p53,cyclin D1, mdm2, p21, cdk4及p16在青中老年人大肠癌表达的对比分析
作者：刘坤平 莫鉴锋 张永东 温星来 谢芝香
单位：(广东省清远市人民医院511500)
关键词：大肠肿瘤；细胞周期蛋白；免疫组化
广东医学000310
【摘要】 目的 探讨青、中、老年人大肠癌临床病理特点与6种细胞周期蛋白表达的关系。方法 采用SP免疫组化法对89例青、中、老年人大肠癌进行6种细胞周期蛋白检测。结果 cyclin D1，mdm2，p53，p21(waf1/cip1)，cdk4，p16在各年龄组均见表达，青年组大肠癌组织学分级Ⅲ级、弥漫浸润型的病例及中年组临床C期病例明显高于老年组(P<0.05)，老年组临床B期病例明显高于青年组(P<0.05)，周期蛋白表达p53青年组明显低于中老年组，p21青、中年组明显低于老年组(P<0.05)。结论 中、老年人大肠癌细胞周期蛋白以p53调控点改变为主，青、中年人大肠癌的临床病理特点可能与p21,Cyclin D1表达有关。
, 百拇医药
Comparative studies on the expression of six cell cycle proteins in colorectal carcinoma among young and middle-age and old patients
Liu Kunping, Mo Jianfeng, Zhang Yongdong, et al.
(Department of Pathology, Peoples Hospital of Qingyuan, Guangdong 511500)
【Abstract】 Objective To study the relation between the expressions of six cell cycle proteins and the clinicopathlogical features of colorectal carcinoma among young and middle-aged and old patients. Method Six cell cycle proteins were examined by immunohistochemistry in 89 cases. Results The numbers of grade Ⅲ and invaded type in young patients and the number of Dukes C in middle-aged patients were significantly higher than that in old patients. The expression of p53 in middle-aged and old patients is significantly higher than that in young patients .The expression of p21 in old patients is significantly higher than that in young and middle-aged patients. Conclusion The main change of cell cycle proteins in middle-aged and old colorectal carcinoma patients is p53. The clinicopathologic features of colorectal carcinoma are correlated with p21 and cyclin D1 expression in young and middle-aged patients.
, 百拇医药
【Key words】 Colorectal neoplasm Cell cycle proteins Immunohistochemistry
细胞周期调控失常与癌的发生密切相关，突变型p53, cyclin D1, cdk4, mdm2在细胞周期进程中促进细胞增殖已视为癌基因，p21/waf1/cip1(p21)及p16阻抑细胞增殖视为抑癌基因。文献报道青、老年人大肠癌临床病理特点及预后不尽相同，而周期蛋白对不同年龄组大肠癌生物学特性的影响尚不清楚。本研究则对青、中、老年人大肠癌进行6种细胞周期蛋白表达的对比分析，探讨青、中、老年人大肠癌临床病理特点与细胞周期蛋白表达的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 89例石蜡组织取自1991～1994年期间标本,并进行术后3～6 a的随访。其中男47例、女42例，年龄最大89岁、年龄最小16岁，高分化腺癌30例，中分化腺癌44例，低分化腺癌15例。按Dukes临床分期，无A期病例，B期42例，C期37例，D期10例。发生在直肠38例、右半结肠30例、左半结肠26例。大体类型隆起型40例、溃疡型35例、浸润型14例。青年组(<36岁)10例、老年组(>54岁)54例、中年组(36～54岁)25例。
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1.2 免疫组化染色 采用sp法，鼠抗cyclin D1(HD11)，本课题受广东省科委重点科技攻关项目基金(基金编号9622046-04)及卫生厅科研基金资助
mdm2(SMP14)，p53(DO-1)，p21(187)(waf1/cip1)，cdk4(C-22)-G，兔抗p16(c-20)为Santa-cruz公司试剂，sp试剂盒为ZYMED公司试剂，均购自北京中山生物技术有限公司。抗体浓度cyclin D1为1∶10，mdm2，p53，p21及p16均为1∶50，所有抗体增加微波处理，cyclin D1再增加胰蛋白酶消化。设阴性及阳性对照。
1.3 免疫组化染色结果判断标准 6种抗体均以细胞核着色为阳性标记，无细胞核染色或阳性细胞数<5%为阴性，阳性细胞数>5%为阳性。
1.4 统计学处理 应用计算机进行χ2检验及继续校正χ2检验。
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2 结果
2.1 非选择人群中6种细胞周期蛋白的表达 免疫组化检测89例大肠癌6种细胞周期蛋白阳性表达p53为56例(63%),cyclin D1为38例(43%)、mdm2为22例(25%)、cdk4为22例(25%)、p21为32例(36%)、p16为42例(47%)。同时表达p53/cyclin D1/mdm2/cdk4阳性者有3例(3%)。未见有p53/cyclin D1/mdm2/cdk4阳性而p21/p16阴性的病例，未见有单独p53或cyclin D1或mdm2或cdk4阳性表达的病例，也未见有单独p21或p16表达缺失的病例。
2.2 青、中、老年人大肠癌周期蛋白表达及临床病理特点 表1显示青年组大肠癌组织学分级Ⅲ级、浸润型的病例及中年组临床C期病例明显高于老年组(P<0.05)，老年组临床B期病例明显高于青年组(P<0.05)，性别分布及发生部位各年龄组之间差异无显著性。周期蛋白表达p53青年组明显低于中老年组，p21青、中年组明显低于老年组,Cyclin D1,mdm2,p16及cdk4阳性表达率在各年龄组之间差异无显著性。分组统计显示p53/cyclin D1/mdm2/cdk4联合表达者均在老年组。青、中、老年组mdm2与p53联合表达者分别有1，2，15例。
, 百拇医药
表1 青、中、老年人大肠癌周期蛋白表达及临床病理特点 例 组别
青年组
(n=10)
中年组
(n=25)
老年组
(n=54)
性别
男
7
12
29
女
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3
13
25
发生部位
左半结肠
2
6
19
右半结肠
3
9
17
直肠
5
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10
18
大体形态
隆起型
2
10
18
溃疡型
3
10
31
浸润型
5
5
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5▲
组织学分级
Ⅰ级
2
10
18
Ⅱ级
3
10
31
Ⅲ级
5
5
, 百拇医药 5▲
Dukes分期
B期
2
1
30▲
C期
6
14△
17
D期
2
1
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7
周期蛋白表达阳性
p53
2
18
36▲
p21
1
4△
27▲
mdm2
2
, 百拇医药
4
16
cyclin D1
7
9
22
cdk4
2
5
15
p16
5
12
25
, 百拇医药
青、中年组之间比较 *P<0.05;中、老年组之间比较 △P<0.05;青、老年组之间比较 ▲P<0.053 讨论
本组大肠癌从发病年龄上以老年组为多，占61%,青年组占11%，中年组占28%，青年组人数虽少但与老年组相比表现出组织学分化差、临床进展快、弥漫浸润型多的特点。老年组则表现为临床进展缓慢于青、中年组。在细胞周期进程中，突变型 p53，mdm2，cyclin D1，cdk4对G-S期转化起促进作用， p21，p16则起阻抑作用，上述6种周期蛋白在实体肿瘤中的表达已显示出其对肿瘤发生、发展的影响。我们对本组非选择人群大肠癌的分析显示大肠癌的发生不论年龄大小都涉及到多种周期蛋白的异常表达，我们检测到p53，mdm2，cyclin D1，cdk4同时表达者有3例，但这3例都出现在老年组，推测越多因素涉及的大肠癌其发生间期越长，患者可能年长些。综合分析未见p53,mdm2，cyclin D1，cdk4均过度表达而p21，p16表达缺失的病例，单因素分析未见有p53，mdm2，cyclin D1,cdk4单独表达、或p21,p16单独表达缺失的病例，表明大肠癌的发生是多种因素改变积累的结果。
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本研究显示大肠癌中、老年组p53阳性蛋白表达率为72%及67%,明显高于青年组，提示青、中、老年人大肠癌周期蛋白改变型不同，中、老年人大肠癌更多以p53调控点改变为主。有研究表明p53突变是大肠癌发生的早期事件，我们对本组大肠癌及癌旁粘膜p53蛋白表达的研究提示p53蛋白表达与肿瘤的发生及复发有关[1]，因此对中老年人进行p53蛋白检测对大肠癌高危人群的筛选及早期诊断更具有意义。
研究表明mdm2能与野生型及突变型p53蛋白结合，导致 p53蛋白稳定易被检出,我们的结果显示各年龄组大肠癌均有mdm2蛋白与p53蛋白同时表达现象，提示与mdm2结合功能失活性p53蛋白存在于各年龄组大肠癌，p53蛋白表达不仅仅是由于p53基因突变。
青、中年组大肠癌p21阳性表达率明显低于老年组(P<0.05)，这可能是青年组组织学分化差、弥漫浸润及中年组淋巴结转移比老年组多的分子生物学基础之一。p21阻抑G-S期转化，文献报道p21与肿瘤的分化、临床进展、淋巴结转移密切相关[2，3]，表明抑癌基因失活也是肿瘤发生、发展的一个重要原因。
, 百拇医药
在青年组大肠癌中有70%(7/10)的病例涉及cyclin D1过度表达，但与中、老年组相比，各组间差异未见显著性，可能与青年组大肠癌病例不够多有关。cyclin D1在细胞周期G-S期转化过程中起重要作用，我们报道过本组大肠癌cyclin D1对预后有明显影响[4]，青年组大肠癌差的生物学行为可能与此有关。
cdk4与p16在各年龄组的阳性表达率未见明显不同，提示它们在不同年龄组对肿瘤的发生、发展均有一定的影响。由此可见大肠癌的分子生物学发病机制相当复杂，细胞周期调控与大肠癌密切相关。
参考文献
[1]刘坤平，谢芝香，原伟权，等.大肠癌旁粘膜细胞增殖模式与术后复发机制的探讨.中国肿瘤临床，1999，26(5):362
[2]Jiang M,Shao ZM,Wu J,et al. p21/waf1/cip1 and mdm2 expression in breast carcinoma patients as related to prognosis. Int J Cancer, 1997,74:529
[3]Yasui W,Akama Y,Yokozaki H,et al.Expression of p21/waf1/cip1 in colorectal adenomas and adenocarcinomas and its correlation with p53 protein expression. Pathol Int, 1997,47:470
[4]刘坤平,张永东,原伟权，等. 结肠直肠癌Cyclin D1及p16蛋白表达与预后的关系. 中华病理学杂志，1999，28(4): 293
(收稿日期：1999-12-06), 百拇医药
单位：(广东省清远市人民医院511500)
关键词：大肠肿瘤；细胞周期蛋白；免疫组化
广东医学000310
【摘要】 目的 探讨青、中、老年人大肠癌临床病理特点与6种细胞周期蛋白表达的关系。方法 采用SP免疫组化法对89例青、中、老年人大肠癌进行6种细胞周期蛋白检测。结果 cyclin D1，mdm2，p53，p21(waf1/cip1)，cdk4，p16在各年龄组均见表达，青年组大肠癌组织学分级Ⅲ级、弥漫浸润型的病例及中年组临床C期病例明显高于老年组(P<0.05)，老年组临床B期病例明显高于青年组(P<0.05)，周期蛋白表达p53青年组明显低于中老年组，p21青、中年组明显低于老年组(P<0.05)。结论 中、老年人大肠癌细胞周期蛋白以p53调控点改变为主，青、中年人大肠癌的临床病理特点可能与p21,Cyclin D1表达有关。
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Comparative studies on the expression of six cell cycle proteins in colorectal carcinoma among young and middle-age and old patients
Liu Kunping, Mo Jianfeng, Zhang Yongdong, et al.
(Department of Pathology, Peoples Hospital of Qingyuan, Guangdong 511500)
【Abstract】 Objective To study the relation between the expressions of six cell cycle proteins and the clinicopathlogical features of colorectal carcinoma among young and middle-aged and old patients. Method Six cell cycle proteins were examined by immunohistochemistry in 89 cases. Results The numbers of grade Ⅲ and invaded type in young patients and the number of Dukes C in middle-aged patients were significantly higher than that in old patients. The expression of p53 in middle-aged and old patients is significantly higher than that in young patients .The expression of p21 in old patients is significantly higher than that in young and middle-aged patients. Conclusion The main change of cell cycle proteins in middle-aged and old colorectal carcinoma patients is p53. The clinicopathologic features of colorectal carcinoma are correlated with p21 and cyclin D1 expression in young and middle-aged patients.
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【Key words】 Colorectal neoplasm Cell cycle proteins Immunohistochemistry
细胞周期调控失常与癌的发生密切相关，突变型p53, cyclin D1, cdk4, mdm2在细胞周期进程中促进细胞增殖已视为癌基因，p21/waf1/cip1(p21)及p16阻抑细胞增殖视为抑癌基因。文献报道青、老年人大肠癌临床病理特点及预后不尽相同，而周期蛋白对不同年龄组大肠癌生物学特性的影响尚不清楚。本研究则对青、中、老年人大肠癌进行6种细胞周期蛋白表达的对比分析，探讨青、中、老年人大肠癌临床病理特点与细胞周期蛋白表达的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 89例石蜡组织取自1991～1994年期间标本,并进行术后3～6 a的随访。其中男47例、女42例，年龄最大89岁、年龄最小16岁，高分化腺癌30例，中分化腺癌44例，低分化腺癌15例。按Dukes临床分期，无A期病例，B期42例，C期37例，D期10例。发生在直肠38例、右半结肠30例、左半结肠26例。大体类型隆起型40例、溃疡型35例、浸润型14例。青年组(<36岁)10例、老年组(>54岁)54例、中年组(36～54岁)25例。
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1.2 免疫组化染色 采用sp法，鼠抗cyclin D1(HD11)，本课题受广东省科委重点科技攻关项目基金(基金编号9622046-04)及卫生厅科研基金资助
mdm2(SMP14)，p53(DO-1)，p21(187)(waf1/cip1)，cdk4(C-22)-G，兔抗p16(c-20)为Santa-cruz公司试剂，sp试剂盒为ZYMED公司试剂，均购自北京中山生物技术有限公司。抗体浓度cyclin D1为1∶10，mdm2，p53，p21及p16均为1∶50，所有抗体增加微波处理，cyclin D1再增加胰蛋白酶消化。设阴性及阳性对照。
1.3 免疫组化染色结果判断标准 6种抗体均以细胞核着色为阳性标记，无细胞核染色或阳性细胞数<5%为阴性，阳性细胞数>5%为阳性。
1.4 统计学处理 应用计算机进行χ2检验及继续校正χ2检验。
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2 结果
2.1 非选择人群中6种细胞周期蛋白的表达 免疫组化检测89例大肠癌6种细胞周期蛋白阳性表达p53为56例(63%),cyclin D1为38例(43%)、mdm2为22例(25%)、cdk4为22例(25%)、p21为32例(36%)、p16为42例(47%)。同时表达p53/cyclin D1/mdm2/cdk4阳性者有3例(3%)。未见有p53/cyclin D1/mdm2/cdk4阳性而p21/p16阴性的病例，未见有单独p53或cyclin D1或mdm2或cdk4阳性表达的病例，也未见有单独p21或p16表达缺失的病例。
2.2 青、中、老年人大肠癌周期蛋白表达及临床病理特点 表1显示青年组大肠癌组织学分级Ⅲ级、浸润型的病例及中年组临床C期病例明显高于老年组(P<0.05)，老年组临床B期病例明显高于青年组(P<0.05)，性别分布及发生部位各年龄组之间差异无显著性。周期蛋白表达p53青年组明显低于中老年组，p21青、中年组明显低于老年组,Cyclin D1,mdm2,p16及cdk4阳性表达率在各年龄组之间差异无显著性。分组统计显示p53/cyclin D1/mdm2/cdk4联合表达者均在老年组。青、中、老年组mdm2与p53联合表达者分别有1，2，15例。
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表1 青、中、老年人大肠癌周期蛋白表达及临床病理特点 例 组别
青年组
(n=10)
中年组
(n=25)
老年组
(n=54)
性别
男
7
12
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女
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3
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发生部位
左半结肠
2
6
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右半结肠
3
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直肠
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大体形态
隆起型
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溃疡型
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浸润型
5
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组织学分级
Ⅰ级
2
10
18
Ⅱ级
3
10
31
Ⅲ级
5
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Dukes分期
B期
2
1
30▲
C期
6
14△
17
D期
2
1
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7
周期蛋白表达阳性
p53
2
18
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p21
1
4△
27▲
mdm2
2
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4
16
cyclin D1
7
9
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cdk4
2
5
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p16
5
12
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青、中年组之间比较 *P<0.05;中、老年组之间比较 △P<0.05;青、老年组之间比较 ▲P<0.053 讨论
本组大肠癌从发病年龄上以老年组为多，占61%,青年组占11%，中年组占28%，青年组人数虽少但与老年组相比表现出组织学分化差、临床进展快、弥漫浸润型多的特点。老年组则表现为临床进展缓慢于青、中年组。在细胞周期进程中，突变型 p53，mdm2，cyclin D1，cdk4对G-S期转化起促进作用， p21，p16则起阻抑作用，上述6种周期蛋白在实体肿瘤中的表达已显示出其对肿瘤发生、发展的影响。我们对本组非选择人群大肠癌的分析显示大肠癌的发生不论年龄大小都涉及到多种周期蛋白的异常表达，我们检测到p53，mdm2，cyclin D1，cdk4同时表达者有3例，但这3例都出现在老年组，推测越多因素涉及的大肠癌其发生间期越长，患者可能年长些。综合分析未见p53,mdm2，cyclin D1，cdk4均过度表达而p21，p16表达缺失的病例，单因素分析未见有p53，mdm2，cyclin D1,cdk4单独表达、或p21,p16单独表达缺失的病例，表明大肠癌的发生是多种因素改变积累的结果。
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本研究显示大肠癌中、老年组p53阳性蛋白表达率为72%及67%,明显高于青年组，提示青、中、老年人大肠癌周期蛋白改变型不同，中、老年人大肠癌更多以p53调控点改变为主。有研究表明p53突变是大肠癌发生的早期事件，我们对本组大肠癌及癌旁粘膜p53蛋白表达的研究提示p53蛋白表达与肿瘤的发生及复发有关[1]，因此对中老年人进行p53蛋白检测对大肠癌高危人群的筛选及早期诊断更具有意义。
研究表明mdm2能与野生型及突变型p53蛋白结合，导致 p53蛋白稳定易被检出,我们的结果显示各年龄组大肠癌均有mdm2蛋白与p53蛋白同时表达现象，提示与mdm2结合功能失活性p53蛋白存在于各年龄组大肠癌，p53蛋白表达不仅仅是由于p53基因突变。
青、中年组大肠癌p21阳性表达率明显低于老年组(P<0.05)，这可能是青年组组织学分化差、弥漫浸润及中年组淋巴结转移比老年组多的分子生物学基础之一。p21阻抑G-S期转化，文献报道p21与肿瘤的分化、临床进展、淋巴结转移密切相关[2，3]，表明抑癌基因失活也是肿瘤发生、发展的一个重要原因。
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在青年组大肠癌中有70%(7/10)的病例涉及cyclin D1过度表达，但与中、老年组相比，各组间差异未见显著性，可能与青年组大肠癌病例不够多有关。cyclin D1在细胞周期G-S期转化过程中起重要作用，我们报道过本组大肠癌cyclin D1对预后有明显影响[4]，青年组大肠癌差的生物学行为可能与此有关。
cdk4与p16在各年龄组的阳性表达率未见明显不同，提示它们在不同年龄组对肿瘤的发生、发展均有一定的影响。由此可见大肠癌的分子生物学发病机制相当复杂，细胞周期调控与大肠癌密切相关。
参考文献
[1]刘坤平，谢芝香，原伟权，等.大肠癌旁粘膜细胞增殖模式与术后复发机制的探讨.中国肿瘤临床，1999，26(5):362
[2]Jiang M,Shao ZM,Wu J,et al. p21/waf1/cip1 and mdm2 expression in breast carcinoma patients as related to prognosis. Int J Cancer, 1997,74:529
[3]Yasui W,Akama Y,Yokozaki H,et al.Expression of p21/waf1/cip1 in colorectal adenomas and adenocarcinomas and its correlation with p53 protein expression. Pathol Int, 1997,47:470
[4]刘坤平,张永东,原伟权，等. 结肠直肠癌Cyclin D1及p16蛋白表达与预后的关系. 中华病理学杂志，1999，28(4): 293
(收稿日期：1999-12-06), 百拇医药