半边旗中二萜类化合物5F对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响
作者：刘文 覃燕梅 梁念慈
单位：
刘文(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)；覃燕梅(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)；梁念慈(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)
关键词：半边旗；二萜类；血小板聚集；凝血酶
广东医学院学报000104 摘 要：目的：研究半边旗中二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19酸)对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响。方法：血小板悬液与5F孵育1 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用5 min，用血液凝集仪记录血小板聚集情况。结果：半边旗中二萜类化合物5F对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用。结论：半边旗中二萜类化合物5F具有抗血小板的作用。
, 百拇医药
分类号：R0629.61
文章编号：1005-4057(2000)01-0009-02
Effect of a diterpenoid compound 5F isolated from Pteris semipinnata L on aggregation of rabbit platelets induced by thrombin
Liu Wen,Qin Yanmei,Liang Nianci
(Institute of Biochemistry and Molecular Biology,Guangdong Medical College,Zhanjiang 524023)
Abstract：Objective：To study the effect of a diterpenoid compound 5F(ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic acid)isolated from Pteris semipinnata L(P.s L) on aggregation of rabbit platelets induced by thrombin.Methods：Suspensions of platelets were incubated with 5 F for 1 min,and then with thrombin(500 U/L) for 5 min platelet aggregation was analysed by aggregometer.Results：5 F had inhibitory effect on platelet aggregation.Conclusion：A diterpenoid compound 5 F isolated from P.s L has anti-platelet activity.
, http://www.100md.com
Key words：Pteris semipinnata L;diterpenoid;platelet aggregation;thrombin▲
半边旗(Pteris semipinnata L.PsL)为凤尾蕨科植物，广泛分布于我国南方，民间用于治疗菌痢，肝炎，肠炎，毒蛇咬伤等[1]。本课题组在筛选抗肿瘤药的过程中发现，半边旗的有效成分有强的抗肿瘤作用[2～5]。本文用比浊法研究半边旗中二萜类化合物 5 F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19酸，以下简称 5 F)对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 动物
家兔4只，♂♀兼用，体重(2.0±0.2)kg，由本院动物中心提供。
, http://www.100md.com
1.2 药物和试剂
半边旗中二萜类化合物 5 F(结构式如图1所示)由我所药物化学室分离纯化和鉴定。凝血酶、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(Hepes)购自 Sigma公司。其余为国产分析纯或生化纯试剂。
图1 5F的结构
1.3 仪器
TYXN-96Ⅰ多功能智能血液凝集仪，上海通用机电技术研究所。
1.4 血小板聚集实验
参照文献[6]：兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol/L柠檬酸钠，111 mmol/L葡萄糖，53 mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝，800 r/min离心 10 min，离心 2次，取上清，3000 r/min离心 15 min。沉淀中加 Tyrode-Hepes缓冲液(140 mmol/L氯化钠，5 mmol/L氯化钾，1 mmol/L氯化镁，10 mmol/L N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸，10 mmol/L葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为3×1011～4×1011/L。血小板聚集用血液凝集仪来测定。血小板悬液(0.2 mL)与药物孵育1 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用5 min，记录聚集情况，然后计算各药物组的抑制率：抑制率＝(对照组聚集率-药物组聚集率)/对照组聚集率×100%。
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1.5 统计学处理
实验数据的统计学处理采用F检验。
3 结果
半边旗中二萜类化合物 5 F对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用，见表1。
表1 不同浓度 5 F对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响 5 F 浓度
(c/μmol.L-1)
n
血小板1分钟聚集率
(
)%
, http://www.100md.com
抑制率/%
0
4
75.5±6*
80
4
42.3±4**
44
160
4
44.8±24**
41
, 百拇医药
320
4
13.1±13***
83
500
4
1.91±3.3***
97
*vs** P<0.05； *vs ***P<0.01
3 讨论
本文实验结果表明，半边旗中二萜类化合物5 F具有抑制凝血酶诱导血小板聚集的作用，随着5 F浓度的增大，对血小板聚集的抑制率也增加。5 F是一种含α，β-亚甲基环戊酮结构的对映贝壳杉烷类化合物，据文献报道[7]，含此结构的化合物具有较高的反应活性，可经 Michael加成反应，与含巯基的酶结合，导致酶失活，从而显示这类化合物的细胞毒作用。化合物5 F的D环恰好具有这一特殊的结构，这提示，5F可能直接作用于血小板中某些酶分子本身，从而使酶失活，显示出其抗血小板的活性。5 F抗血小板作用的机制还有待于进一步的研究。■
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基金项目：广东省重点学科资金资助，(编号：9306)和广东医学院青年资金资助(编号：青9901)
作者简介：刘文，男，1970年3月出生，学士，讲师
参考文献：
[1]丁恒山.中国药用孢子植物.上海：上海科技出版社，1982.104
[2]Li JH，He Ch W，Liang NC，et al.Effect of the antitumor compounds isolated from Pteris semipinnata L on DNA topoisomerases and cell cycle of HL-60 cells.Acta Pharmacol Sin，1999，20(6)：541～545
[3]李金华，梁念慈，莫丽儿，等.半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析.药学学报，1998，33(9)：641～644
, 百拇医药
[4]崔燎，张晓，梁念慈，等.一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究.中国药理学通报，1998，14(1)：50～52
[5]张晓，崔燎，田中信寿，等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究.药物化学，1997，32(1)：37～38
[6]Liu W，Song ZHJ，Liang NC，et al.Inhibitory effects of sodium quercetin monosulfate on pig platelet aggregation induced by thrombin.Acta Pharmacol Sin， 1999，20(7)：623～626
[7]Hall IH Lee KH，Mar EC.Antitunor agents，a proposed mechanism for inhibition of cancer grwoth by tenulin and helenalin and related cyclopentenones.J Med Chem，1977，20(3)：333～337
收稿日期：1999-09-10
修稿日期：1999-12-15, http://www.100md.com
单位：
刘文(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)；覃燕梅(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)；梁念慈(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)
关键词：半边旗；二萜类；血小板聚集；凝血酶
广东医学院学报000104 摘 要：目的：研究半边旗中二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19酸)对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响。方法：血小板悬液与5F孵育1 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用5 min，用血液凝集仪记录血小板聚集情况。结果：半边旗中二萜类化合物5F对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用。结论：半边旗中二萜类化合物5F具有抗血小板的作用。
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分类号：R0629.61
文章编号：1005-4057(2000)01-0009-02
Effect of a diterpenoid compound 5F isolated from Pteris semipinnata L on aggregation of rabbit platelets induced by thrombin
Liu Wen,Qin Yanmei,Liang Nianci
(Institute of Biochemistry and Molecular Biology,Guangdong Medical College,Zhanjiang 524023)
Abstract：Objective：To study the effect of a diterpenoid compound 5F(ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic acid)isolated from Pteris semipinnata L(P.s L) on aggregation of rabbit platelets induced by thrombin.Methods：Suspensions of platelets were incubated with 5 F for 1 min,and then with thrombin(500 U/L) for 5 min platelet aggregation was analysed by aggregometer.Results：5 F had inhibitory effect on platelet aggregation.Conclusion：A diterpenoid compound 5 F isolated from P.s L has anti-platelet activity.
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Key words：Pteris semipinnata L;diterpenoid;platelet aggregation;thrombin▲
半边旗(Pteris semipinnata L.PsL)为凤尾蕨科植物，广泛分布于我国南方，民间用于治疗菌痢，肝炎，肠炎，毒蛇咬伤等[1]。本课题组在筛选抗肿瘤药的过程中发现，半边旗的有效成分有强的抗肿瘤作用[2～5]。本文用比浊法研究半边旗中二萜类化合物 5 F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19酸，以下简称 5 F)对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 动物
家兔4只，♂♀兼用，体重(2.0±0.2)kg，由本院动物中心提供。
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1.2 药物和试剂
半边旗中二萜类化合物 5 F(结构式如图1所示)由我所药物化学室分离纯化和鉴定。凝血酶、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(Hepes)购自 Sigma公司。其余为国产分析纯或生化纯试剂。
图1 5F的结构
1.3 仪器
TYXN-96Ⅰ多功能智能血液凝集仪，上海通用机电技术研究所。
1.4 血小板聚集实验
参照文献[6]：兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol/L柠檬酸钠，111 mmol/L葡萄糖，53 mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝，800 r/min离心 10 min，离心 2次，取上清，3000 r/min离心 15 min。沉淀中加 Tyrode-Hepes缓冲液(140 mmol/L氯化钠，5 mmol/L氯化钾，1 mmol/L氯化镁，10 mmol/L N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸，10 mmol/L葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为3×1011～4×1011/L。血小板聚集用血液凝集仪来测定。血小板悬液(0.2 mL)与药物孵育1 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用5 min，记录聚集情况，然后计算各药物组的抑制率：抑制率＝(对照组聚集率-药物组聚集率)/对照组聚集率×100%。
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1.5 统计学处理
实验数据的统计学处理采用F检验。
3 结果
半边旗中二萜类化合物 5 F对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用，见表1。
表1 不同浓度 5 F对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响 5 F 浓度
(c/μmol.L-1)
n
血小板1分钟聚集率
(
)%, http://www.100md.com
抑制率/%
0
4
75.5±6*
80
4
42.3±4**
44
160
4
44.8±24**
41
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320
4
13.1±13***
83
500
4
1.91±3.3***
97
*vs** P<0.05； *vs ***P<0.01
3 讨论
本文实验结果表明，半边旗中二萜类化合物5 F具有抑制凝血酶诱导血小板聚集的作用，随着5 F浓度的增大，对血小板聚集的抑制率也增加。5 F是一种含α，β-亚甲基环戊酮结构的对映贝壳杉烷类化合物，据文献报道[7]，含此结构的化合物具有较高的反应活性，可经 Michael加成反应，与含巯基的酶结合，导致酶失活，从而显示这类化合物的细胞毒作用。化合物5 F的D环恰好具有这一特殊的结构，这提示，5F可能直接作用于血小板中某些酶分子本身，从而使酶失活，显示出其抗血小板的活性。5 F抗血小板作用的机制还有待于进一步的研究。■
, 百拇医药
基金项目：广东省重点学科资金资助，(编号：9306)和广东医学院青年资金资助(编号：青9901)
作者简介：刘文，男，1970年3月出生，学士，讲师
参考文献：
[1]丁恒山.中国药用孢子植物.上海：上海科技出版社，1982.104
[2]Li JH，He Ch W，Liang NC，et al.Effect of the antitumor compounds isolated from Pteris semipinnata L on DNA topoisomerases and cell cycle of HL-60 cells.Acta Pharmacol Sin，1999，20(6)：541～545
[3]李金华，梁念慈，莫丽儿，等.半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析.药学学报，1998，33(9)：641～644
, 百拇医药
[4]崔燎，张晓，梁念慈，等.一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究.中国药理学通报，1998，14(1)：50～52
[5]张晓，崔燎，田中信寿，等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究.药物化学，1997，32(1)：37～38
[6]Liu W，Song ZHJ，Liang NC，et al.Inhibitory effects of sodium quercetin monosulfate on pig platelet aggregation induced by thrombin.Acta Pharmacol Sin， 1999，20(7)：623～626
[7]Hall IH Lee KH，Mar EC.Antitunor agents，a proposed mechanism for inhibition of cancer grwoth by tenulin and helenalin and related cyclopentenones.J Med Chem，1977，20(3)：333～337
收稿日期：1999-09-10
修稿日期：1999-12-15, http://www.100md.com