白芍煎剂在大鼠体内的药物动力学
作者：项琪 程刚 汤洁 陈济民
单位：沈阳药科大学药学系(项琪 程刚 陈济民)；沈阳市康利制药厂(汤洁)
关键词：白芍；芍药苷；药物动力学；生物利用度
沈阳药科大学学报990405 摘 要 采用高效液相色谱法测定大鼠静脉注射芍药苷和灌胃给予白芍煎剂后血浆中芍药苷浓度，静脉注射后的数据经3P87处理，灌胃后的数据以非隔室模型处理.结果表明大鼠静脉注射芍药苷(15 mg/kg)后，血药浓度-时间曲线符合二室模型，药动学参数为T1/2α=2.6 min，T1/2β=27.4 min.大鼠灌胃白芍煎剂(相当于芍药苷850 mg/kg)后，生物利用度为F=3.12%，Tmax=102 min,Cmax=9.93 mg/L.大鼠灌胃白芍煎剂后芍药苷的绝对生物利用度仅为3%，提示芍药苷有可能发生了生物转化.
, 百拇医药
分类号 R963
Pharmacokinetic Study on the Decoctum Paeoniae in Rats
Xiang Qi,Cheng Gang,Tang Jie,Chen Jimin
Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract The absolute bioavailability of paeoniflorin after administration of the Decoetum Paeoniae in rats was studied.The plasma concentration of paeoniflorin was detected by HPLC.The plasma concentration of paeoniflorin after intravenous administration at the dose of 15 mg/kg rapidly decreased.The terminal half-life was 27.4 min.The drug was found to conform to a two-compartment model after intravenous administration.When given orally with the Decoctum Paeoniae Rad.decoction,the absolute bioavaliability value(F)determined by the AUC was 3.12%.The Tmax was 102 min,Cmax was 9.93 mg/L.The absolute bioavailability values were very low,which suggested it had been metabolized.
, 百拇医药
Key words Decoctum Paeoniae;paeoniflorin;pharmacokinetic;bioavailability
白芍为毛莨科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根，性微寒，味苦酸，入肝、脾经，能养血敛阴，柔肝止痛，其主要成分有芍药苷(Paeonflorin,PF)、羟基芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等.白芍煎剂口服后体内药动学研究尚未见文献报道.作者建立了大鼠血浆中芍药苷含量测定的反相高效液相色谱法，并用该法研究了白芍煎剂中芍药苷在大鼠体内药物动力学.
1 仪器与试剂
动物：Wistar大鼠(250～350 g，由本校实验动物中心提供).药品：芍药苷标准品(中国药品生物制品检定所)；芍药苷纯品(本校有机合成实验室提供)；香兰素(分析纯，沈阳市试剂三厂).试剂：甲醇(色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司).主要仪器：Waters HPLC仪：510泵；484紫外检测器；U6k进样阀；Baseline 810色谱工作站.
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 血浆中芍药苷的HPLC分析
色谱条件：流动相：V(甲醇)∶V(水)=40∶60；流速：0.8 mL/min；色谱柱：Spherisorb C18(10 μm，200 mm×4.6 mm，中国科学院大连化学物理所)；紫外检测波长：231 nm.
准确吸取大鼠血浆0.1 mL置5 mL锥形试管中，加入100 mg/L香兰素内标液10 μL，混匀后加入甲醇400 μL，振荡，离心(2 500 r/min,5min)，吸取上清液进样20 μL.
2.2 血浆中PF的HPLC分析方法认证(Validation)〔1〕
2.2.1 HPLC分析方法的专属性
, 百拇医药
通过大鼠空白血浆的色谱图，与血浆中加入PF和内标物得到的色谱图比较，证明血浆中内源性物质不干扰测定.在选定的色谱条件下，PF与内标物达到良好的分离效果(图1).
Fig.1 Chromatography of paeoniflorin(PF)
A—Blank plasma; B—Blank plasma spiked with PF and ISD(internal standard);
C—A real plasma sample(1-PF;2-ISD)
2.2.2 标准曲线
准确吸取PF标准溶液0.5、2、4、8、10、20 μL至5 mL锥形试管中，加入大鼠空白血浆100 μL，混匀后加内标液10 μL，同“2.1”项下操作，制作标准曲线.将所得峰高比对PF浓度采用加权最小二乘法进行线性回归计算，求得直线回归方程，即标准曲线.直线回归方程的相关系数为0.995.PF的线性范围为1.85～74.00 mg/L.最低定量限为1.85 mg/L.
, 百拇医药
2.2.3 精密度与准确度
按“2.2.2”项下制备高、中、低3种不同浓度的质量控制样品(QC样品)，以当日的标准曲线计算QC样品的浓度，精密度和准确度分别以QC样品测得值的相对标准偏差(RSD)和测量结果均值对加入值的相对误差(RE)表示.高、中、低3种不同浓度的RSD值分别为6.7%、8.0%、6.6%，RE值分别为0.5%、5.3%、2.8%.
3 实验结果
a.Wistar大鼠5只，颈静脉插管取血.快速静脉注射PF纯品15 mg/kg，给药后不同时间(0、5、10、15、20、30、50、60、90 min)取样，制备血浆.以给药前血浆作空白对照，求出血药浓度，经3P87处理求算出静脉注射后PF的药动学参数(见表1)，平均药时曲线如图2所示.
Tab.1 The pharmacokinetic parameters for paeoniflorin after intravenous injection into rats(15 mg/kg，n=5)
, 百拇医药
A/μg.mL-1
α/min-1
B/μg.mL-1
β/min-1
t1/2α/min
t1/2β/min
AUC/μg.mL-1.min
Mean
136.7
, 百拇医药
0.25
13.22
0.02
2.8
29.1
1 036
s
72.38
0.06
1.69
0.004
0.6
1.8
, http://www.100md.com
152
由表4可见大鼠经静脉注射PF(15 mg/kg)后，血浆中浓度-时间曲线呈二室开放模型，分布相t1/2α为(2.6±0.9) min，消除相t1/2β为(27.4±14.4) min，可见PF在大鼠体内分布快，消除快. b.白芍水煎醇沉液经冷冻干燥后的干粉(经HPLC测定含PF为17%)，加蒸馏水混悬后灌胃给与大鼠(3.5 g/kg)，颈静脉插管取血.给药后不同时间(0、5、10、20、30、50、60、120、240、360、480、600 min)取样，制备血浆.吸取血浆100 μL按“2.1”项下操作.求算出灌胃后PF的药动学参数(见表2).平均药时曲线如图3所示.
Tab.2 The pharmacokinetic parameters for paeoniflorin after oral administration to rats(n=5) No.
, 百拇医药
AUC/(μg.mL)min
T1/2/min
Tmax/min
Cmax/μg.mL-1
F%
Mean
2 822
164
102
9.93
, http://www.100md.com 3.12
s
964
47
44
53.06
0.76
AUC were calculated from time zero to ininity 结果表明：大鼠灌胃芍药汤后，芍药苷的Tmax=(102±44)min，Cmax=(9.93±5.06)mg/L，绝对生物利用度F=(3.12±0.76)%.
Fig.2 The mean plasma concentration-time curve of paeoniflorin after intravenous administration(n=5)
, 百拇医药
Fig.3 The mean plasma concentration-time curve of paeoniflorin after oral administration of Paeoniae Rad.Decoction(n=5)
4 讨论
a.由以上实验结果可以看出，作者建立的RP-HPLC法测定血浆样品中PF的浓度，方法准确可靠，线性范围广，并以QC样品来控制分析方法的准确性和可靠性.同时，作者标准曲线的计算采用了加权最小二乘法〔2〕，使生物样品的测定结果与理论值的RSD在不同浓度区间内比较均衡，易于满足规范(Washington规范〔3〕)的要求，从一个方面保证了生物等效性、生物利用率与药动学研究数据的可靠性. b.研究中发现灌胃后血药浓度-时间曲线不符合隔室模型，作者按非隔室模型处理大鼠灌胃后的药物动力学参数，以梯形法求算出AUC0→∝，并据此求出PF的绝对生物利用度为F=(3.12±0.76)%.同时，大鼠灌胃后血浆中药物浓度表现出较大的个体差异，原因可能是肝脏首过代谢、胃肠道对PF吸收不好、肠内菌群的代谢或降解作用等.
, http://www.100md.com
c.Hattori等报道〔4〕PF在体外可被人肠道细菌转化为芍药代谢素I(paeonimetaboline I)，它对戊四唑痉挛的抑制作用较PF强.Kobayashi等〔5〕以与镇痛、镇痉作用相关的抗胆碱作用为中心对大鼠进行了体内和体外实验.结果表明PF在体外不能阻断氨甲胆碱(carbachol)诱导的结肠收缩反应，而口服PF后能拮抗此反应，即PF在体内具有抗胆碱作用而体外没有，提示有可能是PF通过生物转化后产生了具有显著的抗痉挛作用的代谢物.作者测得PF的绝对生物利用度F=(3.12±0.76)%，也可能与PF大部分在体内发生了生物转化从而使血浆中原形药含量极微有关.这一推论还应通过PF在体内的代谢来得到验证.
d.近十几年来对中药复方药动学研究表明：无论方剂的化学成分多么复杂，其在体内起作用的还是结构确定的化合物〔6〕.白芍煎剂中含有多种化学成分，作者仅以其中含量较大的芍药苷来研究白芍煎剂的药动学，具有局限性，但也具备一定的代表性.
, 百拇医药
参考文献
1 Shuichi Takada,Tomoko Isono,Yoko Wakui,et al.Absorption and excretion of paeoniflorin in rats.J Pharma Pharmacol,1995，47(12A)：1036～1040
2 Vinod P Shah,Kamal K Midha,Shrikant Dighe,et al.Analytical methods validation:bioavailability,bioequivalence,and pharmacokinetic studies.Journal of Pharmaceutical Sciences,1992，81(3)：309～312
3 钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题.药物分析杂志，1996，16(5)：343～345
, 百拇医药
4 难波恒雄.生药的资源、化学、代谢.国外医学中医中药分册，1988，10(5)：291
5 Makoto Kobayashi,Ciaki Ueda,Shunji Aoki,et al.Anticholinergic action of paeony root and its active constituents.Yakugaku Zasshi,1990，110(2)：964～968
6 黄熙，陈可冀，任平.“复方效应成分动力学”新假说的科学证据、要素、意义及前景.中国中药杂志，1997，22(4)：250～252
收稿日期:1998-08-31, 百拇医药
单位：沈阳药科大学药学系(项琪 程刚 陈济民)；沈阳市康利制药厂(汤洁)
关键词：白芍；芍药苷；药物动力学；生物利用度
沈阳药科大学学报990405 摘 要 采用高效液相色谱法测定大鼠静脉注射芍药苷和灌胃给予白芍煎剂后血浆中芍药苷浓度，静脉注射后的数据经3P87处理，灌胃后的数据以非隔室模型处理.结果表明大鼠静脉注射芍药苷(15 mg/kg)后，血药浓度-时间曲线符合二室模型，药动学参数为T1/2α=2.6 min，T1/2β=27.4 min.大鼠灌胃白芍煎剂(相当于芍药苷850 mg/kg)后，生物利用度为F=3.12%，Tmax=102 min,Cmax=9.93 mg/L.大鼠灌胃白芍煎剂后芍药苷的绝对生物利用度仅为3%，提示芍药苷有可能发生了生物转化.
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分类号 R963
Pharmacokinetic Study on the Decoctum Paeoniae in Rats
Xiang Qi,Cheng Gang,Tang Jie,Chen Jimin
Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract The absolute bioavailability of paeoniflorin after administration of the Decoetum Paeoniae in rats was studied.The plasma concentration of paeoniflorin was detected by HPLC.The plasma concentration of paeoniflorin after intravenous administration at the dose of 15 mg/kg rapidly decreased.The terminal half-life was 27.4 min.The drug was found to conform to a two-compartment model after intravenous administration.When given orally with the Decoctum Paeoniae Rad.decoction,the absolute bioavaliability value(F)determined by the AUC was 3.12%.The Tmax was 102 min,Cmax was 9.93 mg/L.The absolute bioavailability values were very low,which suggested it had been metabolized.
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Key words Decoctum Paeoniae;paeoniflorin;pharmacokinetic;bioavailability
白芍为毛莨科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根，性微寒，味苦酸，入肝、脾经，能养血敛阴，柔肝止痛，其主要成分有芍药苷(Paeonflorin,PF)、羟基芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等.白芍煎剂口服后体内药动学研究尚未见文献报道.作者建立了大鼠血浆中芍药苷含量测定的反相高效液相色谱法，并用该法研究了白芍煎剂中芍药苷在大鼠体内药物动力学.
1 仪器与试剂
动物：Wistar大鼠(250～350 g，由本校实验动物中心提供).药品：芍药苷标准品(中国药品生物制品检定所)；芍药苷纯品(本校有机合成实验室提供)；香兰素(分析纯，沈阳市试剂三厂).试剂：甲醇(色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司).主要仪器：Waters HPLC仪：510泵；484紫外检测器；U6k进样阀；Baseline 810色谱工作站.
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2 实验方法
2.1 血浆中芍药苷的HPLC分析
色谱条件：流动相：V(甲醇)∶V(水)=40∶60；流速：0.8 mL/min；色谱柱：Spherisorb C18(10 μm，200 mm×4.6 mm，中国科学院大连化学物理所)；紫外检测波长：231 nm.
准确吸取大鼠血浆0.1 mL置5 mL锥形试管中，加入100 mg/L香兰素内标液10 μL，混匀后加入甲醇400 μL，振荡，离心(2 500 r/min,5min)，吸取上清液进样20 μL.
2.2 血浆中PF的HPLC分析方法认证(Validation)〔1〕
2.2.1 HPLC分析方法的专属性
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通过大鼠空白血浆的色谱图，与血浆中加入PF和内标物得到的色谱图比较，证明血浆中内源性物质不干扰测定.在选定的色谱条件下，PF与内标物达到良好的分离效果(图1).
Fig.1 Chromatography of paeoniflorin(PF)
A—Blank plasma; B—Blank plasma spiked with PF and ISD(internal standard);
C—A real plasma sample(1-PF;2-ISD)
2.2.2 标准曲线
准确吸取PF标准溶液0.5、2、4、8、10、20 μL至5 mL锥形试管中，加入大鼠空白血浆100 μL，混匀后加内标液10 μL，同“2.1”项下操作，制作标准曲线.将所得峰高比对PF浓度采用加权最小二乘法进行线性回归计算，求得直线回归方程，即标准曲线.直线回归方程的相关系数为0.995.PF的线性范围为1.85～74.00 mg/L.最低定量限为1.85 mg/L.
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2.2.3 精密度与准确度
按“2.2.2”项下制备高、中、低3种不同浓度的质量控制样品(QC样品)，以当日的标准曲线计算QC样品的浓度，精密度和准确度分别以QC样品测得值的相对标准偏差(RSD)和测量结果均值对加入值的相对误差(RE)表示.高、中、低3种不同浓度的RSD值分别为6.7%、8.0%、6.6%，RE值分别为0.5%、5.3%、2.8%.
3 实验结果
a.Wistar大鼠5只，颈静脉插管取血.快速静脉注射PF纯品15 mg/kg，给药后不同时间(0、5、10、15、20、30、50、60、90 min)取样，制备血浆.以给药前血浆作空白对照，求出血药浓度，经3P87处理求算出静脉注射后PF的药动学参数(见表1)，平均药时曲线如图2所示.
Tab.1 The pharmacokinetic parameters for paeoniflorin after intravenous injection into rats(15 mg/kg，n=5)
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A/μg.mL-1
α/min-1
B/μg.mL-1
β/min-1
t1/2α/min
t1/2β/min
AUC/μg.mL-1.min
Mean
136.7
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0.25
13.22
0.02
2.8
29.1
1 036
s
72.38
0.06
1.69
0.004
0.6
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由表4可见大鼠经静脉注射PF(15 mg/kg)后，血浆中浓度-时间曲线呈二室开放模型，分布相t1/2α为(2.6±0.9) min，消除相t1/2β为(27.4±14.4) min，可见PF在大鼠体内分布快，消除快. b.白芍水煎醇沉液经冷冻干燥后的干粉(经HPLC测定含PF为17%)，加蒸馏水混悬后灌胃给与大鼠(3.5 g/kg)，颈静脉插管取血.给药后不同时间(0、5、10、20、30、50、60、120、240、360、480、600 min)取样，制备血浆.吸取血浆100 μL按“2.1”项下操作.求算出灌胃后PF的药动学参数(见表2).平均药时曲线如图3所示.
Tab.2 The pharmacokinetic parameters for paeoniflorin after oral administration to rats(n=5) No.
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AUC/(μg.mL)min
T1/2/min
Tmax/min
Cmax/μg.mL-1
F%
Mean
2 822
164
102
9.93
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s
964
47
44
53.06
0.76
AUC were calculated from time zero to ininity 结果表明：大鼠灌胃芍药汤后，芍药苷的Tmax=(102±44)min，Cmax=(9.93±5.06)mg/L，绝对生物利用度F=(3.12±0.76)%.
Fig.2 The mean plasma concentration-time curve of paeoniflorin after intravenous administration(n=5)
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Fig.3 The mean plasma concentration-time curve of paeoniflorin after oral administration of Paeoniae Rad.Decoction(n=5)
4 讨论
a.由以上实验结果可以看出，作者建立的RP-HPLC法测定血浆样品中PF的浓度，方法准确可靠，线性范围广，并以QC样品来控制分析方法的准确性和可靠性.同时，作者标准曲线的计算采用了加权最小二乘法〔2〕，使生物样品的测定结果与理论值的RSD在不同浓度区间内比较均衡，易于满足规范(Washington规范〔3〕)的要求，从一个方面保证了生物等效性、生物利用率与药动学研究数据的可靠性. b.研究中发现灌胃后血药浓度-时间曲线不符合隔室模型，作者按非隔室模型处理大鼠灌胃后的药物动力学参数，以梯形法求算出AUC0→∝，并据此求出PF的绝对生物利用度为F=(3.12±0.76)%.同时，大鼠灌胃后血浆中药物浓度表现出较大的个体差异，原因可能是肝脏首过代谢、胃肠道对PF吸收不好、肠内菌群的代谢或降解作用等.
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c.Hattori等报道〔4〕PF在体外可被人肠道细菌转化为芍药代谢素I(paeonimetaboline I)，它对戊四唑痉挛的抑制作用较PF强.Kobayashi等〔5〕以与镇痛、镇痉作用相关的抗胆碱作用为中心对大鼠进行了体内和体外实验.结果表明PF在体外不能阻断氨甲胆碱(carbachol)诱导的结肠收缩反应，而口服PF后能拮抗此反应，即PF在体内具有抗胆碱作用而体外没有，提示有可能是PF通过生物转化后产生了具有显著的抗痉挛作用的代谢物.作者测得PF的绝对生物利用度F=(3.12±0.76)%，也可能与PF大部分在体内发生了生物转化从而使血浆中原形药含量极微有关.这一推论还应通过PF在体内的代谢来得到验证.
d.近十几年来对中药复方药动学研究表明：无论方剂的化学成分多么复杂，其在体内起作用的还是结构确定的化合物〔6〕.白芍煎剂中含有多种化学成分，作者仅以其中含量较大的芍药苷来研究白芍煎剂的药动学，具有局限性，但也具备一定的代表性.
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参考文献
1 Shuichi Takada,Tomoko Isono,Yoko Wakui,et al.Absorption and excretion of paeoniflorin in rats.J Pharma Pharmacol,1995，47(12A)：1036～1040
2 Vinod P Shah,Kamal K Midha,Shrikant Dighe,et al.Analytical methods validation:bioavailability,bioequivalence,and pharmacokinetic studies.Journal of Pharmaceutical Sciences,1992，81(3)：309～312
3 钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题.药物分析杂志，1996，16(5)：343～345
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4 难波恒雄.生药的资源、化学、代谢.国外医学中医中药分册，1988，10(5)：291
5 Makoto Kobayashi,Ciaki Ueda,Shunji Aoki,et al.Anticholinergic action of paeony root and its active constituents.Yakugaku Zasshi,1990，110(2)：964～968
6 黄熙，陈可冀，任平.“复方效应成分动力学”新假说的科学证据、要素、意义及前景.中国中药杂志，1997，22(4)：250～252
收稿日期:1998-08-31, 百拇医药