受体介导基因转移的体外研究
作者：陶箭 邢敏智 胡宝瑜 张希衡 童善庆
单位：陶箭 邢敏智 胡宝瑜 张希衡 童善庆(上海第二医科大学微生物学教研室 上海 200025)
关键词：转铁蛋白；受体介导细胞内吞；基因转移
中国肿瘤生物治疗杂志000329 《中国图书资料分类法》分类号 Q782
目前，基因治疗大多使用重组病毒载体，转移和表达外源基因的效率较高，但所载片断较短、具潜在感染和插入突变的危险性。非病毒载体主要有脂质体和受体介导途径，前者虽有较高效率，但不具特异靶向性。使用超分子复合物载体，通过受体介导内吞作用，对真核生物进行外源基因的转移，是近十年发展起来的一种非病毒载体基因转移技术,可以把目的基因转移到特异组织细胞内。本研究检测受体介导基因转移靶向性和表达效率。
首先构建含β-gal基因的超分子复合物载体,零长度二步法使转铁蛋白和多聚赖氨酸发生共价交联，在适当的反应条件下，质粒pSVβ-gal可与转铁蛋白与多聚赖氨酸交联物由静电引力结合在一起。FITC标记转铁蛋白与多聚赖氨酸交联蛋白,对细胞表面Tf受体(TfR)表达分析进行分析。体外转染细胞分4组:超分子复合物处理组；脂质体转染对照组；质粒单独处理组；不处理对照组。 X-gal原位染色，计算机图象分析计算基因转染效率。
pSVβ-gal为含β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, LacZ)基因的真核表达质粒,作为报告基因可检测基因转移和表达系统的工作效率。SMMC7721和Hela细胞对 FITC标记的转铁蛋白与多聚赖氨酸交联蛋白内吞效率高,而 K562几乎没有内吞,这与文献报道的此几种细胞表面TfR分布情况结果一致。用已构建的超分子复合物载体和报告基因转染TfR表达程度不同的细胞株,检测受体介导基因转移表达系统的靶向性和效率,证明该系统有良好的靶向性;同脂质体介导的基因转移表达系统的比较性研究,显示受体介导基因转移表达效率非常低,小于1%,国外报道了一系列增加基因表达效率的方法,有待于进一步验证。
本课题系上海市高教局科学技术发展基金(95B07)资助
(1999-09-26收稿； 1999-12-30修回), http://www.100md.com
单位：陶箭 邢敏智 胡宝瑜 张希衡 童善庆(上海第二医科大学微生物学教研室 上海 200025)
关键词：转铁蛋白；受体介导细胞内吞；基因转移
中国肿瘤生物治疗杂志000329 《中国图书资料分类法》分类号 Q782
目前，基因治疗大多使用重组病毒载体，转移和表达外源基因的效率较高，但所载片断较短、具潜在感染和插入突变的危险性。非病毒载体主要有脂质体和受体介导途径，前者虽有较高效率，但不具特异靶向性。使用超分子复合物载体，通过受体介导内吞作用，对真核生物进行外源基因的转移，是近十年发展起来的一种非病毒载体基因转移技术,可以把目的基因转移到特异组织细胞内。本研究检测受体介导基因转移靶向性和表达效率。
首先构建含β-gal基因的超分子复合物载体,零长度二步法使转铁蛋白和多聚赖氨酸发生共价交联，在适当的反应条件下，质粒pSVβ-gal可与转铁蛋白与多聚赖氨酸交联物由静电引力结合在一起。FITC标记转铁蛋白与多聚赖氨酸交联蛋白,对细胞表面Tf受体(TfR)表达分析进行分析。体外转染细胞分4组:超分子复合物处理组；脂质体转染对照组；质粒单独处理组；不处理对照组。 X-gal原位染色，计算机图象分析计算基因转染效率。
pSVβ-gal为含β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, LacZ)基因的真核表达质粒,作为报告基因可检测基因转移和表达系统的工作效率。SMMC7721和Hela细胞对 FITC标记的转铁蛋白与多聚赖氨酸交联蛋白内吞效率高,而 K562几乎没有内吞,这与文献报道的此几种细胞表面TfR分布情况结果一致。用已构建的超分子复合物载体和报告基因转染TfR表达程度不同的细胞株,检测受体介导基因转移表达系统的靶向性和效率,证明该系统有良好的靶向性;同脂质体介导的基因转移表达系统的比较性研究,显示受体介导基因转移表达效率非常低,小于1%,国外报道了一系列增加基因表达效率的方法,有待于进一步验证。
本课题系上海市高教局科学技术发展基金(95B07)资助
(1999-09-26收稿； 1999-12-30修回), http://www.100md.com