HPLC法同时测定复方萘酚喹片中磷酸萘酚喹和甲氧苄啶的含量
作者：张玉英 潘锡强
单位：广州市药品检验所 广州 510160
关键词：HPLC；复方萘酚喹片；磷酸萘酚喹；甲氧苄啶
中国现代应用药学000618 摘要 目的：建立同时测定复方萘酚喹片中磷酸萘酚喹和甲氧苄啶含量的方法。方法：高效液相色谱法。固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-0.25%二乙胺(30∶70，混合后用磷酸调pH至2.5)；检测波长271nm。结果：线性范围：磷酸萘酚喹75.9～227.8μg/ml,r=0.9999，甲氧苄啶26.7～80.2μg/ml,r=0.9999；方法回收率：磷酸萘酚喹100.5%,RSD 0.3%,n=6,甲氧苄啶99.7%,RSD 0.7%,n=6。结论：该方法操作简便，结果准确，适用于该制剂的含量测定。
Simultaneos determination of naphthoquine phosphate and trimethoprim in compound naphthoquine tablets
, 百拇医药
Zhang Yuying(Zhang YY)，Pan Xiqiang(Pan XQ)
(Guangzhou Institute for Drug Control,Guangzhou 510160)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the HPLC method for simultaneos determination of naphthoquine phosphate and trimethoprim in compound naphthoquine tablets.METHODS:The HPLC method was developed under the following conditions:column,C18,the mobile phase was acetonitrile-0.25% diethylamine(30∶70,pH 2.5 adjusted with phosphoric acid),the wavelength of the UV detector was set at 271nm.RESULTS:The linear range was 75.9～227.8μg/ml,r=0.9999(naphthoquine phosphate) or 26.7～80.2μg/ml,r=0.9999(trimethoprim).The recovery was 100.5%,RSD 0.3%,n=6(naphthoquine phosphate) or 99.7%,RSD 0.7%,n=6(trimethoprim).CONCLUSION:The method was simple,accurate and suitable for quantitation analysis of the preparation.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC,compound naphthoquine tablets,naphthoquine phosphate,trimethoprim
复方萘酚喹片是新研制的抗疟药，有效成分有磷酸萘酚喹和甲氧苄啶等。前者的含量测定有非水滴定法[1]，但未见有HPLC法的报道；后者的含量测定有HPLC法[2～4]和非水滴定法[5]等。本文采用的HPLC法，可同时测定两者的含量，方法简便，定量准确，可用于该制剂的含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，C-R4A数据处理机。
1.2 试药
, http://www.100md.com
复方萘酚喹片及辅料(广州某研究单位提供)；磷酸萘酚喹对照品含量99.0%(上海第六制药厂，960405)，甲氧苄啶含量100.0%(广东制药厂，970402)；乙腈为色谱纯，二乙胺和磷酸为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.25%二乙胺(30∶70，混合后用磷酸调pH至2.5)；流速：1.0ml/min；检测波长271nm；进样量：20μl。在此色谱条件下，得色谱图见图1。
图1 HPLC色谱图
, 百拇医药
1-甲氧苄啶；2-磷酸萘酚喹
2.2 线性关系
取经105℃干燥至恒重的磷酸萘酚喹对照品和甲氧苄啶对照品适量，用流动相制成含磷酸萘酚喹75.9，106.3，151.8，182.2和227.8μg/ml及含甲氧苄啶26.7，37.4，53.4，64.1和80.2μg/ml的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对浓度进行线性回归，得线性回归方程：磷酸萘酚喹:Y=8.32×103X-1.21×104，r=0.9999(n=5)，线性范围：75.9～227.8μg/ml。
甲氧苄啶：Y=1.38×104X-4.43×103，r=0.9999(n=5)，线性范围：26.7～80.2μg/ml。
2.3 回收率试验
, 百拇医药
2.3.1 对照品溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品约10mg和磷酸萘酚喹对照品约30mg,精密称定，置200ml量瓶中，加流动相适量，超声振荡使溶解，放冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.3.2 回收溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品约8，10和12mg和磷酸萘酚喹对照品约24，30和36mg,精密称定，置200ml量瓶中，按处方配比，加入辅料，加流动相适量，置超声波浴中振荡30分钟，取出放冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为回收溶液。
2.3.3 测定法 精密量取对照品溶液和回收溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算甲氧苄啶和磷酸萘酚喹的回收率，结果见表1，平均回收率分别为99.7%,RSD 0.7%,n=6和100.5%,RSD 0.3%,n=6。
表1 回收率试验结果 编号
, http://www.100md.com
甲氧苄啶
磷酸萘酚喹
投入量/mg
测得量/mg
回收率/%
投入量/mg
测得量/mg
回收率/%
1
8.06
8.03
99.6
24.02
, http://www.100md.com
24.24
100.9
2
8.32
8.33
100.1
24.39
24.43
100.2
3
10.57
10.50
99.3
, http://www.100md.com
30.12
30.36
100.8
4
10.88
10.97
100.8
30.06
30.18
100.4
5
12.44
12.28
, http://www.100md.com
98.7
36.75
36.84
100.2
6
12.85
12.79
99.5
36.24
36.35
100.3
2.4 样品测定
取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于甲氧苄啶10mg)，置200ml量瓶中，加流动相适量，置超声波浴中振荡30min，取出放冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。精密量取对照品溶液(同2.3.1)和样品溶液各20μl，同2.3.3项下方法测定并计算含量，结果见表2。表2 样品含量测定结果/相当标示量的% 批 号
, 百拇医药
甲氧苄啶
磷酸萘酚喹
970326
97.3 96.7
101.3 100.6
970327
95.8 95.9
99.4 99.0
970616
95.2 95.0
98.4 99.4
2.5 精密度试验 取同一样品溶液，连续进样6次，记录甲氧苄啶和磷酸萘酚喹的峰面积，计算RSD分别为0.6%和0.7%(n=6)。
, http://www.100md.com
3 讨 论
3.1 波长的确定 取磷酸萘酚喹和甲氧苄啶对照品适量，用流动相制成适当浓度的溶液，在400～200nm波长范围分别扫描紫外吸收光谱，甲氧苄啶在271nm波长处有最大吸收，而磷酸萘酚喹在此波长处为接近峰谷，考虑到复方制剂中磷酸萘酚喹的标示量是甲氧苄啶的3倍，为协调两者的吸收，选择271nm作为检测波长。
3.2 流动相的选择 参考甲氧苄啶的HPLC测定方法[2～4]，经调整并筛选出乙腈-0.25%二乙胺(30∶70，混合后用磷酸调pH至2.5)为流动相，效果较佳。
3.3 色谱柱的比较 试验了两种牌号的色谱柱(YWG C18 10μm 250×4.6mm和EC150/4.6 Nucleosil 100-5 C18)，柱效见表3。
表3 不同牌号色谱柱的柱效比较 色谱柱
, 百拇医药
参数
(Ⅰ)YWG C18 10μm
250×4.6mm
(Ⅱ)EC150/4.6 Nucleosil
100-5 C18
N
R
T
N
R
T
甲氧苄啶
, 百拇医药
4657
5.4
1.6
3842
6.7
1.8
磷酸萘酚喹
2209
5.4
2.7
3365
6.7
2.2
, 百拇医药
从柱效比较来看，色谱柱(Ⅱ)优于色谱柱(Ⅰ)，但前者为原装进口高效柱，其应用尚不广泛。
参考文献
1，卫生部药品标准.WS-84(X-67)-93.
2，全红，董燕.高效液相色谱法测定增效联磺片中三组分的含量.山西预防医学杂志，1997，6(2)∶128.
3，Mcnally V,Lenehan T,Kelly MT,et al.High-performance liquid-chromatographic determination of trimethoprim and sulphadiazine in medicated fish feedstock.Anal Lett,1990,23(12)∶2215.
4，Alvinerie M,Sutra JF,Galtier P.High-performance liquid-chromatographic determination of basic drugs,trimethoprim and thiabendazole,using a silanol-deactivated column.Analysis,1991,19(8)∶244.
5，中国药典.二部.1995∶142.
收稿日期：1999-04-08, http://www.100md.com
单位：广州市药品检验所 广州 510160
关键词：HPLC；复方萘酚喹片；磷酸萘酚喹；甲氧苄啶
中国现代应用药学000618 摘要 目的：建立同时测定复方萘酚喹片中磷酸萘酚喹和甲氧苄啶含量的方法。方法：高效液相色谱法。固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-0.25%二乙胺(30∶70，混合后用磷酸调pH至2.5)；检测波长271nm。结果：线性范围：磷酸萘酚喹75.9～227.8μg/ml,r=0.9999，甲氧苄啶26.7～80.2μg/ml,r=0.9999；方法回收率：磷酸萘酚喹100.5%,RSD 0.3%,n=6,甲氧苄啶99.7%,RSD 0.7%,n=6。结论：该方法操作简便，结果准确，适用于该制剂的含量测定。
Simultaneos determination of naphthoquine phosphate and trimethoprim in compound naphthoquine tablets
, 百拇医药
Zhang Yuying(Zhang YY)，Pan Xiqiang(Pan XQ)
(Guangzhou Institute for Drug Control,Guangzhou 510160)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the HPLC method for simultaneos determination of naphthoquine phosphate and trimethoprim in compound naphthoquine tablets.METHODS:The HPLC method was developed under the following conditions:column,C18,the mobile phase was acetonitrile-0.25% diethylamine(30∶70,pH 2.5 adjusted with phosphoric acid),the wavelength of the UV detector was set at 271nm.RESULTS:The linear range was 75.9～227.8μg/ml,r=0.9999(naphthoquine phosphate) or 26.7～80.2μg/ml,r=0.9999(trimethoprim).The recovery was 100.5%,RSD 0.3%,n=6(naphthoquine phosphate) or 99.7%,RSD 0.7%,n=6(trimethoprim).CONCLUSION:The method was simple,accurate and suitable for quantitation analysis of the preparation.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC,compound naphthoquine tablets,naphthoquine phosphate,trimethoprim
复方萘酚喹片是新研制的抗疟药，有效成分有磷酸萘酚喹和甲氧苄啶等。前者的含量测定有非水滴定法[1]，但未见有HPLC法的报道；后者的含量测定有HPLC法[2～4]和非水滴定法[5]等。本文采用的HPLC法，可同时测定两者的含量，方法简便，定量准确，可用于该制剂的含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，C-R4A数据处理机。
1.2 试药
, http://www.100md.com
复方萘酚喹片及辅料(广州某研究单位提供)；磷酸萘酚喹对照品含量99.0%(上海第六制药厂，960405)，甲氧苄啶含量100.0%(广东制药厂，970402)；乙腈为色谱纯，二乙胺和磷酸为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.25%二乙胺(30∶70，混合后用磷酸调pH至2.5)；流速：1.0ml/min；检测波长271nm；进样量：20μl。在此色谱条件下，得色谱图见图1。
图1 HPLC色谱图
, 百拇医药
1-甲氧苄啶；2-磷酸萘酚喹
2.2 线性关系
取经105℃干燥至恒重的磷酸萘酚喹对照品和甲氧苄啶对照品适量，用流动相制成含磷酸萘酚喹75.9，106.3，151.8，182.2和227.8μg/ml及含甲氧苄啶26.7，37.4，53.4，64.1和80.2μg/ml的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对浓度进行线性回归，得线性回归方程：磷酸萘酚喹:Y=8.32×103X-1.21×104，r=0.9999(n=5)，线性范围：75.9～227.8μg/ml。
甲氧苄啶：Y=1.38×104X-4.43×103，r=0.9999(n=5)，线性范围：26.7～80.2μg/ml。
2.3 回收率试验
, 百拇医药
2.3.1 对照品溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品约10mg和磷酸萘酚喹对照品约30mg,精密称定，置200ml量瓶中，加流动相适量，超声振荡使溶解，放冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.3.2 回收溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品约8，10和12mg和磷酸萘酚喹对照品约24，30和36mg,精密称定，置200ml量瓶中，按处方配比，加入辅料，加流动相适量，置超声波浴中振荡30分钟，取出放冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为回收溶液。
2.3.3 测定法 精密量取对照品溶液和回收溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算甲氧苄啶和磷酸萘酚喹的回收率，结果见表1，平均回收率分别为99.7%,RSD 0.7%,n=6和100.5%,RSD 0.3%,n=6。
表1 回收率试验结果 编号
, http://www.100md.com
甲氧苄啶
磷酸萘酚喹
投入量/mg
测得量/mg
回收率/%
投入量/mg
测得量/mg
回收率/%
1
8.06
8.03
99.6
24.02
, http://www.100md.com
24.24
100.9
2
8.32
8.33
100.1
24.39
24.43
100.2
3
10.57
10.50
99.3
, http://www.100md.com
30.12
30.36
100.8
4
10.88
10.97
100.8
30.06
30.18
100.4
5
12.44
12.28
, http://www.100md.com
98.7
36.75
36.84
100.2
6
12.85
12.79
99.5
36.24
36.35
100.3
2.4 样品测定
取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于甲氧苄啶10mg)，置200ml量瓶中，加流动相适量，置超声波浴中振荡30min，取出放冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。精密量取对照品溶液(同2.3.1)和样品溶液各20μl，同2.3.3项下方法测定并计算含量，结果见表2。表2 样品含量测定结果/相当标示量的% 批 号
, 百拇医药
甲氧苄啶
磷酸萘酚喹
970326
97.3 96.7
101.3 100.6
970327
95.8 95.9
99.4 99.0
970616
95.2 95.0
98.4 99.4
2.5 精密度试验 取同一样品溶液，连续进样6次，记录甲氧苄啶和磷酸萘酚喹的峰面积，计算RSD分别为0.6%和0.7%(n=6)。
, http://www.100md.com
3 讨 论
3.1 波长的确定 取磷酸萘酚喹和甲氧苄啶对照品适量，用流动相制成适当浓度的溶液，在400～200nm波长范围分别扫描紫外吸收光谱，甲氧苄啶在271nm波长处有最大吸收，而磷酸萘酚喹在此波长处为接近峰谷，考虑到复方制剂中磷酸萘酚喹的标示量是甲氧苄啶的3倍，为协调两者的吸收，选择271nm作为检测波长。
3.2 流动相的选择 参考甲氧苄啶的HPLC测定方法[2～4]，经调整并筛选出乙腈-0.25%二乙胺(30∶70，混合后用磷酸调pH至2.5)为流动相，效果较佳。
3.3 色谱柱的比较 试验了两种牌号的色谱柱(YWG C18 10μm 250×4.6mm和EC150/4.6 Nucleosil 100-5 C18)，柱效见表3。
表3 不同牌号色谱柱的柱效比较 色谱柱
, 百拇医药
参数
(Ⅰ)YWG C18 10μm
250×4.6mm
(Ⅱ)EC150/4.6 Nucleosil
100-5 C18
N
R
T
N
R
T
甲氧苄啶
, 百拇医药
4657
5.4
1.6
3842
6.7
1.8
磷酸萘酚喹
2209
5.4
2.7
3365
6.7
2.2
, 百拇医药
从柱效比较来看，色谱柱(Ⅱ)优于色谱柱(Ⅰ)，但前者为原装进口高效柱，其应用尚不广泛。
参考文献
1，卫生部药品标准.WS-84(X-67)-93.
2，全红，董燕.高效液相色谱法测定增效联磺片中三组分的含量.山西预防医学杂志，1997，6(2)∶128.
3，Mcnally V,Lenehan T,Kelly MT,et al.High-performance liquid-chromatographic determination of trimethoprim and sulphadiazine in medicated fish feedstock.Anal Lett,1990,23(12)∶2215.
4，Alvinerie M,Sutra JF,Galtier P.High-performance liquid-chromatographic determination of basic drugs,trimethoprim and thiabendazole,using a silanol-deactivated column.Analysis,1991,19(8)∶244.
5，中国药典.二部.1995∶142.
收稿日期：1999-04-08, http://www.100md.com