狭序唐松草中三类生物碱对血小板聚集的影响
作者：田泽 高光耀 杨峻山 李玲玲 肖培根
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究 所 北京100094
关键词：狭序唐松草；生物碱；血小板聚集
中草药001120
摘 要 目的：研究狭序唐松草中三类生物碱BBI、ABI、AP的抗血 小板聚集作用。方法：采用比浊法进行体外抗血小板聚集研究。结果：BBI类和ABI类能够抑 制ADP、Coll诱导的大鼠血小板聚集，AP类与正常对照相比则无显著差异。结论：BBI类和AB I类具有抗血小板聚集作用，且BBI类作用强于ABI类，AP类则几乎无作用。
Effects of Three Kinds of Alkaloids in Thalictrum atrip lex on Rat Platelet Aggregation
, 百拇医药
Tian Ze Gao Guangyao Yang Junsh an Li Lingling and Xiao Peigen
(Institute of Medicinal Plant, Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Abstract Inhibition of platelet aggregation by aporphine (A P), bio-benzyl-isoquinoline (BBI) and aporphine-benzyl-isoquinoline (ABI) al kaloids in Thalictrum atriplex Finet et Gagnep. in vitro was studied by turbidimetry. Results of the study sho wed that both BBI and ABI alkaloids could inhibit ADP and collagen induced plate let aggregation, while the AP alkaloids was devoid of such action. In conclusio n, the al kaloids of BBI and ABI types have the effect of antiplatelet aggregation, with B BI showing the strongest activity， ABI the next and AP almost without any effec t.
, 百拇医药
Key words Thalictrum atriplex Finet et Gagnep. al kaloids platelet aggregation
狭序唐松草Thalictrum atriplex Finet et Gagnep 是一种分布于中国西 南部高原的 民间草药和藏药，从其地上部分分离出阿朴菲(aporphine, AP)和阿朴菲-苄基异喹啉(apor phine-benzylisoquinoline, ABI)类生物碱[1]，从其地下根部分离出双苄基异喹 啉(bisbenzylisoquinoline, BBI)类生物碱[2]。Schiff曾归纳了60个生物碱类成 分的生理活性，其中BBI类生物碱有抑制血小板聚集作用[3]。因此，我们系统地对 狭序唐松草中主要生物碱成分抗血小板聚集作用进行了研究。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 动物：雄性Wistar大鼠，体重(300±20) g，中国预防医学科学院流行病微生物研究 所，合格证号：01-3008。
1.2 药物：生物碱，纯度>99%，高光耀博士提供；枸橼酸钠，分析纯，广州化学试剂厂 ；二磷酸腺苷(ADP)，Sigma产品：胶原(Coll)，取大鼠皮肤自制。
1.3 仪器：BS634型血小板聚集仪，北京生化制药厂；微量高速离心机，航空航天部华兴 航空机轮公司；普通离心机。
1.4 实验方法：按常规制备PRP、PPP，用PPP调整PRP使其血小板数在2×108个/毫升左 右，试管内给药，观察药物对ADP(0.1 mg/mL,25 μL)、Coll(0.2 g/mL, 25 μL)诱导的 血小板聚集的作用，并计算聚集抑制百分率。
聚集抑制百分率(%)=(对照聚集百分率-药物聚集百分率)/对照聚集百分率 [4]
, 百拇医药
2 结果
2.1 BBI类生物碱对血小板聚集的抑制作用：4个BBI类生物碱对ADP和Coll诱导的血小板聚 集均有不同程度的抑制作用(21.03%～84.18%,5～10 μ g/mL)，并可延缓Coll诱导的大鼠 血小板聚集(延长39～135 s,5～10 μ g/mL),尤以化合物IX和XXII为强，表明该类生物碱 具有潜在的抗血小板聚集活性。见表1。
表1 BBI类生物碱对血小板聚集的影响(
±s) 诱导剂
组别
终浓度
抑制率(%)
ADP
, 百拇医药
R-Ⅰ*
5
28.52△△△
R-Ⅲ*
5
28.88△△△
Ⅸ(thaliatriplexine)
5
66.70△△△
XXII(thalirugidine)
5
, 百拇医药
55.91△△△
Coll
R-Ⅰ*
5
-
R-Ⅰ*
10
21.03△△△
R-Ⅲ*
5
-
R-Ⅲ*
, 百拇医药
10
84.18△△△
Ⅸ(thaliatriplexine)
5
69.35△△△
XXII(thalirugidine)
5
61.48△△△
与对照相比：△△△P<0.001；*表示新化合物待 发表
2.2 AP类生物碱对血小板聚集的影响：4个AP类生物碱在小剂量时对ADP和Coll诱导的血小 板聚集几乎均无作用，大剂量时IV和XV对血小板聚集有些抑制作用。见表2。
, 百拇医药
表2 AP类生物碱对血板聚集的影响(x±s) 诱导剂
组别
终浓度
抑制率(%)
ADP
Ⅰ(N-demethylthalphenine)
5
-
10
-
Ⅳ(thaliglucine)
5
, 百拇医药
7.75
10
55.19△△△
XV(N-methyllauotetanine)
5
13.76△
10
29.00△△△
XVI(isoboldine)
5
5.04
, http://www.100md.com 10
3.79
Coll
Ⅰ(N-demethylthalphenine)
5
-
10
5.96
Ⅳ(thaliglucine)
5
4.13
10
23.83△△△
, 百拇医药
XV(N-methyllauotetanine)
5
5.57
10
14.11△
XVI(isoboldine)
5
-
10
1.47
与对照相比：△P<0.05 △△△P<0.001
, 百拇医药
2.3 ABI类生物碱对血小板聚集的影响：6个ABI类生物碱对ADP和Coll诱导的血小板聚集在 小剂量(5 μ g/mL)时作用不明显或无作用，在大剂量(10 μ g/mL)时抑制作用较强(34.1% ～96.5%)，提示该类生物碱在一定浓度时仍具有抗血小板聚集作用。见表3。
表3 ABI类生物碱对血小板聚集的影响(
±s) 诱导剂
组别
终浓度
抑制率(%)
ADP
Ⅱ(dehydrothalifaberine)
, 百拇医药 5
5.48
10
34.13△△△
Ⅲ(thalifaberine)
5
13.41△
10
80.51△△△
VⅢ*
5
10.59△
, http://www.100md.com
10
83.37△△△
X(thalifaretine)
5
-
10
53.45△△△
XⅢ(thalifaretine)
5
-
10
69.50△△△
, 百拇医药
XVII*
5
3.51
10
59.81△△△
Coll
Ⅱ(dehydrothalifaberine)
10
50.70△△△
Ⅲ(thalifaberine)
10
, 百拇医药 94.35△△△
VIII*
10
93.50△△△
X(thalifaretine)
10
90.86△△△
XIII(thalifaretine)
10
96.46△△△
XVII*
, http://www.100md.com
10
95.78△△△
与对照相比：△P<0.05 △△△P<0.001； *新化合物待发表
3 讨论
狭序唐松草中不同结构类型的生物碱(结构见图1)对ADP、Coll诱导的血小板聚集的抑制作用 明显不同：AP作用较弱或基本无作用；ABI在大剂量(10 μ g/mL)时抑制作用明显，小剂量 (5 μg/mL)时基本无作用；BBI在小剂量(5 μg/mL)时即作用明显，并可延 缓Coll诱导的血小板聚集，提示在抗血小板聚集方面BBI、ABI二聚物强于AP类 单聚物；二聚物中BBI强于ABI，BBI中具有两个N-CH3和饱和异喹啉的IX，XXII和R-III 明显强于只有一个N-CH3和不饱和异喹啉环的R-I。这为进一步研究异喹啉二聚生物碱 的结构与抑制血小板聚集作用之间的关系提供了重要依据。
, 百拇医药
图1 3种不同类型生物碱结构骨架
其它科属的BBI类生物碱甲基莲心碱(neferine)、粉防己碱(tetrandrine)和蝙蝠葛碱(dauri cine)等亦能够抑制血小板聚集，大多数此类生物碱具有Ca2+拮抗作用[2] ，由于血小板内Ca2+下降[5]或拮抗CaM从而抑制血小板PLA2的激活和花 生四烯酸代谢途径而起到抑制血小板聚集作用[6，7]。狭序唐松草中异喹啉生物碱 的抗血小板聚集作用是否与Ca2+拮抗有关，有待进一步研究。
Address： Tian Ze, Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Acad emy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Beijing
, 百拇医药
国家自然科学基金资助课题，编号第39570085号 田泽 1990年毕业于原北京医科大学药学院 (现北京大学)，获学士学位；协和医科大学在读硕士，助理研究员，研究方向为心血管药理 。参加研制的降糖药盐酸二甲双胍已获生产证书，参加研制的“肾茶”获民族药新药证书和 云南省科技进步三等奖，作为第一、二作者发表论文10余篇。
参 考 文 献
1，高光耀，王立为，陈四保，等.中国药学杂志，1999，34(3)：157
2，高光耀，肖培根.天然产物研究与开发，1999，11(3)：96
3，Paul L, Schiff J R.J Nat Prod, 1987, 50(4):529；1991，54(3)：645
4，徐叔云，卞如廉，陈 修，等.药理实验方法学.第二版.北京：人民卫生出版 社，1991：1121
5，喻晶，胡文淑.中国药理学与毒理学杂志，1996，10(2)：120
6，钱月明，黄戍华.中国药理学报，1989，10(1)：61
7，佟丽，岳天立.药学学报，1989，24(2)：85
(2000-02-24收稿), http://www.100md.com
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究 所 北京100094
关键词：狭序唐松草；生物碱；血小板聚集
中草药001120
摘 要 目的：研究狭序唐松草中三类生物碱BBI、ABI、AP的抗血 小板聚集作用。方法：采用比浊法进行体外抗血小板聚集研究。结果：BBI类和ABI类能够抑 制ADP、Coll诱导的大鼠血小板聚集，AP类与正常对照相比则无显著差异。结论：BBI类和AB I类具有抗血小板聚集作用，且BBI类作用强于ABI类，AP类则几乎无作用。
Effects of Three Kinds of Alkaloids in Thalictrum atrip lex on Rat Platelet Aggregation
, 百拇医药
Tian Ze Gao Guangyao Yang Junsh an Li Lingling and Xiao Peigen
(Institute of Medicinal Plant, Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Abstract Inhibition of platelet aggregation by aporphine (A P), bio-benzyl-isoquinoline (BBI) and aporphine-benzyl-isoquinoline (ABI) al kaloids in Thalictrum atriplex Finet et Gagnep. in vitro was studied by turbidimetry. Results of the study sho wed that both BBI and ABI alkaloids could inhibit ADP and collagen induced plate let aggregation, while the AP alkaloids was devoid of such action. In conclusio n, the al kaloids of BBI and ABI types have the effect of antiplatelet aggregation, with B BI showing the strongest activity， ABI the next and AP almost without any effec t.
, 百拇医药
Key words Thalictrum atriplex Finet et Gagnep. al kaloids platelet aggregation
狭序唐松草Thalictrum atriplex Finet et Gagnep 是一种分布于中国西 南部高原的 民间草药和藏药，从其地上部分分离出阿朴菲(aporphine, AP)和阿朴菲-苄基异喹啉(apor phine-benzylisoquinoline, ABI)类生物碱[1]，从其地下根部分离出双苄基异喹 啉(bisbenzylisoquinoline, BBI)类生物碱[2]。Schiff曾归纳了60个生物碱类成 分的生理活性，其中BBI类生物碱有抑制血小板聚集作用[3]。因此，我们系统地对 狭序唐松草中主要生物碱成分抗血小板聚集作用进行了研究。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 动物：雄性Wistar大鼠，体重(300±20) g，中国预防医学科学院流行病微生物研究 所，合格证号：01-3008。
1.2 药物：生物碱，纯度>99%，高光耀博士提供；枸橼酸钠，分析纯，广州化学试剂厂 ；二磷酸腺苷(ADP)，Sigma产品：胶原(Coll)，取大鼠皮肤自制。
1.3 仪器：BS634型血小板聚集仪，北京生化制药厂；微量高速离心机，航空航天部华兴 航空机轮公司；普通离心机。
1.4 实验方法：按常规制备PRP、PPP，用PPP调整PRP使其血小板数在2×108个/毫升左 右，试管内给药，观察药物对ADP(0.1 mg/mL,25 μL)、Coll(0.2 g/mL, 25 μL)诱导的 血小板聚集的作用，并计算聚集抑制百分率。
聚集抑制百分率(%)=(对照聚集百分率-药物聚集百分率)/对照聚集百分率 [4]
, 百拇医药
2 结果
2.1 BBI类生物碱对血小板聚集的抑制作用：4个BBI类生物碱对ADP和Coll诱导的血小板聚 集均有不同程度的抑制作用(21.03%～84.18%,5～10 μ g/mL)，并可延缓Coll诱导的大鼠 血小板聚集(延长39～135 s,5～10 μ g/mL),尤以化合物IX和XXII为强，表明该类生物碱 具有潜在的抗血小板聚集活性。见表1。
表1 BBI类生物碱对血小板聚集的影响(
±s) 诱导剂组别
终浓度
抑制率(%)
ADP
, 百拇医药
R-Ⅰ*
5
28.52△△△
R-Ⅲ*
5
28.88△△△
Ⅸ(thaliatriplexine)
5
66.70△△△
XXII(thalirugidine)
5
, 百拇医药
55.91△△△
Coll
R-Ⅰ*
5
-
R-Ⅰ*
10
21.03△△△
R-Ⅲ*
5
-
R-Ⅲ*
, 百拇医药
10
84.18△△△
Ⅸ(thaliatriplexine)
5
69.35△△△
XXII(thalirugidine)
5
61.48△△△
与对照相比：△△△P<0.001；*表示新化合物待 发表
2.2 AP类生物碱对血小板聚集的影响：4个AP类生物碱在小剂量时对ADP和Coll诱导的血小 板聚集几乎均无作用，大剂量时IV和XV对血小板聚集有些抑制作用。见表2。
, 百拇医药
表2 AP类生物碱对血板聚集的影响(x±s) 诱导剂
组别
终浓度
抑制率(%)
ADP
Ⅰ(N-demethylthalphenine)
5
-
10
-
Ⅳ(thaliglucine)
5
, 百拇医药
7.75
10
55.19△△△
XV(N-methyllauotetanine)
5
13.76△
10
29.00△△△
XVI(isoboldine)
5
5.04
, http://www.100md.com 10
3.79
Coll
Ⅰ(N-demethylthalphenine)
5
-
10
5.96
Ⅳ(thaliglucine)
5
4.13
10
23.83△△△
, 百拇医药
XV(N-methyllauotetanine)
5
5.57
10
14.11△
XVI(isoboldine)
5
-
10
1.47
与对照相比：△P<0.05 △△△P<0.001
, 百拇医药
2.3 ABI类生物碱对血小板聚集的影响：6个ABI类生物碱对ADP和Coll诱导的血小板聚集在 小剂量(5 μ g/mL)时作用不明显或无作用，在大剂量(10 μ g/mL)时抑制作用较强(34.1% ～96.5%)，提示该类生物碱在一定浓度时仍具有抗血小板聚集作用。见表3。
表3 ABI类生物碱对血小板聚集的影响(
±s) 诱导剂组别
终浓度
抑制率(%)
ADP
Ⅱ(dehydrothalifaberine)
, 百拇医药 5
5.48
10
34.13△△△
Ⅲ(thalifaberine)
5
13.41△
10
80.51△△△
VⅢ*
5
10.59△
, http://www.100md.com
10
83.37△△△
X(thalifaretine)
5
-
10
53.45△△△
XⅢ(thalifaretine)
5
-
10
69.50△△△
, 百拇医药
XVII*
5
3.51
10
59.81△△△
Coll
Ⅱ(dehydrothalifaberine)
10
50.70△△△
Ⅲ(thalifaberine)
10
, 百拇医药 94.35△△△
VIII*
10
93.50△△△
X(thalifaretine)
10
90.86△△△
XIII(thalifaretine)
10
96.46△△△
XVII*
, http://www.100md.com
10
95.78△△△
与对照相比：△P<0.05 △△△P<0.001； *新化合物待发表
3 讨论
狭序唐松草中不同结构类型的生物碱(结构见图1)对ADP、Coll诱导的血小板聚集的抑制作用 明显不同：AP作用较弱或基本无作用；ABI在大剂量(10 μ g/mL)时抑制作用明显，小剂量 (5 μg/mL)时基本无作用；BBI在小剂量(5 μg/mL)时即作用明显，并可延 缓Coll诱导的血小板聚集，提示在抗血小板聚集方面BBI、ABI二聚物强于AP类 单聚物；二聚物中BBI强于ABI，BBI中具有两个N-CH3和饱和异喹啉的IX，XXII和R-III 明显强于只有一个N-CH3和不饱和异喹啉环的R-I。这为进一步研究异喹啉二聚生物碱 的结构与抑制血小板聚集作用之间的关系提供了重要依据。
, 百拇医药
图1 3种不同类型生物碱结构骨架
其它科属的BBI类生物碱甲基莲心碱(neferine)、粉防己碱(tetrandrine)和蝙蝠葛碱(dauri cine)等亦能够抑制血小板聚集，大多数此类生物碱具有Ca2+拮抗作用[2] ，由于血小板内Ca2+下降[5]或拮抗CaM从而抑制血小板PLA2的激活和花 生四烯酸代谢途径而起到抑制血小板聚集作用[6，7]。狭序唐松草中异喹啉生物碱 的抗血小板聚集作用是否与Ca2+拮抗有关，有待进一步研究。
Address： Tian Ze, Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Acad emy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Beijing
, 百拇医药
国家自然科学基金资助课题，编号第39570085号 田泽 1990年毕业于原北京医科大学药学院 (现北京大学)，获学士学位；协和医科大学在读硕士，助理研究员，研究方向为心血管药理 。参加研制的降糖药盐酸二甲双胍已获生产证书，参加研制的“肾茶”获民族药新药证书和 云南省科技进步三等奖，作为第一、二作者发表论文10余篇。
参 考 文 献
1，高光耀，王立为，陈四保，等.中国药学杂志，1999，34(3)：157
2，高光耀，肖培根.天然产物研究与开发，1999，11(3)：96
3，Paul L, Schiff J R.J Nat Prod, 1987, 50(4):529；1991，54(3)：645
4，徐叔云，卞如廉，陈 修，等.药理实验方法学.第二版.北京：人民卫生出版 社，1991：1121
5，喻晶，胡文淑.中国药理学与毒理学杂志，1996，10(2)：120
6，钱月明，黄戍华.中国药理学报，1989，10(1)：61
7，佟丽，岳天立.药学学报，1989，24(2)：85
(2000-02-24收稿), http://www.100md.com