肠肛舒颗粒质量标准的研究
作者：周淑芳* 唐声武 郭 力 邱 丰 余凌英
单位：成都中医药大学 610075
关键词：薄层色谱鉴别；PR-HPLC法；芍药苷；含量测定；肠肛舒颗粒
中草药990809 摘 要 采用薄层色谱法对肠肛舒颗粒制剂中赤芍、黄芩、槐角、大黄进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法对制剂中赤芍所含芍药苷进行了含量测定。该方法简便，专属性及重现性好，平均回收率为100.82%，RSD为 1.94%(n=6)。
Studies on the Quality Standard of Changgangshu Granule
Zhou Shufang, Tang Shengwu, Guo Li, et al
, 百拇医药
(Pharmacy College of Chengdu University of TCM, Chengdu 610075)
Abstract Changgangshu Granule (CG) was a processed Chinese herbal preparation to relieve constipation and hemorrhoid complicated with prolapse. Its contents of Radix Paeoniae Rubra, Fructus Sophorae, Radix Scutellariae and Radix et Rhizoma Rhei were identified by TLC, and paeoniflorin was determined by RP-HPLC. The methods were simple, with good specificity and reproducibility. It's average recovery rate was 100.82%, and RSD 1.94% (n=6).
, http://www.100md.com
Key words TLC RP-HPLC paeoniflorin determination Changgangshu Granule (CG)
肠肛舒颗粒由赤芍、黄芩、槐角、大黄等中药加工制成，具有清热凉血，解痉止痛，润肠通便之功效。用于血热肠燥便秘，肛门肿痛，痔疮出血，脱肛等症。现将肠肛舒颗粒质量标准的研究结果报道如下。
1 实验材料
GILSON液相色谱仪(法国吉尔森公司)，高速离心机LG-10-2.4A，SB-2200超声波清洗器；芍药苷、黄芩苷、大黄素、大黄酸对照品，大黄、槐角对照药材(中国药品生物制品检定所)；硅胶G(青岛)；UV-Ⅰ型三用紫外分析仪；所用试剂均为分析纯。
药材购自四川省中药材公司；肠肛舒颗粒由本校药剂教研室提供。
, 百拇医药 2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 赤芍：取肠肛舒颗粒2g，加乙醇2mL超声振荡提取5min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL溶解，作供试液。取缺赤芍的肠肛舒颗粒阴性样品2g，按上法制成阴性对照液。另取芍药苷加乙醇制成2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。
取上述3种溶液4 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(26∶14∶5)下层溶液展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上呈相同颜色斑点，阴性样品在相同位置上无相同斑点出现。见图1-A。
2.1.2 黄芩：取肠肛舒颗粒5 g，加甲醇20 mL回流提取1 h，放冷，滤过，滤液作供试液。按上法制成阴性对照液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成1 mg/mL对照品溶液。
, 百拇医药
取上述3种溶液5 μL点于同一4%NaAC-硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水(5∶3∶1∶1)展开，取出晾干，喷以2% FeCl3乙醇溶液，日光下检视。见图1-B。
2.1.3 槐角：取肠肛舒颗粒5 g，加水30 mL溶解，置分液漏斗中，用醋酸乙酯萃取(90 mL×2)，合并醋酸乙酯，蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作供试品溶液。按上述方法制成阴性对照液。另取槐角对照药材1 g，加甲醇10 mL冷浸1 h，蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为药材对照液。
取上述3种液4 μL点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-甲酸-水(9∶5∶0.5∶0.5)展开，取出晾干，日光下检视。见图1-C。
2.1.4 大黄：取肠肛舒颗粒5 g，加甲醇30 mL，超声振荡提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，再加盐酸4 mL，水浴加热30 min，冷却，置分液漏斗中用乙醚萃取(20 mL×2)，合并乙醚液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2 mL溶解，作供试液。按上述方法制成阴性对照液。另取大黄素、大黄酸加甲醇制成1 mg/mL的对照品溶液。分别取上述3种溶液10 μL点于同一硅胶H-0.5% CMC-Na薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂展开，取出晾干，置紫外光灯下(365 nm)检视。
, 百拇医药
结果见图1-D。
A-赤芍 1-芍药苷 B-黄芩 1-黄芩苷 C-槐角 1-槐角对照药材 D-大黄 1-大黄素、大黄酸 2-各自阴性对照 3～5-三批样品供试液
图1 各药材TLC图
2.2 含量测定
2.2.1 色谱分析条件：Synchropak ODS柱(5 μm，150×4.6 mm id)，ODS预柱；流动相为甲醇-36%乙酸-异丙醇-水(25∶2∶1∶71)；流速1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长230 nm；灵敏度0.1 AUFS；理论塔板数按芍药苷峰计不低于4 000；拖尾因子1.04。
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2.2.2 标准曲线测定：精密量取芍药苷对照品溶液(0.1296 mg/mL)2、4、6、8、10 μL进样，按上述色谱条件测定峰面积，HPLC图谱见图2-A。以峰面积积分值为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标，绘制标准曲线。经线性回归处理，回归方程为A=31820.75 C-7350.3，r=0.9999，表明芍药苷的进样量在0.259～1.296 μg内时，与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.3 精密度测定：精密吸取上述对照品溶液5 μL，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积，芍药苷峰面积积分值的RSD为1.33%，小于2%，表明精密度良好。
2.2.4 供试品溶液的制备与测定：取本品约0.2 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加水40 mL，超声振荡提取40 min，放冷，加水至刻度，离心，取上清液作供试品溶液。精密吸取该溶液10 μL，按上述色谱条件测定。HPLC图谱见图2-B。
, http://www.100md.com 2.2.5 稳定性测定：取供试品溶液，分别于当日、次日及第3日进样10 μL，测得样品中芍药苷的峰面积值的RSD为0.66%，表明供试液3 d内稳定性良好。
2.2.6 重现性测定：同一批样品分别称取5份，按拟定的含量测定方法制备样品供试液，并进行测定，测得峰面积值的RSD为0.37%，小于2%，表明拟定的测定方法重现性良好。
2.2.7 加样回收率测定：测定结果加样回收率在95%～105%之间，方法可行。
2.2.8 样品测定：分别精密吸取对照品试液和供试液各5 μL，按上述色谱分析条件，分析结果见表1。
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A-芍药苷 B-供试品 C-阴性
图2 HPLC图
表1 样品测定结果 样品批号
芍药苷含量(mg/g)
RSD(%)
1
12.114
1.54
2
12.725
1.07
3
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12.506
1.83
4
11.861
0.65
3 讨论
3.1 赤芍为方中君药，芍药苷为赤芍的主要有效成分，故选择芍药苷作控制本品质量的指标成分。含赤芍的中药复方制剂中芍药苷的含量测定，报道有薄层扫描法[1]和高效液相色谱法[2～4]等。曾采用薄层扫描法测定，但前处理及测定操作复杂，影响因素较多而致重现性差，采用HPLC法对其进行含量测定，具有分离效果好，灵敏、准确等优点，故采用HPLC法测定。
3.2 肠肛舒颗粒剂是在古方“槐角丸”的基础上加减而成。在成都中医药大学附属医院肛肠科应用30多年，疗效确切可靠。经剂型研究确定制成颗粒剂。该颗粒剂具有清热凉血、解痛、止痛、润肠通便等作用，适用于血热肠燥、便秘、肛门肿痛、痔疮出血、脱肛等症。在成都市中医院、成都市痔疮专科医院等单位扩大应用中，该药使用方便、疗效特别好，受到单位和病人的好评。
收稿日期：1999-02-08, http://www.100md.com(周淑芳* 唐声武 郭 力 邱 丰 余凌英)
单位：成都中医药大学 610075
关键词：薄层色谱鉴别；PR-HPLC法；芍药苷；含量测定；肠肛舒颗粒
中草药990809 摘 要 采用薄层色谱法对肠肛舒颗粒制剂中赤芍、黄芩、槐角、大黄进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法对制剂中赤芍所含芍药苷进行了含量测定。该方法简便，专属性及重现性好，平均回收率为100.82%，RSD为 1.94%(n=6)。
Studies on the Quality Standard of Changgangshu Granule
Zhou Shufang, Tang Shengwu, Guo Li, et al
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(Pharmacy College of Chengdu University of TCM, Chengdu 610075)
Abstract Changgangshu Granule (CG) was a processed Chinese herbal preparation to relieve constipation and hemorrhoid complicated with prolapse. Its contents of Radix Paeoniae Rubra, Fructus Sophorae, Radix Scutellariae and Radix et Rhizoma Rhei were identified by TLC, and paeoniflorin was determined by RP-HPLC. The methods were simple, with good specificity and reproducibility. It's average recovery rate was 100.82%, and RSD 1.94% (n=6).
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Key words TLC RP-HPLC paeoniflorin determination Changgangshu Granule (CG)
肠肛舒颗粒由赤芍、黄芩、槐角、大黄等中药加工制成，具有清热凉血，解痉止痛，润肠通便之功效。用于血热肠燥便秘，肛门肿痛，痔疮出血，脱肛等症。现将肠肛舒颗粒质量标准的研究结果报道如下。
1 实验材料
GILSON液相色谱仪(法国吉尔森公司)，高速离心机LG-10-2.4A，SB-2200超声波清洗器；芍药苷、黄芩苷、大黄素、大黄酸对照品，大黄、槐角对照药材(中国药品生物制品检定所)；硅胶G(青岛)；UV-Ⅰ型三用紫外分析仪；所用试剂均为分析纯。
药材购自四川省中药材公司；肠肛舒颗粒由本校药剂教研室提供。
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2.1 定性鉴别
2.1.1 赤芍：取肠肛舒颗粒2g，加乙醇2mL超声振荡提取5min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL溶解，作供试液。取缺赤芍的肠肛舒颗粒阴性样品2g，按上法制成阴性对照液。另取芍药苷加乙醇制成2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。
取上述3种溶液4 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(26∶14∶5)下层溶液展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上呈相同颜色斑点，阴性样品在相同位置上无相同斑点出现。见图1-A。
2.1.2 黄芩：取肠肛舒颗粒5 g，加甲醇20 mL回流提取1 h，放冷，滤过，滤液作供试液。按上法制成阴性对照液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成1 mg/mL对照品溶液。
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取上述3种溶液5 μL点于同一4%NaAC-硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水(5∶3∶1∶1)展开，取出晾干，喷以2% FeCl3乙醇溶液，日光下检视。见图1-B。
2.1.3 槐角：取肠肛舒颗粒5 g，加水30 mL溶解，置分液漏斗中，用醋酸乙酯萃取(90 mL×2)，合并醋酸乙酯，蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作供试品溶液。按上述方法制成阴性对照液。另取槐角对照药材1 g，加甲醇10 mL冷浸1 h，蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为药材对照液。
取上述3种液4 μL点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-甲酸-水(9∶5∶0.5∶0.5)展开，取出晾干，日光下检视。见图1-C。
2.1.4 大黄：取肠肛舒颗粒5 g，加甲醇30 mL，超声振荡提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，再加盐酸4 mL，水浴加热30 min，冷却，置分液漏斗中用乙醚萃取(20 mL×2)，合并乙醚液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2 mL溶解，作供试液。按上述方法制成阴性对照液。另取大黄素、大黄酸加甲醇制成1 mg/mL的对照品溶液。分别取上述3种溶液10 μL点于同一硅胶H-0.5% CMC-Na薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂展开，取出晾干，置紫外光灯下(365 nm)检视。
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结果见图1-D。
A-赤芍 1-芍药苷 B-黄芩 1-黄芩苷 C-槐角 1-槐角对照药材 D-大黄 1-大黄素、大黄酸 2-各自阴性对照 3～5-三批样品供试液
图1 各药材TLC图
2.2 含量测定
2.2.1 色谱分析条件：Synchropak ODS柱(5 μm，150×4.6 mm id)，ODS预柱；流动相为甲醇-36%乙酸-异丙醇-水(25∶2∶1∶71)；流速1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长230 nm；灵敏度0.1 AUFS；理论塔板数按芍药苷峰计不低于4 000；拖尾因子1.04。
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2.2.2 标准曲线测定：精密量取芍药苷对照品溶液(0.1296 mg/mL)2、4、6、8、10 μL进样，按上述色谱条件测定峰面积，HPLC图谱见图2-A。以峰面积积分值为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标，绘制标准曲线。经线性回归处理，回归方程为A=31820.75 C-7350.3，r=0.9999，表明芍药苷的进样量在0.259～1.296 μg内时，与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.3 精密度测定：精密吸取上述对照品溶液5 μL，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积，芍药苷峰面积积分值的RSD为1.33%，小于2%，表明精密度良好。
2.2.4 供试品溶液的制备与测定：取本品约0.2 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加水40 mL，超声振荡提取40 min，放冷，加水至刻度，离心，取上清液作供试品溶液。精密吸取该溶液10 μL，按上述色谱条件测定。HPLC图谱见图2-B。
, http://www.100md.com 2.2.5 稳定性测定：取供试品溶液，分别于当日、次日及第3日进样10 μL，测得样品中芍药苷的峰面积值的RSD为0.66%，表明供试液3 d内稳定性良好。
2.2.6 重现性测定：同一批样品分别称取5份，按拟定的含量测定方法制备样品供试液，并进行测定，测得峰面积值的RSD为0.37%，小于2%，表明拟定的测定方法重现性良好。
2.2.7 加样回收率测定：测定结果加样回收率在95%～105%之间，方法可行。
2.2.8 样品测定：分别精密吸取对照品试液和供试液各5 μL，按上述色谱分析条件，分析结果见表1。
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A-芍药苷 B-供试品 C-阴性
图2 HPLC图
表1 样品测定结果 样品批号
芍药苷含量(mg/g)
RSD(%)
1
12.114
1.54
2
12.725
1.07
3
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12.506
1.83
4
11.861
0.65
3 讨论
3.1 赤芍为方中君药，芍药苷为赤芍的主要有效成分，故选择芍药苷作控制本品质量的指标成分。含赤芍的中药复方制剂中芍药苷的含量测定，报道有薄层扫描法[1]和高效液相色谱法[2～4]等。曾采用薄层扫描法测定，但前处理及测定操作复杂，影响因素较多而致重现性差，采用HPLC法对其进行含量测定，具有分离效果好，灵敏、准确等优点，故采用HPLC法测定。
3.2 肠肛舒颗粒剂是在古方“槐角丸”的基础上加减而成。在成都中医药大学附属医院肛肠科应用30多年，疗效确切可靠。经剂型研究确定制成颗粒剂。该颗粒剂具有清热凉血、解痛、止痛、润肠通便等作用，适用于血热肠燥、便秘、肛门肿痛、痔疮出血、脱肛等症。在成都市中医院、成都市痔疮专科医院等单位扩大应用中，该药使用方便、疗效特别好，受到单位和病人的好评。
收稿日期：1999-02-08, http://www.100md.com(周淑芳* 唐声武 郭 力 邱 丰 余凌英)