侧脑室注射东莨菪碱对大鼠吗啡条件性位置偏爱效应的影响
作者：顾钧 唐甩恩 周文华 杨国栋
单位：宁波市微循环与莨菪类药研究所,宁波戒毒研究中心，宁波315010
关键词：
中国临床药理学与治疗学000418
中图分类号R971.91
长期应用阿片类药物会导致阿片成瘾，主要表现为产生躯体和精神依赖。我室研究发现应用非选择性毒蕈碱(M)受体拮抗剂东莨菪碱能阻断吗啡依赖大鼠纳洛酮激发的戒断症状，也可减轻对吗啡耐受[1]。在东莨菪碱对猕猴吗啡静脉自身给药及反应恢复影响实验中发现东莨菪碱能降低吗啡静脉自身给药猕猴的踏板反应率和总强化次数[2]。这些表明东莨菪碱能降低吗啡的躯体和精神依赖性。条件性位置偏爱实验是一种评价药物精神依赖性的方法，本实验通过侧脑室微量注射不同剂量东莨菪碱，观察其对吗啡的条件性位置偏爱的影响，以探讨东莨菪碱在治疗阿片精神依赖中的作用。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1实验动物SD大鼠，雄性，体重220～250g，由上海实验动物中心提供(清洁级)，分笼饲养，给予自由进食、饮水。
1.2试剂盐酸吗啡注射剂由沈阳第一制药厂生产(批号980401)，氢溴酸东莨菪碱粉剂由广州第十制药厂生产(批号961101)。
1.3大鼠侧脑室立体定位大鼠用戊巴比妥钠(40mg.kg-1)腹腔注射麻醉后固定于立体定位仪上(美国ASI)，充分暴露颅骨后，参照大鼠脑立体定位图谱[3]，采用平颅位，在前囟后10mm,中线旁1.5mm，埋埴不锈钢套管深度3mm，用502胶水和牙科水泥进行固定。大鼠术后恢复1wk以上进行实验。
1.4吗啡条件性位置偏爱方法建立位置偏爱箱由黑、白两色互通式有机玻璃箱子组成，大小为38cm×38cm×45cm，黑箱底板表面光滑，白箱底板表面粗糙。动物实验周期为6d，前5d时间训练(训练时黑、白两箱之间由挡板隔开)，d6测试动物位置偏爱效应。大鼠每天上、下午各皮下注射一次，两次时间间隔为8h，其中一次为吗啡10mg.kg-1，另一次给予等量生理盐水。注射吗啡后，将大鼠置于白箱中，给生理盐水后将大鼠置于黑箱中，每次在箱中停留50min。d6在黑、白箱之间放置活动平台，以便大鼠可以在黑白两箱中自由活动。整个实验均在温度、湿度和光线相对恒定环境中进行。测试时，将大鼠置于黑白箱中间平台上，记录15min内大鼠分别在黑白箱中停留时间。
, 百拇医药
1.5侧脑室微量注射在d6测试前30min，用微量注射器插入脑室套管中(针尖在套管中露出1mm)，注射东莨菪碱10μl(用生理盐水稀释，东莨菪碱剂量分别为10、20、40、80μg)或等量生理盐水。在整个实验结束后，大鼠在麻醉后用4%多聚甲醛灌流固定大脑，取包含注射部位在内厚约5mm脑组织块，进行冷冻切片，镜下观察侧脑室定位是否准确，若不准确将该大鼠数据舍弃。
1.6统计分析各组数据采用±s;组间以t检验进行统计学分析。
表1侧脑室注射不同剂量东莨菪碱对大鼠吗啡条件性位置偏爱效应的影响(+s,n=6) 组别
15min内大鼠停留在白箱中时间/s
生理盐水
850±40
东莨菪碱10μg组
, 百拇医药
871±33
东莨菪碱20μg组
598±52*
东莨菪碱40μg组
450±93*△
东莨菪碱80μg组
449±86*△
与生理盐水组比较*P<0.01;与东莨菪碱20μg组比较△P<0.01
2 结果
由表1可见与生理盐水对照组相比，侧脑室注入20、40、80μg东莨菪碱能显著地降低吗啡条件性位置偏爱效应，而10μg组无效(P>0.05)。80μg组与40μg组结果相比无显著性差异。
, http://www.100md.com
3 讨论
吗啡条件性位置偏爱实验是研究药物强化效应实验方法之一。该实验是通过训练使动物建立在某一特定环境下与药物奖赏反应的特定关系，它直接反应了药物的精神依赖潜力。从药物奖赏反应的神经解剖基础来看，中脑边缘多巴胺系统起了重要作用，尤其是中脑腹侧被盖区和伏隔核，该区域是多巴胺神经元胞体和末梢所在部位亦是吗啡奖赏反应的关键性位点之一。研究发现，吗啡等阿片类药物并不直接作用于多巴胺神经元，而是通过激动GABA中间神经元上的μ受体，抑制该神经元活动，从而解除GABA神经元对多巴胺神经元的紧张性抑制，由此激活腹侧被盖区多巴胺神经元，使其对投射靶区伏隔核的多巴胺释放量增加。另外，在其他脑区如海马和下丘脑等部位的脑啡肽以及中脑导水管周围灰质的β_内啡肽通路也参与了阿片的强化效应[4]。本实验发现东莨菪碱侧脑室微量注射在一定剂量范围内能有效地降低吗啡条件性位置偏爱效应，其作用可能与东莨菪碱作用于上述神经通路有关，我室研究发现东莨菪碱能够调节吗啡依赖大鼠下丘脑神经元β_内啡肽分泌[5]，东莨菪碱对中脑腹侧被盖区和伏隔核多巴胺释放影响有助于对该机制进一步研究。另有文献报道东莨菪碱作为非选择性毒蕈碱(M)受体拮抗剂注入侧脑室或海马后，由于其中枢广泛的M受体拮抗作用，会使学习变慢，记忆保持减弱[6]。
, 百拇医药
东莨菪碱降低大鼠吗啡条件性位置偏爱效应是否与学习记忆有关，有待于进一步实验研究。本实验中东莨菪碱侧脑室微量注射(20、40、80μg)能有效降低吗啡的位置偏爱效应，提示东莨菪碱能够降低吗啡精神依赖潜力。
参考文献
1，刘惠芬，张亚海，王兆林，等.东莨菪碱治疗吗啡成瘾大鼠的量效关系.浙江中西医结合杂志,1994;3:30
2，张富强,周文华,王兆林，等.东莨菪碱对猕猴吗啡静脉自身给药及反应恢复影响.中国临床药理学与治疗学，1998；3(2):99
3，包新民,舒斯云,著.大鼠脑立体定位图谱.北京:人民卫生出版社,1991：32
4，朱子涛,金国章.阿片成瘾与中脑边缘DA系统的适应性变化.生命科学，1999；11(1):9
5，杨国栋,顾钧,叶明珠,等.东莨菪碱对吗啡成瘾大鼠下丘脑、垂体及血β内啡肽和催产素含量的影响.中华医学杂志，1995；75(1):8
6，韩济生，主编.神经科学纲要北京:北京医科大学.中国协和医科大学联合出版社,1993:723
2000-07-24收稿，2000-09-02修回, 百拇医药
单位：宁波市微循环与莨菪类药研究所,宁波戒毒研究中心，宁波315010
关键词：
中国临床药理学与治疗学000418
中图分类号R971.91
长期应用阿片类药物会导致阿片成瘾，主要表现为产生躯体和精神依赖。我室研究发现应用非选择性毒蕈碱(M)受体拮抗剂东莨菪碱能阻断吗啡依赖大鼠纳洛酮激发的戒断症状，也可减轻对吗啡耐受[1]。在东莨菪碱对猕猴吗啡静脉自身给药及反应恢复影响实验中发现东莨菪碱能降低吗啡静脉自身给药猕猴的踏板反应率和总强化次数[2]。这些表明东莨菪碱能降低吗啡的躯体和精神依赖性。条件性位置偏爱实验是一种评价药物精神依赖性的方法，本实验通过侧脑室微量注射不同剂量东莨菪碱，观察其对吗啡的条件性位置偏爱的影响，以探讨东莨菪碱在治疗阿片精神依赖中的作用。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1实验动物SD大鼠，雄性，体重220～250g，由上海实验动物中心提供(清洁级)，分笼饲养，给予自由进食、饮水。
1.2试剂盐酸吗啡注射剂由沈阳第一制药厂生产(批号980401)，氢溴酸东莨菪碱粉剂由广州第十制药厂生产(批号961101)。
1.3大鼠侧脑室立体定位大鼠用戊巴比妥钠(40mg.kg-1)腹腔注射麻醉后固定于立体定位仪上(美国ASI)，充分暴露颅骨后，参照大鼠脑立体定位图谱[3]，采用平颅位，在前囟后10mm,中线旁1.5mm，埋埴不锈钢套管深度3mm，用502胶水和牙科水泥进行固定。大鼠术后恢复1wk以上进行实验。
1.4吗啡条件性位置偏爱方法建立位置偏爱箱由黑、白两色互通式有机玻璃箱子组成，大小为38cm×38cm×45cm，黑箱底板表面光滑，白箱底板表面粗糙。动物实验周期为6d，前5d时间训练(训练时黑、白两箱之间由挡板隔开)，d6测试动物位置偏爱效应。大鼠每天上、下午各皮下注射一次，两次时间间隔为8h，其中一次为吗啡10mg.kg-1，另一次给予等量生理盐水。注射吗啡后，将大鼠置于白箱中，给生理盐水后将大鼠置于黑箱中，每次在箱中停留50min。d6在黑、白箱之间放置活动平台，以便大鼠可以在黑白两箱中自由活动。整个实验均在温度、湿度和光线相对恒定环境中进行。测试时，将大鼠置于黑白箱中间平台上，记录15min内大鼠分别在黑白箱中停留时间。
, 百拇医药
1.5侧脑室微量注射在d6测试前30min，用微量注射器插入脑室套管中(针尖在套管中露出1mm)，注射东莨菪碱10μl(用生理盐水稀释，东莨菪碱剂量分别为10、20、40、80μg)或等量生理盐水。在整个实验结束后，大鼠在麻醉后用4%多聚甲醛灌流固定大脑，取包含注射部位在内厚约5mm脑组织块，进行冷冻切片，镜下观察侧脑室定位是否准确，若不准确将该大鼠数据舍弃。
1.6统计分析各组数据采用±s;组间以t检验进行统计学分析。
表1侧脑室注射不同剂量东莨菪碱对大鼠吗啡条件性位置偏爱效应的影响(+s,n=6) 组别
15min内大鼠停留在白箱中时间/s
生理盐水
850±40
东莨菪碱10μg组
, 百拇医药
871±33
东莨菪碱20μg组
598±52*
东莨菪碱40μg组
450±93*△
东莨菪碱80μg组
449±86*△
与生理盐水组比较*P<0.01;与东莨菪碱20μg组比较△P<0.01
2 结果
由表1可见与生理盐水对照组相比，侧脑室注入20、40、80μg东莨菪碱能显著地降低吗啡条件性位置偏爱效应，而10μg组无效(P>0.05)。80μg组与40μg组结果相比无显著性差异。
, http://www.100md.com
3 讨论
吗啡条件性位置偏爱实验是研究药物强化效应实验方法之一。该实验是通过训练使动物建立在某一特定环境下与药物奖赏反应的特定关系，它直接反应了药物的精神依赖潜力。从药物奖赏反应的神经解剖基础来看，中脑边缘多巴胺系统起了重要作用，尤其是中脑腹侧被盖区和伏隔核，该区域是多巴胺神经元胞体和末梢所在部位亦是吗啡奖赏反应的关键性位点之一。研究发现，吗啡等阿片类药物并不直接作用于多巴胺神经元，而是通过激动GABA中间神经元上的μ受体，抑制该神经元活动，从而解除GABA神经元对多巴胺神经元的紧张性抑制，由此激活腹侧被盖区多巴胺神经元，使其对投射靶区伏隔核的多巴胺释放量增加。另外，在其他脑区如海马和下丘脑等部位的脑啡肽以及中脑导水管周围灰质的β_内啡肽通路也参与了阿片的强化效应[4]。本实验发现东莨菪碱侧脑室微量注射在一定剂量范围内能有效地降低吗啡条件性位置偏爱效应，其作用可能与东莨菪碱作用于上述神经通路有关，我室研究发现东莨菪碱能够调节吗啡依赖大鼠下丘脑神经元β_内啡肽分泌[5]，东莨菪碱对中脑腹侧被盖区和伏隔核多巴胺释放影响有助于对该机制进一步研究。另有文献报道东莨菪碱作为非选择性毒蕈碱(M)受体拮抗剂注入侧脑室或海马后，由于其中枢广泛的M受体拮抗作用，会使学习变慢，记忆保持减弱[6]。
, 百拇医药
东莨菪碱降低大鼠吗啡条件性位置偏爱效应是否与学习记忆有关，有待于进一步实验研究。本实验中东莨菪碱侧脑室微量注射(20、40、80μg)能有效降低吗啡的位置偏爱效应，提示东莨菪碱能够降低吗啡精神依赖潜力。
参考文献
1，刘惠芬，张亚海，王兆林，等.东莨菪碱治疗吗啡成瘾大鼠的量效关系.浙江中西医结合杂志,1994;3:30
2，张富强,周文华,王兆林，等.东莨菪碱对猕猴吗啡静脉自身给药及反应恢复影响.中国临床药理学与治疗学，1998；3(2):99
3，包新民,舒斯云,著.大鼠脑立体定位图谱.北京:人民卫生出版社,1991：32
4，朱子涛,金国章.阿片成瘾与中脑边缘DA系统的适应性变化.生命科学，1999；11(1):9
5，杨国栋,顾钧,叶明珠,等.东莨菪碱对吗啡成瘾大鼠下丘脑、垂体及血β内啡肽和催产素含量的影响.中华医学杂志，1995；75(1):8
6，韩济生，主编.神经科学纲要北京:北京医科大学.中国协和医科大学联合出版社,1993:723
2000-07-24收稿，2000-09-02修回, 百拇医药