长沙地区汉族人群红细胞EsD和PGM1的分布研究
作者：喻向阳 彭继恒 李生彦
单位：喻向阳 (湖南医科大学法医学教研室 长沙 410078)；彭继恒 (湖南长沙市公安局刑侦支队技术科 410001)；李生彦 (四川省南充市公安局交警支队)
关键词：EsD、PGM1；基因频率；琼脂糖淀粉混合凝胶电泳
川北医学院学报990353 摘 要 本文采用琼脂糖、水解淀粉混合凝胶电泳法同时分析血液EsD、PGM1二种酶型。调查了这二种酶的表型分布和基因频率及其识别能力，并与不同地区、不同国家和不同民族进行比较研究。此法可用于个人识别和亲权鉴定。
文章编号：1005-3697(1999)03-0072-02 中图分类号：R89 文献标识码：A
Investigation on the distribution of EsD and PGM1 phenotypes in the han population,Changsha
, http://www.100md.com
Yu Xiangyang
(Department of Forensic Medicine,Hunan Medical University)
ABSTRACT A technique was developed for the multisystem analysis of blood using a mixed agarose、starch gel to type the enzymes EsD and PGM1.The gene frequencies were calculated.The phenotype frequencies of EsD and PGM1 were compared not only among the different nationalities but with those reported by other countries.The method is now used routined in our laboratory for blood and is superior for the examiantion of individual identifieation and paternity.The gene frequencies of the population of Changsha China EsD1 0.6242 PGM11 0.7121.
, http://www.100md.com
Key Words EsD;pGM1 Gene frenquencies Mixed agarose starch gel electrophoretic
红细胞酶型分型在法医学上的应用开始较早，其人类红细胞酯酶D(EsD)，磷酸葡萄糖变位酶I(PGM1)表型及基因定位[1，2，3]，作为重要的遗传标记已广泛地用于群体遗传学，法医血清学、人类学以及临床医学。为了解不同种族、民族、地区间EsD、PGM1表型和基因频率，我们采用国产琼脂糖、水解淀粉混合凝胶为支持介质，对长沙地区汉族165名健康献血员中上述二种酶型在同一块板上对一份检材进行同步检测，获得了满意的结果。
1 材料与方法
1.1 标本来源 血样采自湖南医科大学附属湘雅医院，无亲缘关系的165名健康献血员的新鲜抗凝血5ml。
, http://www.100md.com
1.1.1 血样处理 取上述血样1ml，生理盐水洗涤后的压积红细胞加等体积蒸馏水置冰冻过夜，温融后离心。取2滴溶血液加1滴0.05mol二硫苏醇。取1～2根0.5cm长的纱线，吸取溶血液备用。
1.2.1 凝胶板规格 1%低电渗琼脂糖，1%水解淀粉。胶板大小为230mm×110mm×1mm。
1.2.2 试剂配制 (1)电极缓冲液0.1mol Tris-0.1mol马来酸-0.01mol MgCl2.6H2o-0.01mol乙二胺四乙酸-0.15mol NaoH,pH7.4。(2)凝胶缓冲液 1∶15稀释电极缓冲液。(3)反应缓冲液EsD反应缓冲液：0.05mol无水醋酸钠，pH6.5PGM1，反应缓冲液：1.21g Tris ,0.4g MgCl2.6H2O加蒸馏水至100ml，pH8.0。
, http://www.100md.com
1.3.1 点样 取已吸取溶血液的纱线加入用刀片划好的距阴极端3cm处的胶缝内。
1.3.2 电泳 电压15V/cm，循环水温15℃以下，电泳时间约3h。
1.3.3 酶谱显色程序 (1)取4-甲基伞形酮醋酸盐1mg，溶于约300μl丙酮内，再加入5ml EsD反应缓冲液，润湿滤纸(23×10cm)覆盖凝胶表面，室温保湿放置5～15min后置长波紫外灯下观察荧光区带。(2)取葡萄糖-1-磷酸盐35mg,MTT 2.5mg ,PMS 1mg,NADP 2mg,溶于10mlPGM1反应缓冲液中，再加入1.7μG6PD。另取200mg纯琼脂或琼脂糖置于10ml蒸馏水加热煮沸，待冷却至56℃时与上述液体混合，迅速倒在凝胶板阴极点样处至阳极方向范围10cm的范围，置37℃温箱孵育1h后观察酶谱区带。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 采用1mm厚的琼脂糖淀粉混合凝胶电泳法可以同时检验血中EsD、PGM1二种酶型，所测酶型电泳区带清晰，表型易辨读。作者使用本法对长沙地区165名汉族健康献血员EsD和PGM1表型及基因频率分布作了调查，结果见表1、2。
表1 长沙地区汉族人群EsD表型分布及基因频率 EsD表型
观察值
理论值
表型频率
基因频率
1—1
65
64.29
, http://www.100md.com
0.3939
EsD1＝0.6242
2—1
76
77.27
0.4606
EsD2＝0.3758
2—2
24
23.44
0.2455
X2＝0.0424 df＝1 P<0.05
, http://www.100md.com
表2 长沙地区汉族人群PGM1表型分布及基因频率 PGM1表型
观察值
理论值
表型频率
基因频率
1—1
85
83.67
0.5152
PGM11＝0.7121
2—1
, 百拇医药
65
67.65
0.3938
PGM21＝0.2879
2—2
15
13.68
0.0910
X2＝0.2522 df＝1 P>0.05
2.2 用Hardy-weinberg遗传平衡法则检验，观察值和理论值之间无显著性差异(P>0.05)。表明这二种红细胞酶型在长沙地区汉族人群中有平衡的遗传多态现象。根据各表型求得各自的识别能力(DP)和累积识别能力(CDP)值见表3，其中长沙地区人群HP型的分布调查，早已在1988年完成并发表[4]。
, 百拇医药
表3 长沙地区汉族人群EsD、PGM1和HP的识别能力和累积识别能力值 群 体
识别能力(DP)
累积识别能力(CDP)
EsD
PGM1
HP
长沙地区
汉族人群
0.6117
0.5714
0.5286
, 百拇医药
0.7964
3 讨 论
本文结果与北京、上海、沈阳、武汉等地区居民(汉族)EsD型分布无显著差别，说明我国各地汉族人群中ESD型分布基本一致，但与国外有关资料[5]相比得知各人种的EsD1基因频率都较高，我国汉族的EsD型分布与日本及尼泊尔人的资料基本一致，但黑人和白人的EsD1频率要比黄种人高得多。而EsD2基因频率在黄种人群较其它人种要高，说明EsD基因频率分布明显的种族及地域间差异。
本文结果与北京、西安、内蒙古等地区居民(汉族和少数民族)PGM1型分布无显著性差异，与国外其它民族比较[6]，PGM1基因频率无论民族间还是种族间都存在程度不同的差异性，这种差异性无明显的规律性。
, http://www.100md.com
根据表型频率求得EsD、PGM1、HP的识别能力(DP)和累积识别能力(CDP)，均超过0.5，说明上述三种遗传标记均有较强的识别能力，是法医学个人识别和亲权鉴定中理想的遗传标记之一。如采用EsD、PGM1、HP标记组合，则能求得更高的识别能力和排除能力。
参考文献
1 常彩琴，等.中国人红细胞酯酶D分型及其基因频率分析.遗传，1983；5(6)∶29
2 高富愿，等.用琼脂糖凝胶电泳法测定酯酶D的多态性.刑事技术，1985；(2)∶
3 常彩琴，王明鑫.中国人红细胞磷酸葡萄糖变应酶(PGM1)的电泳分型及其频率研究.刑事技术，1984；(3)∶
4 喻向阳，等.长沙地区人群HP型的分布调查.中国法医学杂志，1989；4(2)∶125
5 Martin W.Red cell enzyme groups in paternity testing Ref 9 Tng Gesell forens Blutgruppenkd,Bern 1981;221～239
6 吴梅筠.血型血清学及物证检验.第1版，昆明：云南民族出版社，1990∶101
(收稿日期：1999-07-06), http://www.100md.com
单位：喻向阳 (湖南医科大学法医学教研室 长沙 410078)；彭继恒 (湖南长沙市公安局刑侦支队技术科 410001)；李生彦 (四川省南充市公安局交警支队)
关键词：EsD、PGM1；基因频率；琼脂糖淀粉混合凝胶电泳
川北医学院学报990353 摘 要 本文采用琼脂糖、水解淀粉混合凝胶电泳法同时分析血液EsD、PGM1二种酶型。调查了这二种酶的表型分布和基因频率及其识别能力，并与不同地区、不同国家和不同民族进行比较研究。此法可用于个人识别和亲权鉴定。
文章编号：1005-3697(1999)03-0072-02 中图分类号：R89 文献标识码：A
Investigation on the distribution of EsD and PGM1 phenotypes in the han population,Changsha
, http://www.100md.com
Yu Xiangyang
(Department of Forensic Medicine,Hunan Medical University)
ABSTRACT A technique was developed for the multisystem analysis of blood using a mixed agarose、starch gel to type the enzymes EsD and PGM1.The gene frequencies were calculated.The phenotype frequencies of EsD and PGM1 were compared not only among the different nationalities but with those reported by other countries.The method is now used routined in our laboratory for blood and is superior for the examiantion of individual identifieation and paternity.The gene frequencies of the population of Changsha China EsD1 0.6242 PGM11 0.7121.
, http://www.100md.com
Key Words EsD;pGM1 Gene frenquencies Mixed agarose starch gel electrophoretic
红细胞酶型分型在法医学上的应用开始较早，其人类红细胞酯酶D(EsD)，磷酸葡萄糖变位酶I(PGM1)表型及基因定位[1，2，3]，作为重要的遗传标记已广泛地用于群体遗传学，法医血清学、人类学以及临床医学。为了解不同种族、民族、地区间EsD、PGM1表型和基因频率，我们采用国产琼脂糖、水解淀粉混合凝胶为支持介质，对长沙地区汉族165名健康献血员中上述二种酶型在同一块板上对一份检材进行同步检测，获得了满意的结果。
1 材料与方法
1.1 标本来源 血样采自湖南医科大学附属湘雅医院，无亲缘关系的165名健康献血员的新鲜抗凝血5ml。
, http://www.100md.com
1.1.1 血样处理 取上述血样1ml，生理盐水洗涤后的压积红细胞加等体积蒸馏水置冰冻过夜，温融后离心。取2滴溶血液加1滴0.05mol二硫苏醇。取1～2根0.5cm长的纱线，吸取溶血液备用。
1.2.1 凝胶板规格 1%低电渗琼脂糖，1%水解淀粉。胶板大小为230mm×110mm×1mm。
1.2.2 试剂配制 (1)电极缓冲液0.1mol Tris-0.1mol马来酸-0.01mol MgCl2.6H2o-0.01mol乙二胺四乙酸-0.15mol NaoH,pH7.4。(2)凝胶缓冲液 1∶15稀释电极缓冲液。(3)反应缓冲液EsD反应缓冲液：0.05mol无水醋酸钠，pH6.5PGM1，反应缓冲液：1.21g Tris ,0.4g MgCl2.6H2O加蒸馏水至100ml，pH8.0。
, http://www.100md.com
1.3.1 点样 取已吸取溶血液的纱线加入用刀片划好的距阴极端3cm处的胶缝内。
1.3.2 电泳 电压15V/cm，循环水温15℃以下，电泳时间约3h。
1.3.3 酶谱显色程序 (1)取4-甲基伞形酮醋酸盐1mg，溶于约300μl丙酮内，再加入5ml EsD反应缓冲液，润湿滤纸(23×10cm)覆盖凝胶表面，室温保湿放置5～15min后置长波紫外灯下观察荧光区带。(2)取葡萄糖-1-磷酸盐35mg,MTT 2.5mg ,PMS 1mg,NADP 2mg,溶于10mlPGM1反应缓冲液中，再加入1.7μG6PD。另取200mg纯琼脂或琼脂糖置于10ml蒸馏水加热煮沸，待冷却至56℃时与上述液体混合，迅速倒在凝胶板阴极点样处至阳极方向范围10cm的范围，置37℃温箱孵育1h后观察酶谱区带。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 采用1mm厚的琼脂糖淀粉混合凝胶电泳法可以同时检验血中EsD、PGM1二种酶型，所测酶型电泳区带清晰，表型易辨读。作者使用本法对长沙地区165名汉族健康献血员EsD和PGM1表型及基因频率分布作了调查，结果见表1、2。
表1 长沙地区汉族人群EsD表型分布及基因频率 EsD表型
观察值
理论值
表型频率
基因频率
1—1
65
64.29
, http://www.100md.com
0.3939
EsD1＝0.6242
2—1
76
77.27
0.4606
EsD2＝0.3758
2—2
24
23.44
0.2455
X2＝0.0424 df＝1 P<0.05
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表2 长沙地区汉族人群PGM1表型分布及基因频率 PGM1表型
观察值
理论值
表型频率
基因频率
1—1
85
83.67
0.5152
PGM11＝0.7121
2—1
, 百拇医药
65
67.65
0.3938
PGM21＝0.2879
2—2
15
13.68
0.0910
X2＝0.2522 df＝1 P>0.05
2.2 用Hardy-weinberg遗传平衡法则检验，观察值和理论值之间无显著性差异(P>0.05)。表明这二种红细胞酶型在长沙地区汉族人群中有平衡的遗传多态现象。根据各表型求得各自的识别能力(DP)和累积识别能力(CDP)值见表3，其中长沙地区人群HP型的分布调查，早已在1988年完成并发表[4]。
, 百拇医药
表3 长沙地区汉族人群EsD、PGM1和HP的识别能力和累积识别能力值 群 体
识别能力(DP)
累积识别能力(CDP)
EsD
PGM1
HP
长沙地区
汉族人群
0.6117
0.5714
0.5286
, 百拇医药
0.7964
3 讨 论
本文结果与北京、上海、沈阳、武汉等地区居民(汉族)EsD型分布无显著差别，说明我国各地汉族人群中ESD型分布基本一致，但与国外有关资料[5]相比得知各人种的EsD1基因频率都较高，我国汉族的EsD型分布与日本及尼泊尔人的资料基本一致，但黑人和白人的EsD1频率要比黄种人高得多。而EsD2基因频率在黄种人群较其它人种要高，说明EsD基因频率分布明显的种族及地域间差异。
本文结果与北京、西安、内蒙古等地区居民(汉族和少数民族)PGM1型分布无显著性差异，与国外其它民族比较[6]，PGM1基因频率无论民族间还是种族间都存在程度不同的差异性，这种差异性无明显的规律性。
, http://www.100md.com
根据表型频率求得EsD、PGM1、HP的识别能力(DP)和累积识别能力(CDP)，均超过0.5，说明上述三种遗传标记均有较强的识别能力，是法医学个人识别和亲权鉴定中理想的遗传标记之一。如采用EsD、PGM1、HP标记组合，则能求得更高的识别能力和排除能力。
参考文献
1 常彩琴，等.中国人红细胞酯酶D分型及其基因频率分析.遗传，1983；5(6)∶29
2 高富愿，等.用琼脂糖凝胶电泳法测定酯酶D的多态性.刑事技术，1985；(2)∶
3 常彩琴，王明鑫.中国人红细胞磷酸葡萄糖变应酶(PGM1)的电泳分型及其频率研究.刑事技术，1984；(3)∶
4 喻向阳，等.长沙地区人群HP型的分布调查.中国法医学杂志，1989；4(2)∶125
5 Martin W.Red cell enzyme groups in paternity testing Ref 9 Tng Gesell forens Blutgruppenkd,Bern 1981;221～239
6 吴梅筠.血型血清学及物证检验.第1版，昆明：云南民族出版社，1990∶101
(收稿日期：1999-07-06), http://www.100md.com