实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠室周器官的形态学观察
作者：曹翠丽 马常升 杨天祝
单位：河北医科大学基础医学研究所神经生物学研究室(石家庄 050017)
关键词：室周器官/细胞学；脑脊髓炎，变应性；脑脊髓炎，实验性变应性；大鼠
河北医科大学学报000112分类号：R512.3▲
室周器官(circumventricular organs，CVOs)是位于第3、4脑室壁上缺乏血脑屏障的8个微小器官，包括终板血管器、穹隆下器、正中隆起、连合下器、最后区、垂体后叶、漏斗柄和松果体隐窝。脉络丛也是相对缺乏血脑屏障的器官,不少人推测，CVOs缺乏血脑屏障，可能是血携免疫信息分子入脑的位点。1993年，朱长庚提出“脑-脑脊液神经体液回路”的概念，他认为脑脊液途径是“免疫-神经-内分泌网络”的重要联系途径。那么均接触脑脊液的CVOs是否也参与免疫信息的转导呢?我室以往研究发现，改变大鼠全身免疫状态，CVOs形态发生调变。本研究在脑内免疫状态改变情况下，即大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(experiment allergic encephalomyelitis, EAE)的不同时程(潜伏期、发病期、恢复期和恢复后期)，观察CVOs的结构变化。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料：实验用雌性Wistar大鼠，体质量180～230g 100只，由白求恩国际和平医院动物场提供,随机分为正常对照组和实验组各50只。豚鼠，体质量(400±10)g，性别不限，由本校动物中心提供。卡介苗原浆(80mg/ml)购自北京生物制品研究所。
1.2 方法：实验组，用50 %豚鼠脊髓生理盐水匀浆(质量/体积)和自制完全福氏佐剂(每ml含4mg卡介苗)制成免疫抗原，给大鼠4足垫内注射(0.4 ml/只)制备EAE模型;在接种后第7、14、21、28 d(潜伏期、发病期、恢复期、恢复后期)4个时间点,常规经心灌注固定，取脑和脊髓，分别以HE染色、扫描电镜(scanning electric microscope，SEM)观察脉络丛和穹隆下器以及脊髓的形态改变,正常对照组不做任何处理。
2 结 果
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2.1 一般观察：实验组在接种10 d后，动物出现尾张力降低，活动减少，食欲不振。在接种后12～18 d，大鼠出现双后肢瘫，脊髓腰骶段横切片HE染色显示，毛细血管扩张，可见典型的血管周袖套样炎性细胞浸润和脱髓鞘改变,前角运动神经元肿胀变性明显。
2.2 SEM观察和HE染色
2.2.1 正常对照组：侧脑室脉络丛上皮由一层立方形或矮柱形细胞组成，细胞核大而圆，位于胞体中央，胞浆均匀深染。穹隆下器中央区的室管膜细胞表面光滑，呈卵石样突入脑室腔。
2.2.2 实验组：CVOs在EAE潜伏期已有改变，侧脑室脉络丛上皮细胞中有空泡形成，在其脑室面可见炎性细胞附着。穹隆下器的室管膜细胞极度隆突，表面可见分泌物，大多处于分泌前期和分泌期。在EAE发病期，脉络丛上皮细胞中空泡形成更广泛，脑室面有大量炎性细胞附着，形态各异;SEM观察可见，脉络丛上皮细胞极度肿胀，其脑室面的微绒毛短而稀疏，表面有大量炎性细胞，如巨噬细胞和淋巴细胞。穹隆下器内毛细血管极度扩张，可见明显的炎性细胞浸润和胶质细胞增生;SEM观察可见穹隆下器的室管膜细胞表面有许多火山口样结构(直径1～3 μm不等)，并且凡是有此结构的细胞，其体积均较正常小，说明处于分泌后期,其上可见大量不同形态的巨噬细胞和淋巴细胞。在EAE恢复期，脉络丛结构略有好转，仍有大量淋巴细胞浸润，以巨噬细胞为主。此时，穹隆下器室管膜细胞表面光滑，其结构随临床症状的消失而恢复，到恢复后期，基本与正常结构一致，但仍存在炎性细胞浸润。
, 百拇医药
3 讨 论
本研究成功地制备出Wistar大鼠急性EAE模型，并且首次观察到CVOs在EAE不同时程的形态学改变，在国内外尚未见报道。本研究表明，在EAE这种局限在中枢神经系统的自身免疫性疾病发生过程中，CVOs形态结构改变显著，提示CVOs确实参与脑内免疫反应。另外，根据穹隆下器的室管膜细胞分泌状态改变，可以推测，在EAE发病潜伏期到发病期这段时间内，穹隆下器的分泌比较旺盛，由此提示CVOs可能参与免疫信息的转导。CVOs脑室面的明显形态结构改变，支持“脑-脑脊液神经体液回路”是神经免疫内分泌调节的重要组成部分这一观点。■
基金项目：河北省自然科学基金资助项目(No.398322)
收稿日期：1999-10-26, 百拇医药
单位：河北医科大学基础医学研究所神经生物学研究室(石家庄 050017)
关键词：室周器官/细胞学；脑脊髓炎，变应性；脑脊髓炎，实验性变应性；大鼠
河北医科大学学报000112分类号：R512.3▲
室周器官(circumventricular organs，CVOs)是位于第3、4脑室壁上缺乏血脑屏障的8个微小器官，包括终板血管器、穹隆下器、正中隆起、连合下器、最后区、垂体后叶、漏斗柄和松果体隐窝。脉络丛也是相对缺乏血脑屏障的器官,不少人推测，CVOs缺乏血脑屏障，可能是血携免疫信息分子入脑的位点。1993年，朱长庚提出“脑-脑脊液神经体液回路”的概念，他认为脑脊液途径是“免疫-神经-内分泌网络”的重要联系途径。那么均接触脑脊液的CVOs是否也参与免疫信息的转导呢?我室以往研究发现，改变大鼠全身免疫状态，CVOs形态发生调变。本研究在脑内免疫状态改变情况下，即大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(experiment allergic encephalomyelitis, EAE)的不同时程(潜伏期、发病期、恢复期和恢复后期)，观察CVOs的结构变化。
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1 材料和方法
1.1 材料：实验用雌性Wistar大鼠，体质量180～230g 100只，由白求恩国际和平医院动物场提供,随机分为正常对照组和实验组各50只。豚鼠，体质量(400±10)g，性别不限，由本校动物中心提供。卡介苗原浆(80mg/ml)购自北京生物制品研究所。
1.2 方法：实验组，用50 %豚鼠脊髓生理盐水匀浆(质量/体积)和自制完全福氏佐剂(每ml含4mg卡介苗)制成免疫抗原，给大鼠4足垫内注射(0.4 ml/只)制备EAE模型;在接种后第7、14、21、28 d(潜伏期、发病期、恢复期、恢复后期)4个时间点,常规经心灌注固定，取脑和脊髓，分别以HE染色、扫描电镜(scanning electric microscope，SEM)观察脉络丛和穹隆下器以及脊髓的形态改变,正常对照组不做任何处理。
2 结 果
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2.1 一般观察：实验组在接种10 d后，动物出现尾张力降低，活动减少，食欲不振。在接种后12～18 d，大鼠出现双后肢瘫，脊髓腰骶段横切片HE染色显示，毛细血管扩张，可见典型的血管周袖套样炎性细胞浸润和脱髓鞘改变,前角运动神经元肿胀变性明显。
2.2 SEM观察和HE染色
2.2.1 正常对照组：侧脑室脉络丛上皮由一层立方形或矮柱形细胞组成，细胞核大而圆，位于胞体中央，胞浆均匀深染。穹隆下器中央区的室管膜细胞表面光滑，呈卵石样突入脑室腔。
2.2.2 实验组：CVOs在EAE潜伏期已有改变，侧脑室脉络丛上皮细胞中有空泡形成，在其脑室面可见炎性细胞附着。穹隆下器的室管膜细胞极度隆突，表面可见分泌物，大多处于分泌前期和分泌期。在EAE发病期，脉络丛上皮细胞中空泡形成更广泛，脑室面有大量炎性细胞附着，形态各异;SEM观察可见，脉络丛上皮细胞极度肿胀，其脑室面的微绒毛短而稀疏，表面有大量炎性细胞，如巨噬细胞和淋巴细胞。穹隆下器内毛细血管极度扩张，可见明显的炎性细胞浸润和胶质细胞增生;SEM观察可见穹隆下器的室管膜细胞表面有许多火山口样结构(直径1～3 μm不等)，并且凡是有此结构的细胞，其体积均较正常小，说明处于分泌后期,其上可见大量不同形态的巨噬细胞和淋巴细胞。在EAE恢复期，脉络丛结构略有好转，仍有大量淋巴细胞浸润，以巨噬细胞为主。此时，穹隆下器室管膜细胞表面光滑，其结构随临床症状的消失而恢复，到恢复后期，基本与正常结构一致，但仍存在炎性细胞浸润。
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3 讨 论
本研究成功地制备出Wistar大鼠急性EAE模型，并且首次观察到CVOs在EAE不同时程的形态学改变，在国内外尚未见报道。本研究表明，在EAE这种局限在中枢神经系统的自身免疫性疾病发生过程中，CVOs形态结构改变显著，提示CVOs确实参与脑内免疫反应。另外，根据穹隆下器的室管膜细胞分泌状态改变，可以推测，在EAE发病潜伏期到发病期这段时间内，穹隆下器的分泌比较旺盛，由此提示CVOs可能参与免疫信息的转导。CVOs脑室面的明显形态结构改变，支持“脑-脑脊液神经体液回路”是神经免疫内分泌调节的重要组成部分这一观点。■
基金项目：河北省自然科学基金资助项目(No.398322)
收稿日期：1999-10-26, 百拇医药