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编号:10288299
褪黑素受体在体内分布及信息转导通路的研究

     作者:刘志民 赵英 陆祖谦 沈玉美 谈雯 彭树勋

    单位:刘志民 赵英 陆祖谦 沈玉美 谈雯(第二军医大学长征医院内分泌科,上海 200003);彭树勋(香港大学医学院生理系)

    关键词:

    中国病理生理杂志0010261

    目的:了解褪黑素受体(MR)体内分布有助于阐明褪黑素(MEL)广泛生物学作用。方法:选用中期引产胎儿,取出心、肝、肺、肾、胃肠、甲状腺、胸腺、脾、外周血白细胞等组织。组织匀浆后,44 000×g离心25 min,分离出膜蛋白。然后应用放射配体法检测2-[125I]褪黑素([125I]-MEL,中科院原子能所产品)特异结合量;应用不同离心力离出线粒体、微粒体、细胞核、胞浆的亚细胞组分;应用GTPrS抑制试验,研究MR的信息转导通路。结果:1.MR在体内分布:应用Scatchard方法证实以上各组织均存在MR,其特异结合量(Bmax)在脾、肾上腺、甲状腺、胸腺、心、肺、肾、膀胱、胃肠、卵巢、睾丸、胰腺、肝、外周血白细胞分别为1.06±0.17、0.99±0.55、0.91±0.21、0.73±0.09、0.65±0.12、0.61±0.04、0.54±0.05、0.51±0.11、0.45±0.06、0.41±0.05、0.37±0.11、0.32±0.08、0.28±0.07、0.26±0.05(fmol/mg蛋白)。Kd在9~81 pmol/L。2.在亚细胞组分的分布:胸腺组织细胞核、线粒体、微粒体、胞浆MR比例分别为38.8%、33.9%、15.7%和11.9%;脾脏分别为40.3%、34.9%、18.2%和6.6%。肾上腺分别为50.6%、31.7%、16.7%和1.0%。3.特异性分析:细胞悬液中加入不同浓度(10-13~10-12mol/L)的化合物,比较对MR特异结合的抑制率IC50,2-[125I]褪黑素、褪黑素、6-氯褪黑素、6-羟褪黑素、5-HT、5-羟吲哚乙酸、5-乙酰吲哚、肾上腺素、乙酰胆碱分别为4.3±0.6、8.1±2.3、12.8±3.7、26.7±5.9、587.0±47.5,>10万、>10万、>10万、>10万,表明该结合位点对褪黑素高度特异性。4.GTPrS对胸腺、脾及肾等组织的特异结合量的影响,实验结果表明,GTPrS使MR特异结合量明显降低,且可伴亲合力改变。结论:A:人体许多组织中均存在2-[125I]-MEL特异结合部位、其特点为1.高亲和力(Kd 9~18 pmol/L);2. 低结合容量(Bmax 0.2~1.2 fmol/mg蛋白);3.可逆性结合、结合快、解离也快;4.对MEL高度特异性,符合特异结合部位的基本条件。这可解释为何MEL有抗衰老、抗肿瘤、免疫兴奋、镇痛、镇静及对内分泌系统有调节作用。B:亚细胞分布的研究表明:以细胞核含量最高,提示除膜机制外,尚可直接调节DNA的转录及蛋白合成过程;C:GTPrS抑制试验表明MR信息通路是通过Gi介导的。
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