肺外结核感染中结核菌及其L型检出方法与意义的研究
作者：夏佩莹 李凤云 张元和 闵宏林
单位：安徽省蚌埠医学院微生物学教研室233003
关键词：肺外结核；L型；92-3TB培养基
淮海医药000309
【摘 要】 目的 研究92-3TB与92-3TBL培养基在结核菌培养中的应用价值。方法 用92-3TB与92-3TBL培养基对489例各种肺外结核感染标本进行结核菌及L型培养。结果 发现血液、胸(腹)水、尿液、前列腺液标本中结核菌检出率分别为20.0%、42.3%、27.0%和17.0%，结核菌L型检出率分别为8.6%、17.2%、17.6%和6.4%。结论 92-3TB及92-3TBL培养基可提高结核菌检出率，缩短培养时间，有利于肺外结核的诊断。
【中国图书分类号】 R 446.5 R 52
, http://www.100md.com
Examination methods and signaficance of the M.tuberculosis and L-form in the extrapulmonary tuberculosis.
XIA Peiying，LI Fengyun，ZHANG Yuanhe
(Department of Microbiology，Bengbu Medical College，Anhui 233003)
【Abstract】 Objective To study the significance of 92-3 tubercular medium(92-3TB) and 92-3 tubercular L-form medium(92-3TBL)in the M.tuberculosis culture.Methods 489 cases of various extrapulmonary tuberculosis were examined with 92-3 TB and 92-3TBL.Results The M.tuberculosis positive rates of the blood，pleuritic fluid and ascite，urine，prostate fluid were 20.0%，42.3%，27.0% and 17.0% respectively.The M.tuberculosis L-forms positive rates were 8.6%，17.2%，17.6% and 6.4% respectively.Conclusion The positive rate may be increased and the culture time decreased with 92-3TB and 92-3TBL medium which can be used in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis.
, 百拇医药
【Key words】 Extrapulmonary tuberculosis L-form 92-3 tubercular medium
近年来，结核菌感染在全球呈上升趋势[1、2]。结核病的诊断，最可靠的仍然是细菌学检测。尤其在肺外结核感染中，常因症状不典型而误诊。我们总结近3年来本室检测的489例血液、浆膜腔渗出液(胸水、腹水)、尿液、前列腺液等疑为结核感染标本，报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本室1997～1999年收检的怀疑结核感染的各类标本，其中血液35例，胸水163例，尿液244例，前列腺液47例。
1.2 标本处理 血液标本经溶血处理后离心4 000转/min，取沉淀。胸水、腹水、前列腺液等直接离心取沉渣。尿液经常规方法浓缩后离心取沉淀物。
, http://www.100md.com
1.3 染色镜检 标本浓缩涂片、固定、Ziehl-Neelsen抗酸染色后油镜观察。诊断标准依据中国防痨协会公布标准[3]。
1.4 培养方法 将处理后沉淀物接种于本室制备的92-3TB、92-3TBL结核液体培养基[4]，37℃孵育，15 d，取培养物检查；涂片，抗酸染色检查。凡标本中见红色细长、弯曲、分枝状杆菌为结核菌阳性；见有大小不等园球体、原生小体抗酸颗粒为结核L型阳性。
1.5 TB-Ab检测 取待检血清、胸水标本作TB-Ab检测。采用结核纯蛋白衍生物(PPD)为包膜抗原，用金标法测定血清及体腔液中TB-Ab。试剂盒为福建三明蓝波公司产品，操作按说明书进行。目测结果按试剂标准板标试，凡检测板中心出现红色圆点为阳性。
1.6 统计学方法 采用配对资料的χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 涂片及培养 各类标本中结核杆菌及其L型阳性率，见表1。
表1 各种标本中结核菌及其L型浓缩涂片及培养结果 标 本
n
涂片阳性数及阳性率(%)
培养阳性数及阳性率(%)
细菌型
L型
总阳性
细菌型
L型
总阳性
, http://www.100md.com
血液
35
4(11.4)
2(5.7)
5(14.3)
7(20.0)
3(8.6)
8(22.8)
胸、腹水
163
47(28.9)
23(13.9)
56(34.4)
, http://www.100md.com
69(42.3)
28(17.2)
82(50.3)
尿液
244
52(21.3)
37(15.2)
59(24.2)
66(27.0)
43(17.6)
91(37.3)
前列腺液
, 百拇医药
47
6(12.7)
2(4.3)
6(12.7)
8(17.0)
3(6.4)
9(19.1)
2.2 TB-Ab检测 对送检胸水随机取样79份作TB-Ab检测(金标法)，阳性55份，阳性率达69.6%。与培养阳性率比较，P<0.05，见表2。
表2 79例胸水结核培养与TB-Ab检测法比较 结核菌培养
TB-Ab测定
, 百拇医药
χ2
P
阳性
阴性
阳性
35
8
4.32
<0.05
阴性
20
16
3 讨论 结核菌感染近年来呈上升趋势，肺外结核感染已引起临床高度重视[1、2]。肺外结核诊断一直是较为棘手的问题，近年来开展的PCR检测方法因易受污染核酸的影响极易出现假阳性，故结核菌浓缩涂片及培养目前仍是诊断结核病的重要且最为可靠的指标。常规结核菌培养采用的固体罗氏培养基培养时间需4～6周，不但结核菌检出率较低，而且不能查出结核L型，影响了患者的治疗[5]。本文采用了自制的92-3TB及92-3TBL液体培养基双管培养，不仅使培养时间缩短为14 d左右，且可同时查出结核菌细菌型及L型。各种肺外结核感染标本(血液、胸腹水、尿液、前列腺液等)中结核菌及其L型培养总阳性率分别为22.8%、50.3%、37.3%及19.1%，与国外报道的高检出率相近，高于国内用常规培养基分离的阳性率[6]。可见，92-3TB及92-3TBL液体培养基在检出率及培养时间方面均优于常规固体培养基，有利于临床诊断。
, 百拇医药
幼年时期结核感染，常可通过血行或淋巴扩散，但目前尚未见从血液中分离到结核菌的报道。我们采用溶血浓缩集菌法从35例血液标本中检出结核菌及L型8例，阳性率22.8%。证明结核感染中存在着菌血症时期，只要检测方法得当，可检出血液中的病菌，不但有利于患者的诊断，而且可提示临床医生跟踪追查患者的肺外结核。
结核菌可在抗痨药物及体内免疫因素作用下变异为细胞壁缺陷的L型[7]。结核菌L型除形态不典型，其抗酸性也可改变。我们在检测中发现：结核菌L型涂片中不仅可见抗酸性圆球体、巨形体、原生小体，而且可见到非抗酸颗粒。绝大多数病例中，结核菌及L型同时存在，但也有少数标本中仅查出L型(表1)。对单独检出抗酸或非抗酸L型颗粒的病例，应在92-3TB培养基中传代，一般2～3代后可有部分细菌返祖为典型的抗酸菌，即可确诊。
TB-Ab检测是用结核纯蛋白衍生物(PPD)为包被抗原，用ELISA或金标法测定血清及体液中的TB-Ab。本文采用的金标法检测方法简便，胸水检测阳性率为69.7%，高于结核菌检出率，P<0.05(表2)。有资料表明：体腔液中TB-Ab阳性率不低于血清[8]，且PPD为结核菌胞壁成分，假阳性率极低。因此体腔液中TB-Ab测定具有辅助诊断价值，对鉴别良、恶性渗液有一定意义。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Pasvol G，Rastogi N.Tuberculosis，past，precent and future.J Infect，1993，27：5
2，宋文虎.结核病全球告急和我国现况.中国防痨杂志，1995，17(3)：5
3，中国防痨协会.结核病诊断细菌学检测规程.中国防痨杂志，1996，18(1)：28
4，戴云海，林特夫，黄谷良.分枝杆菌L型的系列研究.中国防痨杂志，1996，18(6)：45
5，庄玉辉，李国利.肺结核病人痰标本抗酸菌L型分离培养方法的研究.微生物学通报，1991，(6)：348
6，马筱玲，黄谷良，林特夫.临床标本结核菌L型的分离.蚌埠医学院学报，1989，14(4)：229
7，马筱玲，黄谷良，林特夫.分枝杆菌L型的诱导.中国微生物学杂志，1989，1(2)：8
8，中华结核和呼吸杂志编辑委员会.抗结核菌抗原的IgG抗体测定在肺结核诊断上的应用.中华结核和呼吸杂志，1998，11(4)：222
(收稿：1999-10-10), http://www.100md.com
单位：安徽省蚌埠医学院微生物学教研室233003
关键词：肺外结核；L型；92-3TB培养基
淮海医药000309
【摘 要】 目的 研究92-3TB与92-3TBL培养基在结核菌培养中的应用价值。方法 用92-3TB与92-3TBL培养基对489例各种肺外结核感染标本进行结核菌及L型培养。结果 发现血液、胸(腹)水、尿液、前列腺液标本中结核菌检出率分别为20.0%、42.3%、27.0%和17.0%，结核菌L型检出率分别为8.6%、17.2%、17.6%和6.4%。结论 92-3TB及92-3TBL培养基可提高结核菌检出率，缩短培养时间，有利于肺外结核的诊断。
【中国图书分类号】 R 446.5 R 52
, http://www.100md.com
Examination methods and signaficance of the M.tuberculosis and L-form in the extrapulmonary tuberculosis.
XIA Peiying，LI Fengyun，ZHANG Yuanhe
(Department of Microbiology，Bengbu Medical College，Anhui 233003)
【Abstract】 Objective To study the significance of 92-3 tubercular medium(92-3TB) and 92-3 tubercular L-form medium(92-3TBL)in the M.tuberculosis culture.Methods 489 cases of various extrapulmonary tuberculosis were examined with 92-3 TB and 92-3TBL.Results The M.tuberculosis positive rates of the blood，pleuritic fluid and ascite，urine，prostate fluid were 20.0%，42.3%，27.0% and 17.0% respectively.The M.tuberculosis L-forms positive rates were 8.6%，17.2%，17.6% and 6.4% respectively.Conclusion The positive rate may be increased and the culture time decreased with 92-3TB and 92-3TBL medium which can be used in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis.
, 百拇医药
【Key words】 Extrapulmonary tuberculosis L-form 92-3 tubercular medium
近年来，结核菌感染在全球呈上升趋势[1、2]。结核病的诊断，最可靠的仍然是细菌学检测。尤其在肺外结核感染中，常因症状不典型而误诊。我们总结近3年来本室检测的489例血液、浆膜腔渗出液(胸水、腹水)、尿液、前列腺液等疑为结核感染标本，报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本室1997～1999年收检的怀疑结核感染的各类标本，其中血液35例，胸水163例，尿液244例，前列腺液47例。
1.2 标本处理 血液标本经溶血处理后离心4 000转/min，取沉淀。胸水、腹水、前列腺液等直接离心取沉渣。尿液经常规方法浓缩后离心取沉淀物。
, http://www.100md.com
1.3 染色镜检 标本浓缩涂片、固定、Ziehl-Neelsen抗酸染色后油镜观察。诊断标准依据中国防痨协会公布标准[3]。
1.4 培养方法 将处理后沉淀物接种于本室制备的92-3TB、92-3TBL结核液体培养基[4]，37℃孵育，15 d，取培养物检查；涂片，抗酸染色检查。凡标本中见红色细长、弯曲、分枝状杆菌为结核菌阳性；见有大小不等园球体、原生小体抗酸颗粒为结核L型阳性。
1.5 TB-Ab检测 取待检血清、胸水标本作TB-Ab检测。采用结核纯蛋白衍生物(PPD)为包膜抗原，用金标法测定血清及体腔液中TB-Ab。试剂盒为福建三明蓝波公司产品，操作按说明书进行。目测结果按试剂标准板标试，凡检测板中心出现红色圆点为阳性。
1.6 统计学方法 采用配对资料的χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 涂片及培养 各类标本中结核杆菌及其L型阳性率，见表1。
表1 各种标本中结核菌及其L型浓缩涂片及培养结果 标 本
n
涂片阳性数及阳性率(%)
培养阳性数及阳性率(%)
细菌型
L型
总阳性
细菌型
L型
总阳性
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血液
35
4(11.4)
2(5.7)
5(14.3)
7(20.0)
3(8.6)
8(22.8)
胸、腹水
163
47(28.9)
23(13.9)
56(34.4)
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69(42.3)
28(17.2)
82(50.3)
尿液
244
52(21.3)
37(15.2)
59(24.2)
66(27.0)
43(17.6)
91(37.3)
前列腺液
, 百拇医药
47
6(12.7)
2(4.3)
6(12.7)
8(17.0)
3(6.4)
9(19.1)
2.2 TB-Ab检测 对送检胸水随机取样79份作TB-Ab检测(金标法)，阳性55份，阳性率达69.6%。与培养阳性率比较，P<0.05，见表2。
表2 79例胸水结核培养与TB-Ab检测法比较 结核菌培养
TB-Ab测定
, 百拇医药
χ2
P
阳性
阴性
阳性
35
8
4.32
<0.05
阴性
20
16
3 讨论 结核菌感染近年来呈上升趋势，肺外结核感染已引起临床高度重视[1、2]。肺外结核诊断一直是较为棘手的问题，近年来开展的PCR检测方法因易受污染核酸的影响极易出现假阳性，故结核菌浓缩涂片及培养目前仍是诊断结核病的重要且最为可靠的指标。常规结核菌培养采用的固体罗氏培养基培养时间需4～6周，不但结核菌检出率较低，而且不能查出结核L型，影响了患者的治疗[5]。本文采用了自制的92-3TB及92-3TBL液体培养基双管培养，不仅使培养时间缩短为14 d左右，且可同时查出结核菌细菌型及L型。各种肺外结核感染标本(血液、胸腹水、尿液、前列腺液等)中结核菌及其L型培养总阳性率分别为22.8%、50.3%、37.3%及19.1%，与国外报道的高检出率相近，高于国内用常规培养基分离的阳性率[6]。可见，92-3TB及92-3TBL液体培养基在检出率及培养时间方面均优于常规固体培养基，有利于临床诊断。
, 百拇医药
幼年时期结核感染，常可通过血行或淋巴扩散，但目前尚未见从血液中分离到结核菌的报道。我们采用溶血浓缩集菌法从35例血液标本中检出结核菌及L型8例，阳性率22.8%。证明结核感染中存在着菌血症时期，只要检测方法得当，可检出血液中的病菌，不但有利于患者的诊断，而且可提示临床医生跟踪追查患者的肺外结核。
结核菌可在抗痨药物及体内免疫因素作用下变异为细胞壁缺陷的L型[7]。结核菌L型除形态不典型，其抗酸性也可改变。我们在检测中发现：结核菌L型涂片中不仅可见抗酸性圆球体、巨形体、原生小体，而且可见到非抗酸颗粒。绝大多数病例中，结核菌及L型同时存在，但也有少数标本中仅查出L型(表1)。对单独检出抗酸或非抗酸L型颗粒的病例，应在92-3TB培养基中传代，一般2～3代后可有部分细菌返祖为典型的抗酸菌，即可确诊。
TB-Ab检测是用结核纯蛋白衍生物(PPD)为包被抗原，用ELISA或金标法测定血清及体液中的TB-Ab。本文采用的金标法检测方法简便，胸水检测阳性率为69.7%，高于结核菌检出率，P<0.05(表2)。有资料表明：体腔液中TB-Ab阳性率不低于血清[8]，且PPD为结核菌胞壁成分，假阳性率极低。因此体腔液中TB-Ab测定具有辅助诊断价值，对鉴别良、恶性渗液有一定意义。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Pasvol G，Rastogi N.Tuberculosis，past，precent and future.J Infect，1993，27：5
2，宋文虎.结核病全球告急和我国现况.中国防痨杂志，1995，17(3)：5
3，中国防痨协会.结核病诊断细菌学检测规程.中国防痨杂志，1996，18(1)：28
4，戴云海，林特夫，黄谷良.分枝杆菌L型的系列研究.中国防痨杂志，1996，18(6)：45
5，庄玉辉，李国利.肺结核病人痰标本抗酸菌L型分离培养方法的研究.微生物学通报，1991，(6)：348
6，马筱玲，黄谷良，林特夫.临床标本结核菌L型的分离.蚌埠医学院学报，1989，14(4)：229
7，马筱玲，黄谷良，林特夫.分枝杆菌L型的诱导.中国微生物学杂志，1989，1(2)：8
8，中华结核和呼吸杂志编辑委员会.抗结核菌抗原的IgG抗体测定在肺结核诊断上的应用.中华结核和呼吸杂志，1998，11(4)：222
(收稿：1999-10-10), http://www.100md.com