵生产中间体相同的化学方法测定单位毫升滤液的发酵单位。
1.4 诱变处理[4]：将新鲜斜面培养物制成单孢子悬浮液，用LiCl溶液浸泡4小时后，置于功率15W紫外灯下30cm处振荡照射。
1.5 筛选分离：将处理过的悬浮液以适当浓度涂布于平板培养基上，培养4天后挑取单菌落传斜面，并通过摇瓶试验分离高产菌株。
, 百拇医药
2 结果
2.1 诱变致死率：以未处理者作对照，统计平板上生长的菌落数，计算诱变致死率，结果见表1。
表1 诱变处理的死亡率诱变的致死率 uv作用时间
(min)
诱变的致死率
uv(%)
0.5%LiCl+uv(%)
0.9%LiCl+uv(%)
20
88.72
93.22
, http://www.100md.com
96.58
30
95.61
98.01
98.92
40
98.24
99.72
99.98
2.2 诱变的正变率：由随机挑选的菌落接斜面后进行摇瓶试验，统计试验数据，计算正变率。结果作用20分钟者正变率为23.33%，40分钟者正变率为17.12%。
2.3 突变株的产单位能力：通过摇瓶重复试验，四株突变株的产单位能力较原出发株有较大幅度的提高，结果见表2。 表2 突变株与出发株的比较 菌株名称
, 百拇医药
9-40
12-5
13-29
13-39
紫外线作用时间(秒)
30
40
40
40
发酵单位(U/ml)
20380
22309
15269
, 百拇医药
18089
对照发酵单位(U/ml)
18148
18915
13211
13211
活性提高(%)
12.3
17.9
15.6
36.9
3 讨论
在氯化锂的助变作用下，紫外线对四环素生产菌的致死率明显提高，且随作用剂量的升高，致死率不断增大，正变率则有所下降，但变异的幅度相应增大。
, http://www.100md.com
为了控制金霉素的产生，四环素发酵过程中需加抑氯剂，但氯化锂作助变剂筛选出的突变株，在发酵过程及所得成品中金霉素含量指标均正常。
作者简介：袁琳，女(1972年～)，陕西籍，学士学位，助工，研究四环素菌种的选育。
参考文献
[1] 刘颐屏.抗生素菌种选育的理论和技术[M].北京：中国医药科技出版社，1992.45
[2] 沈阳药学院微生物教研室.微生物遗传与育种学[M].沈阳：沈阳药学院出版社，1992，291：299
[3] 宋运淳，余先觉，普通遗传学[M].武汉：武汉大学出版社，1990.221
[4] 金志华，等.Avermectin产生菌异亮氨酸诱导变种的选育[J].中国抗生素杂志，1997，(2)：84
收稿：1999—09—15
修回：2000—03—06, 百拇医药
单位：袁琳(宁夏制药厂菌种站，宁夏 永宁 750100)
关键词：金色链霉菌；复合诱变；突变株
宁夏医学杂志000610 【摘要】 目的 筛选优良高产四环素生产菌株，以提高生产发酵水平。方法 采用氯化锂和紫外线复合诱变单孢子悬浮液。结果 经过初筛、复筛，获得活性提高12.3%～37%的变株。结论 氯化锂与紫外线复合诱变四环素产生菌可以获得高产菌株，同时氯化锂的使用对于菌株发酵的最终成品质量无任何不良影响。
【中图分类号】 TQ465.4 【文献标识码】 A
文章编号：1001-5949(2000)06-0340-02
To select high-yield strains of tetracycline by using complex mutagenesis of LiCl and ultraviolet rays
, 百拇医药
YUAN Lin
(Dept.of antibiotic-producing microorganisms，Ningxia pharmaceutical factory，Yongning，Ningxia 750100，China)
【Abstract】 Objectives To select high-yield strains of tetracycline and improve the ferment level of production.Methods By using complex mutagenesis of LiCl and ultraviolet rays，we deal with the simple spore suspension.Results Through the preliminary selection and the continuous selection，we have acqirued some Mutant strains，whose activity improve about 12.3%～37%.Conclusions The method dealing the tetracycline-bearer with complex mutagenesis of LiCl and ultraviolet rays may acquire high-yield srains.At the same time，LiCl has not any negative influence on the final production quality.
, 百拇医药
【Key words】 Tetracycline；Streptomyces arueofaciens；Complex mutagenesis▲
氯化锂是一种碱金属卤化物，其本身并无诱变作用，但在抗生素生产菌的诱变育种中表明与一些诱变因子具有协同作用[1，2]。紫外线是一种非电离辅射，对原核生物而言是一种比较好的诱变因素，它直接作用于DNA，使生物的遗传物质发生一系列的生物学效应并进而导致变异[2，3]。本实验采用的是复合诱变处理，可以扩大突变的范围，提高诱变效果。据报道采用氯化锂前处理的诱变效果较好[1]。
1 材料与方法
1.1 出发菌株：Streptomyces arueofaciens B3-1。
1.2 培养基与培养条件
, 百拇医药
1.2.1 斜面培养基：麸皮、琼脂，PH7.0～8.0，温度35℃。
1.2.2 平板培养基：面粉、蛋白胨、KH2PO4，PH自然，温度35℃。
1.2.3 种子和发酵培养基：淀粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨、CaCO3、NaBr，PH自然，温度30℃，220转/分钟振荡培养。
1.3 发酵单位测定：采用与发酵生产中间体相同的化学方法测定单位毫升滤液的发酵单位。
1.4 诱变处理[4]：将新鲜斜面培养物制成单孢子悬浮液，用LiCl溶液浸泡4小时后，置于功率15W紫外灯下30cm处振荡照射。
1.5 筛选分离：将处理过的悬浮液以适当浓度涂布于平板培养基上，培养4天后挑取单菌落传斜面，并通过摇瓶试验分离高产菌株。
, 百拇医药
2 结果
2.1 诱变致死率：以未处理者作对照，统计平板上生长的菌落数，计算诱变致死率，结果见表1。
表1 诱变处理的死亡率诱变的致死率 uv作用时间
(min)
诱变的致死率
uv(%)
0.5%LiCl+uv(%)
0.9%LiCl+uv(%)
20
88.72
93.22
, http://www.100md.com
96.58
30
95.61
98.01
98.92
40
98.24
99.72
99.98
2.2 诱变的正变率：由随机挑选的菌落接斜面后进行摇瓶试验，统计试验数据，计算正变率。结果作用20分钟者正变率为23.33%，40分钟者正变率为17.12%。
2.3 突变株的产单位能力：通过摇瓶重复试验，四株突变株的产单位能力较原出发株有较大幅度的提高，结果见表2。 表2 突变株与出发株的比较 菌株名称
, 百拇医药
9-40
12-5
13-29
13-39
紫外线作用时间(秒)
30
40
40
40
发酵单位(U/ml)
20380
22309
15269
, 百拇医药
18089
对照发酵单位(U/ml)
18148
18915
13211
13211
活性提高(%)
12.3
17.9
15.6
36.9
3 讨论
在氯化锂的助变作用下，紫外线对四环素生产菌的致死率明显提高，且随作用剂量的升高，致死率不断增大，正变率则有所下降，但变异的幅度相应增大。
, http://www.100md.com
为了控制金霉素的产生，四环素发酵过程中需加抑氯剂，但氯化锂作助变剂筛选出的突变株，在发酵过程及所得成品中金霉素含量指标均正常。
作者简介：袁琳，女(1972年～)，陕西籍，学士学位，助工，研究四环素菌种的选育。
参考文献
[1] 刘颐屏.抗生素菌种选育的理论和技术[M].北京：中国医药科技出版社，1992.45
[2] 沈阳药学院微生物教研室.微生物遗传与育种学[M].沈阳：沈阳药学院出版社，1992，291：299
[3] 宋运淳，余先觉，普通遗传学[M].武汉：武汉大学出版社，1990.221
[4] 金志华，等.Avermectin产生菌异亮氨酸诱导变种的选育[J].中国抗生素杂志，1997，(2)：84
收稿：1999—09—15
修回：2000—03—06, 百拇医药