褪黑素受体在体内分布及信息转导通路的研究
作者：刘志民 赵英 陆祖谦 沈玉美 谈雯 彭树勋
单位：刘志民 赵英 陆祖谦 沈玉美 谈雯(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010261
目的：了解褪黑素受体(MR)体内分布有助于阐明褪黑素(MEL)广泛生物学作用。方法：选用中期引产胎儿，取出心、肝、肺、肾、胃肠、甲状腺、胸腺、脾、外周血白细胞等组织。组织匀浆后，44 000×g离心25 min,分离出膜蛋白。然后应用放射配体法检测2-[125I]褪黑素([125I]-MEL,中科院原子能所产品)特异结合量；应用不同离心力离出线粒体、微粒体、细胞核、胞浆的亚细胞组分；应用GTPrS抑制试验，研究MR的信息转导通路。结果：1.MR在体内分布：应用Scatchard方法证实以上各组织均存在MR，其特异结合量(Bmax)在脾、肾上腺、甲状腺、胸腺、心、肺、肾、膀胱、胃肠、卵巢、睾丸、胰腺、肝、外周血白细胞分别为1.06±0.17、0.99±0.55、0.91±0.21、0.73±0.09、0.65±0.12、0.61±0.04、0.54±0.05、0.51±0.11、0.45±0.06、0.41±0.05、0.37±0.11、0.32±0.08、0.28±0.07、0.26±0.05(fmol/mg蛋白)。Kd在9～81 pmol/L。2.在亚细胞组分的分布：胸腺组织细胞核、线粒体、微粒体、胞浆MR比例分别为38.8%、33.9%、15.7%和11.9%；脾脏分别为40.3%、34.9%、18.2%和6.6%。肾上腺分别为50.6%、31.7%、16.7%和1.0%。3.特异性分析：细胞悬液中加入不同浓度(10-13～10-12mol/L)的化合物，比较对MR特异结合的抑制率IC50，2-[125I]褪黑素、褪黑素、6-氯褪黑素、6-羟褪黑素、5-HT、5-羟吲哚乙酸、5-乙酰吲哚、肾上腺素、乙酰胆碱分别为4.3±0.6、8.1±2.3、12.8±3.7、26.7±5.9、587.0±47.5，>10万、>10万、>10万、>10万，表明该结合位点对褪黑素高度特异性。4.GTPrS对胸腺、脾及肾等组织的特异结合量的影响，实验结果表明，GTPrS使MR特异结合量明显降低，且可伴亲合力改变。结论：A：人体许多组织中均存在2-[125I]-MEL特异结合部位、其特点为1.高亲和力(Kd 9～18 pmol/L);2. 低结合容量(Bmax 0.2～1.2 fmol/mg蛋白)；3.可逆性结合、结合快、解离也快；4.对MEL高度特异性，符合特异结合部位的基本条件。这可解释为何MEL有抗衰老、抗肿瘤、免疫兴奋、镇痛、镇静及对内分泌系统有调节作用。B：亚细胞分布的研究表明：以细胞核含量最高，提示除膜机制外，尚可直接调节DNA的转录及蛋白合成过程；C：GTPrS抑制试验表明MR信息通路是通过Gi介导的。, http://www.100md.com
单位：刘志民 赵英 陆祖谦 沈玉美 谈雯(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010261
目的：了解褪黑素受体(MR)体内分布有助于阐明褪黑素(MEL)广泛生物学作用。方法：选用中期引产胎儿，取出心、肝、肺、肾、胃肠、甲状腺、胸腺、脾、外周血白细胞等组织。组织匀浆后，44 000×g离心25 min,分离出膜蛋白。然后应用放射配体法检测2-[125I]褪黑素([125I]-MEL,中科院原子能所产品)特异结合量；应用不同离心力离出线粒体、微粒体、细胞核、胞浆的亚细胞组分；应用GTPrS抑制试验，研究MR的信息转导通路。结果：1.MR在体内分布：应用Scatchard方法证实以上各组织均存在MR，其特异结合量(Bmax)在脾、肾上腺、甲状腺、胸腺、心、肺、肾、膀胱、胃肠、卵巢、睾丸、胰腺、肝、外周血白细胞分别为1.06±0.17、0.99±0.55、0.91±0.21、0.73±0.09、0.65±0.12、0.61±0.04、0.54±0.05、0.51±0.11、0.45±0.06、0.41±0.05、0.37±0.11、0.32±0.08、0.28±0.07、0.26±0.05(fmol/mg蛋白)。Kd在9～81 pmol/L。2.在亚细胞组分的分布：胸腺组织细胞核、线粒体、微粒体、胞浆MR比例分别为38.8%、33.9%、15.7%和11.9%；脾脏分别为40.3%、34.9%、18.2%和6.6%。肾上腺分别为50.6%、31.7%、16.7%和1.0%。3.特异性分析：细胞悬液中加入不同浓度(10-13～10-12mol/L)的化合物，比较对MR特异结合的抑制率IC50，2-[125I]褪黑素、褪黑素、6-氯褪黑素、6-羟褪黑素、5-HT、5-羟吲哚乙酸、5-乙酰吲哚、肾上腺素、乙酰胆碱分别为4.3±0.6、8.1±2.3、12.8±3.7、26.7±5.9、587.0±47.5，>10万、>10万、>10万、>10万，表明该结合位点对褪黑素高度特异性。4.GTPrS对胸腺、脾及肾等组织的特异结合量的影响，实验结果表明，GTPrS使MR特异结合量明显降低，且可伴亲合力改变。结论：A：人体许多组织中均存在2-[125I]-MEL特异结合部位、其特点为1.高亲和力(Kd 9～18 pmol/L);2. 低结合容量(Bmax 0.2～1.2 fmol/mg蛋白)；3.可逆性结合、结合快、解离也快；4.对MEL高度特异性，符合特异结合部位的基本条件。这可解释为何MEL有抗衰老、抗肿瘤、免疫兴奋、镇痛、镇静及对内分泌系统有调节作用。B：亚细胞分布的研究表明：以细胞核含量最高，提示除膜机制外，尚可直接调节DNA的转录及蛋白合成过程；C：GTPrS抑制试验表明MR信息通路是通过Gi介导的。, http://www.100md.com