肠癌内分泌治疗的实验研究
作者：王科明 胡雪珍 王朝霞 陈廷峰 潘勤
单位：王科明、王朝霞、陈廷峰、潘勤：南京市(210011) 南京医科大学第二附属医院肿瘤科； 胡雪珍：南京市(210029) 江苏省中医院
关键词：肠癌 内分泌疗法 雌激素受体 小鼠
齐鲁肿瘤杂志990106 【摘 要】 目的 观察内分泌疗法对人肠癌移植物的作用。方法 应用肾包膜下移植法(SRC法)，将新鲜人肠腺癌瘤块移植于新生去胸腺BALB/C小鼠肾包膜下，将动物随机分成实验组和对照组，实验组每日2次灌服三苯氧胺，10mg/kg，对照组灌服生理盐水。第7天处死动物，再次测量移植物体积大小，实验结束后用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶联接法(SP法)检测瘤块的雌激素受体(ER)。结果 在6例人肠癌141个移植物中，3例ER阳性的肠癌实验组的移植物的体积增大值较对照组小(P<0.01)，而在3例ER阴性的肠癌中，两组间无差异(P>0.05)。结论 雌激素受体抑制剂三苯氧胺对ER阳性肠癌的生长有抑制作用，雌激素刺激肠癌细胞生长的重要机制之一可能是通过ER介导。
, http://www.100md.com
Experimental study of endocrino therapy on colorectal adenocarcinoma
Wang Keming,Hu Xuezhen,Wang Chaoxia,et al.
The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210011
【Abstract】 Objective To observe the effect of endocrinotherapy on the growth of xenografts from human colorectal adenocarcinoma. Methods Fresh surgical samples of human colorectal adenocarcinoma were used to transplant under renal capsule of disthymus BALB/C mice.The mice of survey group received high dose tamoxifen by mouth for 6 consecutive days.The mice of control group were given normal saline.Measurements were made of length and width of xenografts preoperation and postoperation on day 0、day 7,Estrogen receptor were determined by streptavidin peroxidase conjugated method. Results The volume of xenografts from three human colorectal adenocarcinomas which contain estorgen receptor in the control group was larger than that in survey group(P<0.01). But it is no difference for the volume of xenografts from human colorectal cancer which estrogen receptor was negative between control and survey group (P>0.05). Conclusion Colorectal carcinoma which contain estrogen receptor is hormone dependnt.TAM can inhibit the growth of xenografts which contain estrogen receptor.
, 百拇医药
【Key Words】 Colorectal adenocarcienoma Endocrinotherapy Estrogen receptor Mice.
通过对肠癌单纯内分泌治疗的动物实验研究，探讨肠癌是否为性激素依赖性肿瘤并为肠癌的临床内分泌治疗提供可靠的理论依据。
1 材料和方法
1.1 动物 BALB/C纯系小鼠由江苏省实验动物中心提供，分窝饲养，小鼠出生后72小时内摘除全部胸腺。实验移植肿瘤用8周龄小鼠，雌雄各半。共用141只去胸腺小鼠。
1.2 移植物来源 本院外科肠癌手术新鲜标本，术前经肠镜、病理学检查确诊为肠腺癌者。
1.3 方法 从肠癌手术新鲜标本取1cm3肠癌组织块，一部分送病理科行病理学检查并用免疫组化(SP法)检测ER。另一部分切成0.5mm3大小的瘤块移植于去胸腺8周后的小鼠肾包膜下(SRC法)[1]，每只小鼠接种一个瘤块。移植完毕后称重，随机分成实验组(70只)和对照组(71只)，实验组从移植术后第2天起灌服三苯氧胺(他莫昔芬，TAM)连续6天每次10mg/kg，每日2次，对照组则灌服同体积生理盐水6天，两组均自由饮水、进食。实验第8天处死动物，取下移植物，用带测微尺的解剖显微镜由同一人再次测量移植物两最大垂直径L、W，按公式V＝1/2(L+W)换算成体积(V:体积)[2]，并作ER检测(SP法)。
, 百拇医药
2 结果
本实验共取6例肠腺癌手术标本，其中3例ER阳性，3例ER阴性，肠癌移植物体积增大结果见表1。
表1
肠癌移植物的体积变化与ER状态及内分泌治疗的关系
病例
编号
组别
动物数
(n)
ER
移植物体积增大值
±s
, 百拇医药
t值
P值
1
对照组
实验组
12
12
阳性
4.021±0.360
3.396±0.310
3.218
<0.01
2
, http://www.100md.com
对照组
实验组
11
11
阴性
4.045±0.332
4.227±0.320
1.300
>0.05
3
对照组
实验组
13
, http://www.100md.com
13
阳性
4.019±0.388
3.558±0.370
3.099
<0.01
4
对照组
实验组
12
11
阴性
3.932±0.372
, 百拇医药
4.188±0.356
1.681
>0.05
5
对照组
实验组
12
12
阴性
3.979±0.345
4.145±0.345
1.177
>0.05
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6
对照组
实验组
11
11
阳性
4.068±0.318
3.545±0.368
3.558
<0.01
经t检验，3例ER阳性肠癌中，实验组的移植物体积增大值明显小于对照组(P<0.01)，而在3例ER阴性病例中，两组的移植物的体积增大值无明显差异(P>0.05)。
, 百拇医药
动物处死后，移植物ER检测结果与移植术前肠癌标本的另一部分的ER检测结果一致。移植物与肾组织间有炎性细胞浸润，无变性、坏死，移植物与移植术前癌块大体病理图比较，基本保持了原来的形态[1]。
3 讨论
某些肿瘤在癌变过程中，部分或全部保留了激素受体，其生长和分裂受激素环境的影响，内分泌治疗有效，这类肿瘤称为激素依赖性肿瘤。另一类肿瘤缺乏激素受体，其生长和分裂不受激素环境的影响，内分泌治疗通常无效，称为非激素依赖性肿瘤，这一概念已被人们广泛接受。肠癌组织中的ER阳性率为23%～66%[3～5]。SP法检测ER，由于链霉菌抗生物素蛋白等电点为6.5，接近中性，几乎不与组织中的内源性凝集素物质发生非特异性结合，具有低背景、高放大的效果，与ABC法等比较，具有染色时间短、灵敏度高、特异性强、背景更清晰的特点[6]。他莫昔芬是一种雌激素受体抑制剂，可通过竞争性结合胞浆内ER，从而改变受体复合物在核内的联接位置，阻断以后的一系列反应，干扰受体的再生步骤[7]，从而部分阻断雌激素对肠癌细胞生长的刺激作用。肠癌组织中ER的沉降系数为8S，解离常数在1×10-9～1×10-10间，含量为1.3～61.3 fmol/mg蛋白[5，8]，符合受体蛋白低含量、高结合力的特点，其理化性质与典型性激素靶器官肿瘤的ER相似。本实验中，3例ER阳性肠癌实验组移植物体积增大值较对照组小(P<0.01)，而在3例ER阴性肠癌中，两组移植物体积增大值无差异(P>0.05)，显示ER抑制剂三苯氧胺可抑制ER阳性肠癌的生长，而对ER阴性肠癌无影响。提示ER阳性肠癌为雌激素依赖性肿瘤，ER阴性肠癌为非激素依赖性肿瘤。
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有关雌激素与肠癌的关系尚未定论。Lointier等[9，10]发现雌激素可促进肠癌细胞株的生长，三苯氧胺可抑制其生长。而Meggouh等[3]认为雌激素于大肠癌的发生、发展并不重要。本实验发现雌激素受体抑制剂对ER阳性肠癌移植物的生长有抑制作用，与Lointier等的观点一致，提示雌激素刺激肠癌细胞生长的重要机制之一可能是通过ER介导。
参 考 文 献
1 王科明,王朝霞,陈廷峰,等.人肠癌在纯系小鼠肾包膜下移植生长的实验观察,齐鲁肿瘤杂志,1996,3(4):262.
2 Bogden AE,Cobb WR, Lepage DJ, et al, Chemotherapy responsiveness of human tumors as first transplant generation xenografts in the normal mouse: Six-day subrenal capsule assay.Cancer,1981,48(1):10.
, 百拇医药
3 Meggouh F. lointier P, Saze S. Sex steroid and 1,25-Dihydroxyvitamin D3 receptors in human colorectal adeno carnoma and normalmucosa. Cancer Res,1991,51:1227.
4 Mcclendon TE,Appleby D, Claudon DB, et al. Colonic neoplasms tissue estrogen receptor and carcinoembryonic antigen. Archives of Surgery, 1977,112:240.
5 Hendrickse CW, Jones oh, Donovant IA, et al. Oestrogen and progesterone receptors in colorectal cancer and human colonic cancer cell lines. Br J Surg,1993,80(5):636.
, 百拇医药
6 郑智勇,余英豪,孙惠敏,等.SP免疫组织化学染色用于肾活检石蜡切片.中华病理学杂志,1993,22(5):309.
7 Matsui M,Kojjma O,Uehara Y,et al. Characterization of estrogen receptor in human gastric cancer. Cancer,1991，68(2):305.
8 Singh S,Sheppard MC,Langman MJS. Sex differences in the incidence of colorectal cancer:an exploration of oestrogen and progesterone receptors. Gut,1993，33(5):611.
9 Lointier P,Wildrick DM, Boman BM,et al. The effects of steroid hormones on a human colon cancer cell line in vitro. Anticancer Res，1992，12(4):1327.
10 Lointier P,Wildrick DM, Boman BM. Growth effects of tamoxifen on colon carcinoma cells and cultured cells from normal colonic mucosa. Anticancer Res, 1992，(5):1523., 百拇医药
单位：王科明、王朝霞、陈廷峰、潘勤：南京市(210011) 南京医科大学第二附属医院肿瘤科； 胡雪珍：南京市(210029) 江苏省中医院
关键词：肠癌 内分泌疗法 雌激素受体 小鼠
齐鲁肿瘤杂志990106 【摘 要】 目的 观察内分泌疗法对人肠癌移植物的作用。方法 应用肾包膜下移植法(SRC法)，将新鲜人肠腺癌瘤块移植于新生去胸腺BALB/C小鼠肾包膜下，将动物随机分成实验组和对照组，实验组每日2次灌服三苯氧胺，10mg/kg，对照组灌服生理盐水。第7天处死动物，再次测量移植物体积大小，实验结束后用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶联接法(SP法)检测瘤块的雌激素受体(ER)。结果 在6例人肠癌141个移植物中，3例ER阳性的肠癌实验组的移植物的体积增大值较对照组小(P<0.01)，而在3例ER阴性的肠癌中，两组间无差异(P>0.05)。结论 雌激素受体抑制剂三苯氧胺对ER阳性肠癌的生长有抑制作用，雌激素刺激肠癌细胞生长的重要机制之一可能是通过ER介导。
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Experimental study of endocrino therapy on colorectal adenocarcinoma
Wang Keming,Hu Xuezhen,Wang Chaoxia,et al.
The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210011
【Abstract】 Objective To observe the effect of endocrinotherapy on the growth of xenografts from human colorectal adenocarcinoma. Methods Fresh surgical samples of human colorectal adenocarcinoma were used to transplant under renal capsule of disthymus BALB/C mice.The mice of survey group received high dose tamoxifen by mouth for 6 consecutive days.The mice of control group were given normal saline.Measurements were made of length and width of xenografts preoperation and postoperation on day 0、day 7,Estrogen receptor were determined by streptavidin peroxidase conjugated method. Results The volume of xenografts from three human colorectal adenocarcinomas which contain estorgen receptor in the control group was larger than that in survey group(P<0.01). But it is no difference for the volume of xenografts from human colorectal cancer which estrogen receptor was negative between control and survey group (P>0.05). Conclusion Colorectal carcinoma which contain estrogen receptor is hormone dependnt.TAM can inhibit the growth of xenografts which contain estrogen receptor.
, 百拇医药
【Key Words】 Colorectal adenocarcienoma Endocrinotherapy Estrogen receptor Mice.
通过对肠癌单纯内分泌治疗的动物实验研究，探讨肠癌是否为性激素依赖性肿瘤并为肠癌的临床内分泌治疗提供可靠的理论依据。
1 材料和方法
1.1 动物 BALB/C纯系小鼠由江苏省实验动物中心提供，分窝饲养，小鼠出生后72小时内摘除全部胸腺。实验移植肿瘤用8周龄小鼠，雌雄各半。共用141只去胸腺小鼠。
1.2 移植物来源 本院外科肠癌手术新鲜标本，术前经肠镜、病理学检查确诊为肠腺癌者。
1.3 方法 从肠癌手术新鲜标本取1cm3肠癌组织块，一部分送病理科行病理学检查并用免疫组化(SP法)检测ER。另一部分切成0.5mm3大小的瘤块移植于去胸腺8周后的小鼠肾包膜下(SRC法)[1]，每只小鼠接种一个瘤块。移植完毕后称重，随机分成实验组(70只)和对照组(71只)，实验组从移植术后第2天起灌服三苯氧胺(他莫昔芬，TAM)连续6天每次10mg/kg，每日2次，对照组则灌服同体积生理盐水6天，两组均自由饮水、进食。实验第8天处死动物，取下移植物，用带测微尺的解剖显微镜由同一人再次测量移植物两最大垂直径L、W，按公式V＝1/2(L+W)换算成体积(V:体积)[2]，并作ER检测(SP法)。
, 百拇医药
2 结果
本实验共取6例肠腺癌手术标本，其中3例ER阳性，3例ER阴性，肠癌移植物体积增大结果见表1。
表1
肠癌移植物的体积变化与ER状态及内分泌治疗的关系
病例
编号
组别
动物数
(n)
ER
移植物体积增大值
±s, 百拇医药
t值
P值
1
对照组
实验组
12
12
阳性
4.021±0.360
3.396±0.310
3.218
<0.01
2
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对照组
实验组
11
11
阴性
4.045±0.332
4.227±0.320
1.300
>0.05
3
对照组
实验组
13
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13
阳性
4.019±0.388
3.558±0.370
3.099
<0.01
4
对照组
实验组
12
11
阴性
3.932±0.372
, 百拇医药
4.188±0.356
1.681
>0.05
5
对照组
实验组
12
12
阴性
3.979±0.345
4.145±0.345
1.177
>0.05
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6
对照组
实验组
11
11
阳性
4.068±0.318
3.545±0.368
3.558
<0.01
经t检验，3例ER阳性肠癌中，实验组的移植物体积增大值明显小于对照组(P<0.01)，而在3例ER阴性病例中，两组的移植物的体积增大值无明显差异(P>0.05)。
, 百拇医药
动物处死后，移植物ER检测结果与移植术前肠癌标本的另一部分的ER检测结果一致。移植物与肾组织间有炎性细胞浸润，无变性、坏死，移植物与移植术前癌块大体病理图比较，基本保持了原来的形态[1]。
3 讨论
某些肿瘤在癌变过程中，部分或全部保留了激素受体，其生长和分裂受激素环境的影响，内分泌治疗有效，这类肿瘤称为激素依赖性肿瘤。另一类肿瘤缺乏激素受体，其生长和分裂不受激素环境的影响，内分泌治疗通常无效，称为非激素依赖性肿瘤，这一概念已被人们广泛接受。肠癌组织中的ER阳性率为23%～66%[3～5]。SP法检测ER，由于链霉菌抗生物素蛋白等电点为6.5，接近中性，几乎不与组织中的内源性凝集素物质发生非特异性结合，具有低背景、高放大的效果，与ABC法等比较，具有染色时间短、灵敏度高、特异性强、背景更清晰的特点[6]。他莫昔芬是一种雌激素受体抑制剂，可通过竞争性结合胞浆内ER，从而改变受体复合物在核内的联接位置，阻断以后的一系列反应，干扰受体的再生步骤[7]，从而部分阻断雌激素对肠癌细胞生长的刺激作用。肠癌组织中ER的沉降系数为8S，解离常数在1×10-9～1×10-10间，含量为1.3～61.3 fmol/mg蛋白[5，8]，符合受体蛋白低含量、高结合力的特点，其理化性质与典型性激素靶器官肿瘤的ER相似。本实验中，3例ER阳性肠癌实验组移植物体积增大值较对照组小(P<0.01)，而在3例ER阴性肠癌中，两组移植物体积增大值无差异(P>0.05)，显示ER抑制剂三苯氧胺可抑制ER阳性肠癌的生长，而对ER阴性肠癌无影响。提示ER阳性肠癌为雌激素依赖性肿瘤，ER阴性肠癌为非激素依赖性肿瘤。
, http://www.100md.com
有关雌激素与肠癌的关系尚未定论。Lointier等[9，10]发现雌激素可促进肠癌细胞株的生长，三苯氧胺可抑制其生长。而Meggouh等[3]认为雌激素于大肠癌的发生、发展并不重要。本实验发现雌激素受体抑制剂对ER阳性肠癌移植物的生长有抑制作用，与Lointier等的观点一致，提示雌激素刺激肠癌细胞生长的重要机制之一可能是通过ER介导。
参 考 文 献
1 王科明,王朝霞,陈廷峰,等.人肠癌在纯系小鼠肾包膜下移植生长的实验观察,齐鲁肿瘤杂志,1996,3(4):262.
2 Bogden AE,Cobb WR, Lepage DJ, et al, Chemotherapy responsiveness of human tumors as first transplant generation xenografts in the normal mouse: Six-day subrenal capsule assay.Cancer,1981,48(1):10.
, 百拇医药
3 Meggouh F. lointier P, Saze S. Sex steroid and 1,25-Dihydroxyvitamin D3 receptors in human colorectal adeno carnoma and normalmucosa. Cancer Res,1991,51:1227.
4 Mcclendon TE,Appleby D, Claudon DB, et al. Colonic neoplasms tissue estrogen receptor and carcinoembryonic antigen. Archives of Surgery, 1977,112:240.
5 Hendrickse CW, Jones oh, Donovant IA, et al. Oestrogen and progesterone receptors in colorectal cancer and human colonic cancer cell lines. Br J Surg,1993,80(5):636.
, 百拇医药
6 郑智勇,余英豪,孙惠敏,等.SP免疫组织化学染色用于肾活检石蜡切片.中华病理学杂志,1993,22(5):309.
7 Matsui M,Kojjma O,Uehara Y,et al. Characterization of estrogen receptor in human gastric cancer. Cancer,1991，68(2):305.
8 Singh S,Sheppard MC,Langman MJS. Sex differences in the incidence of colorectal cancer:an exploration of oestrogen and progesterone receptors. Gut,1993，33(5):611.
9 Lointier P,Wildrick DM, Boman BM,et al. The effects of steroid hormones on a human colon cancer cell line in vitro. Anticancer Res，1992，12(4):1327.
10 Lointier P,Wildrick DM, Boman BM. Growth effects of tamoxifen on colon carcinoma cells and cultured cells from normal colonic mucosa. Anticancer Res, 1992，(5):1523., 百拇医药