病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平动态研究
作者：陈宪锐 周玉霞 玄梅香 吴多文 尹燕明 魏佑农 王连成 赵新平
单位：271000 泰安，泰山医学院(陈宪锐、周玉霞、吴多文、尹燕明)；山东省泰安市卫生防疫站(玄梅香)；新汶矿务局中心医院(魏佑农)；泰安市中心医院(王连成)；枣庄市人民医院(赵新平)
关键词：
中华传染病杂志/990214
病毒性肝炎病理机制十分复杂，细胞因子在其中的作用越来越受到重视，我们对389例各型病毒性肝炎患者进行了血清TNF-α、IL-6和IL-8水平检测和动态变化的研究，以探讨其在病毒性肝炎发病中的作用。
材料与方法
一、研究对象
, http://www.100md.com 从泰山医学院附属医院、山东省泰安市中心医院、山东省枣庄市人民医院及山东省新汶矿务局中心医院随机选择了389例经肝组织活检病理诊断的各型病毒性肝炎患者，其中急性病毒性肝炎103例，慢性病毒性肝炎183例(其中轻度慢性肝炎67例，中度慢性肝炎71例，重度慢性肝炎45例)，重型肝炎16例，肝炎肝硬化87例。按病原学分型为：甲型肝炎(甲肝)60例，乙型肝炎(乙肝)244例，丙型肝炎(丙肝)44例，乙肝合并丙肝41例。男296例，女93例；年龄4～71岁，平均38.2岁。所有病例的诊断均符合1995年(北京)第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准[1]。
以23例健康献血员为正常对照，其中男18例，女5例；年龄24～50岁，平均35.4岁。
二、标本采集
明确诊断后，抽取患者静脉血5ml，其中，在急性肝炎患者的急性期和恢复期、慢性肝炎患者的活动期和稳定期、重型肝炎的肝坏死期和恢复期分别抽取静脉血5ml，分离血清放置-70°C备检。
, http://www.100md.com
三、检测方法
TNF-α、IL-6、IL-8的测定均采用ELISA法，试剂盒由第四军医大学免疫学教研室制备，均按试剂盒使用说明书进行操作。
四、统计学处理
采用方差分析q检验和配对t检验进行统计分析。
结果
一、不同临床类型病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平
见表1，经方差分析和两两比较q检验，各临床类型之间差异均有显著性，均P<0.001；重型肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平为最高，显示病情越重，其升高越显著。
二、急性肝炎、慢性肝炎和重型肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化
, http://www.100md.com
在急性肝炎患者的急性期和恢复期、慢性肝炎患者的活动期和稳定期、重型肝炎患者的肝坏死期和恢复期血清TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化
表1 病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平(μg/L,
±s) 临床类型
例数
TNF-α
IL-6
IL-8
急性肝炎
103
, http://www.100md.com
3.15±0.47
67.65±8.42
203.86±21.53
轻度慢性肝炎
67
2.44±0.21
53.67±5.49
169.42±16.55
中度慢性肝炎
71
3.67±0.39
73.59±6.81
, 百拇医药
231.04±19.46
重度慢性肝炎
45
4.02±0.27
82.73±7.11
279.62±23.17
重型肝炎
16
4.95±0.53
98.71±5.26
353.66±25.50
肝炎肝硬化
, 百拇医药
87
3.69±0.47
73.04±7.14
232.34±17.42
正常对照
23
0.22±0.05
6.66±1.31
46.64±6.31
合计
412
-
, 百拇医药
-
-
F值
896.34
943.24
23.21
P值
<0.001
<0.001
<0.001
表2 急性肝炎、慢性肝炎和重型肝炎患者血清
TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化(μg/L,±s) 病 期
, http://www.100md.com
例数
TNF-α
IL-6
IL-8
急性肝炎急性期
103
3.16±0.44*
67.71±8.39*
203.86±21.53*
急性肝炎恢复期
103
1.42±0.20
, 百拇医药
29.29±3.73
83.98±5.97
慢性肝炎活动期
183
3.79±0.32*
76.44±4.13*
212.52±18.05*
慢性肝炎稳定期
183
1.77±0.20
34.68±4.41
, http://www.100md.com
102.81±10.49
重型肝炎坏死期
16
4.83±0.45*
98.71±5.26*
353.66±25.50*
重型肝炎恢复期
11
2.26±0.13
46.55±2.95
147.40±15.18
, 百拇医药
*P<0.001
情况见表2。经配对t检验，在急性肝炎患者的急性期与恢复期之间，慢性肝炎患者的活动期与稳定期之间、重型肝炎患者的肝坏死期与恢复期之间血清TNF-α、IL-6和IL-8三项指标的差异均有显著性，均P<0.001，显示急性肝炎的恢复期、慢性肝炎的稳定期、重型肝炎的恢复期的以上三项指标均明显下降。
讨论
本研究发现，病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平显著高于对照组，在病毒性肝炎患者中，不同临床类型患者之间，其血清TNF-α、IL-6和IL-8水平差异有显著性，重型肝炎患者为最高，即病情越重，血清TNF-α、IL-6和IL-8水平越高。
通过对急性肝炎组、慢性肝炎组和重型肝炎组患者进行血清TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化的配对资料分析，发现急性肝炎组患者在急性期和恢复期之间、慢性肝炎组患者在活动期和稳定期之间、重型肝炎组患者在肝坏死期和恢复期之间，血清TNF-α、IL-6和IL-8水平差异有显著性，显示病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8的水平随病情的恢复而降低。
, 百拇医药
肝炎病毒感染可使机体免疫系统活化，产生并释放各种细胞因子，其中，肝炎病毒感染能诱导肝细胞合成大量TNF-α[2]，而TNF-α又可诱导肝细胞合成IL-8[3]，另外，TNF-α在体内也能诱导IL-6的产生[4]，三者之间密切相关，因此肝组织中出现大量的细胞因子，这些细胞因子可能促进肝内炎症反应，介导肝细胞损伤，诱导各类细胞分化增殖，从而使慢性肝脏炎症持续存在，并导致纤维化形成。
本研究显示，各型肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平升高，肝细胞受损越重，其升高越显著，揭示体内高活性的TNF-α、IL-6和IL-8水平与病毒复制、内毒素血症有关[5，6]，尤其是内毒素血症，使单核巨噬细胞处于激活状态，产生TNF-α、IL-6、IL-8的能力大大增强。Nagaki等[7]研究了TNF-α对体外肝细胞的毒性作用，证实TNF与肝损害的关系，不是通过其直接作用，而可能与其刺激机体产生内源性介质作用有关。
, http://www.100md.com
以往免疫组化研究[8]也发现肝炎病毒感染后肝内有大量单核巨噬细胞浸润、枯否细胞增生，TNF-α、IL-6和IL-8阳性细胞数增多，提示肝炎病毒感染可直接刺激机体免疫活性细胞分泌大量TNF-α、IL-6和IL-8，是血清水平增高的根本原因。此外，免疫复合物也均能刺激单核巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-8。肝肾功能受损，细胞因子廓清作用减弱，也是其血清水平增高的原因之一。
综上所述，病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平升高，病情越重，其升高越显著；在急性肝炎的恢复期、慢性肝炎的稳定期及重型肝炎的恢复期血清TNF-α、IL-6和IL-8水平显著下降。显示血清TNF-α、IL-6和IL-8水平的高低与病情轻重一致。说明病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平的高低，能够反映肝细胞损害的程度，同时也说明TNF-α、IL-6和IL-8参与了病毒性肝炎的发病机制。
本课题受山东省教委资助(J95K29)
, http://www.100md.com
参考文献
1 第五次全国传染病寄生虫病学术会议.病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病杂志，1995，13：241-246.
2 Gonzaler AR, Garcia MC, Garaia BL, et al. Induction of tumor necrosis factor production by human hepatocytes in chronic viral hepatitis. J Exp Med, 1994, 179:841-842.
3 Thornton AJ, Strieter RM, Lindley I, et al. Cyto-kine-induced geme expression of a neutrophil chemotactic factor/IL-8 in human hepatocytes. J Immunol, 1990, 144:2609-2611.
, 百拇医药
4 Sheron N, Lau JYN, Hofmann J, et al. Dose dependent increase in plasma interleukin-6 after recombinant tumor necrosis factor infusion in humans. Clin Exp Immumol, 1990, 82:427-428.
5 李昌平，刘厚钰，周康，等.病毒性肝炎和肝硬化患者IL-6、TNF-α的变化.中华传染病杂志，1996，14：146-147.
6 Kakuma S, Shinagawa T, Ishikawa T, et al. Interleukin 6 production by peripheral blood mononuclear cells in patients with chronic hepatitis B Virus infection and primary biliary cirrhosis. Gastroenterol Jpn, 1993, 28:18-20.
, 百拇医药
7 Nagaki M, Muto Y, Ohnishi H, et al. Significance of tumor necrosis factor(TNF) and interleukin-1(IL-1) in the pathogenseis of fulminant hepatitis: possible invovement of serine protease in TNF-mediated liver injury. Gastroenterol Jpn, 1991, 26:448-449.
8 甄真，裴秀，王麟士，等.病毒性肝炎患者血清IL-6，TNF，SIL-2R的变化.中华传染病杂志，1996， 14：170-171.
(收稿：1998-02-10 修回：1998-12-31), http://www.100md.com
单位：271000 泰安，泰山医学院(陈宪锐、周玉霞、吴多文、尹燕明)；山东省泰安市卫生防疫站(玄梅香)；新汶矿务局中心医院(魏佑农)；泰安市中心医院(王连成)；枣庄市人民医院(赵新平)
关键词：
中华传染病杂志/990214
病毒性肝炎病理机制十分复杂，细胞因子在其中的作用越来越受到重视，我们对389例各型病毒性肝炎患者进行了血清TNF-α、IL-6和IL-8水平检测和动态变化的研究，以探讨其在病毒性肝炎发病中的作用。
材料与方法
一、研究对象
, http://www.100md.com 从泰山医学院附属医院、山东省泰安市中心医院、山东省枣庄市人民医院及山东省新汶矿务局中心医院随机选择了389例经肝组织活检病理诊断的各型病毒性肝炎患者，其中急性病毒性肝炎103例，慢性病毒性肝炎183例(其中轻度慢性肝炎67例，中度慢性肝炎71例，重度慢性肝炎45例)，重型肝炎16例，肝炎肝硬化87例。按病原学分型为：甲型肝炎(甲肝)60例，乙型肝炎(乙肝)244例，丙型肝炎(丙肝)44例，乙肝合并丙肝41例。男296例，女93例；年龄4～71岁，平均38.2岁。所有病例的诊断均符合1995年(北京)第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准[1]。
以23例健康献血员为正常对照，其中男18例，女5例；年龄24～50岁，平均35.4岁。
二、标本采集
明确诊断后，抽取患者静脉血5ml，其中，在急性肝炎患者的急性期和恢复期、慢性肝炎患者的活动期和稳定期、重型肝炎的肝坏死期和恢复期分别抽取静脉血5ml，分离血清放置-70°C备检。
, http://www.100md.com
三、检测方法
TNF-α、IL-6、IL-8的测定均采用ELISA法，试剂盒由第四军医大学免疫学教研室制备，均按试剂盒使用说明书进行操作。
四、统计学处理
采用方差分析q检验和配对t检验进行统计分析。
结果
一、不同临床类型病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平
见表1，经方差分析和两两比较q检验，各临床类型之间差异均有显著性，均P<0.001；重型肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平为最高，显示病情越重，其升高越显著。
二、急性肝炎、慢性肝炎和重型肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化
, http://www.100md.com
在急性肝炎患者的急性期和恢复期、慢性肝炎患者的活动期和稳定期、重型肝炎患者的肝坏死期和恢复期血清TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化
表1 病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平(μg/L,
±s) 临床类型例数
TNF-α
IL-6
IL-8
急性肝炎
103
, http://www.100md.com
3.15±0.47
67.65±8.42
203.86±21.53
轻度慢性肝炎
67
2.44±0.21
53.67±5.49
169.42±16.55
中度慢性肝炎
71
3.67±0.39
73.59±6.81
, 百拇医药
231.04±19.46
重度慢性肝炎
45
4.02±0.27
82.73±7.11
279.62±23.17
重型肝炎
16
4.95±0.53
98.71±5.26
353.66±25.50
肝炎肝硬化
, 百拇医药
87
3.69±0.47
73.04±7.14
232.34±17.42
正常对照
23
0.22±0.05
6.66±1.31
46.64±6.31
合计
412
-
, 百拇医药
-
-
F值
896.34
943.24
23.21
P值
<0.001
<0.001
<0.001
表2 急性肝炎、慢性肝炎和重型肝炎患者血清
TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化(μg/L,
±s) 病 期, http://www.100md.com
例数
TNF-α
IL-6
IL-8
急性肝炎急性期
103
3.16±0.44*
67.71±8.39*
203.86±21.53*
急性肝炎恢复期
103
1.42±0.20
, 百拇医药
29.29±3.73
83.98±5.97
慢性肝炎活动期
183
3.79±0.32*
76.44±4.13*
212.52±18.05*
慢性肝炎稳定期
183
1.77±0.20
34.68±4.41
, http://www.100md.com
102.81±10.49
重型肝炎坏死期
16
4.83±0.45*
98.71±5.26*
353.66±25.50*
重型肝炎恢复期
11
2.26±0.13
46.55±2.95
147.40±15.18
, 百拇医药
*P<0.001
情况见表2。经配对t检验，在急性肝炎患者的急性期与恢复期之间，慢性肝炎患者的活动期与稳定期之间、重型肝炎患者的肝坏死期与恢复期之间血清TNF-α、IL-6和IL-8三项指标的差异均有显著性，均P<0.001，显示急性肝炎的恢复期、慢性肝炎的稳定期、重型肝炎的恢复期的以上三项指标均明显下降。
讨论
本研究发现，病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平显著高于对照组，在病毒性肝炎患者中，不同临床类型患者之间，其血清TNF-α、IL-6和IL-8水平差异有显著性，重型肝炎患者为最高，即病情越重，血清TNF-α、IL-6和IL-8水平越高。
通过对急性肝炎组、慢性肝炎组和重型肝炎组患者进行血清TNF-α、IL-6和IL-8水平动态变化的配对资料分析，发现急性肝炎组患者在急性期和恢复期之间、慢性肝炎组患者在活动期和稳定期之间、重型肝炎组患者在肝坏死期和恢复期之间，血清TNF-α、IL-6和IL-8水平差异有显著性，显示病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8的水平随病情的恢复而降低。
, 百拇医药
肝炎病毒感染可使机体免疫系统活化，产生并释放各种细胞因子，其中，肝炎病毒感染能诱导肝细胞合成大量TNF-α[2]，而TNF-α又可诱导肝细胞合成IL-8[3]，另外，TNF-α在体内也能诱导IL-6的产生[4]，三者之间密切相关，因此肝组织中出现大量的细胞因子，这些细胞因子可能促进肝内炎症反应，介导肝细胞损伤，诱导各类细胞分化增殖，从而使慢性肝脏炎症持续存在，并导致纤维化形成。
本研究显示，各型肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平升高，肝细胞受损越重，其升高越显著，揭示体内高活性的TNF-α、IL-6和IL-8水平与病毒复制、内毒素血症有关[5，6]，尤其是内毒素血症，使单核巨噬细胞处于激活状态，产生TNF-α、IL-6、IL-8的能力大大增强。Nagaki等[7]研究了TNF-α对体外肝细胞的毒性作用，证实TNF与肝损害的关系，不是通过其直接作用，而可能与其刺激机体产生内源性介质作用有关。
, http://www.100md.com
以往免疫组化研究[8]也发现肝炎病毒感染后肝内有大量单核巨噬细胞浸润、枯否细胞增生，TNF-α、IL-6和IL-8阳性细胞数增多，提示肝炎病毒感染可直接刺激机体免疫活性细胞分泌大量TNF-α、IL-6和IL-8，是血清水平增高的根本原因。此外，免疫复合物也均能刺激单核巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-8。肝肾功能受损，细胞因子廓清作用减弱，也是其血清水平增高的原因之一。
综上所述，病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平升高，病情越重，其升高越显著；在急性肝炎的恢复期、慢性肝炎的稳定期及重型肝炎的恢复期血清TNF-α、IL-6和IL-8水平显著下降。显示血清TNF-α、IL-6和IL-8水平的高低与病情轻重一致。说明病毒性肝炎患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平的高低，能够反映肝细胞损害的程度，同时也说明TNF-α、IL-6和IL-8参与了病毒性肝炎的发病机制。
本课题受山东省教委资助(J95K29)
, http://www.100md.com
参考文献
1 第五次全国传染病寄生虫病学术会议.病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病杂志，1995，13：241-246.
2 Gonzaler AR, Garcia MC, Garaia BL, et al. Induction of tumor necrosis factor production by human hepatocytes in chronic viral hepatitis. J Exp Med, 1994, 179:841-842.
3 Thornton AJ, Strieter RM, Lindley I, et al. Cyto-kine-induced geme expression of a neutrophil chemotactic factor/IL-8 in human hepatocytes. J Immunol, 1990, 144:2609-2611.
, 百拇医药
4 Sheron N, Lau JYN, Hofmann J, et al. Dose dependent increase in plasma interleukin-6 after recombinant tumor necrosis factor infusion in humans. Clin Exp Immumol, 1990, 82:427-428.
5 李昌平，刘厚钰，周康，等.病毒性肝炎和肝硬化患者IL-6、TNF-α的变化.中华传染病杂志，1996，14：146-147.
6 Kakuma S, Shinagawa T, Ishikawa T, et al. Interleukin 6 production by peripheral blood mononuclear cells in patients with chronic hepatitis B Virus infection and primary biliary cirrhosis. Gastroenterol Jpn, 1993, 28:18-20.
, 百拇医药
7 Nagaki M, Muto Y, Ohnishi H, et al. Significance of tumor necrosis factor(TNF) and interleukin-1(IL-1) in the pathogenseis of fulminant hepatitis: possible invovement of serine protease in TNF-mediated liver injury. Gastroenterol Jpn, 1991, 26:448-449.
8 甄真，裴秀，王麟士，等.病毒性肝炎患者血清IL-6，TNF，SIL-2R的变化.中华传染病杂志，1996， 14：170-171.
(收稿：1998-02-10 修回：1998-12-31), http://www.100md.com