PTA1参与活化内皮细胞和淋巴细胞间粘附的形态学观察
作者：佘恒 陈丽华 金伯泉
单位：佘恒(第四军医大学口腔医学院)；陈丽华(基础部免疫学教研室，陕西西安710032)；金伯泉(基础部免疫学教研室，陕西西安710032)
关键词：PTA1；内皮细胞；淋巴细胞；粘附；形态学
细胞与分子免疫学杂志000215
关键词：PTA1；内皮细胞；淋巴细胞；粘附；形态学 中图号：Q343.6
文献标识码：B
文章编号：1007-8738(2000)02-0138-01
血小板T细胞活化抗原1(platelet and T cell activation antigen1,PTA1)是1997年基因克隆的新分子，主要表达于血小板、活化T细胞和NK细胞表面，参与血小板的凝集、CTL的分化和NK细胞的杀伤等功能〔1〕。新近研究发现，PTA1在TNF-α和LPS活化的内皮细胞表面表达明显增强，且PTA1/Ig融合蛋白(10mg/L)可显著阻断活化Jurkat细胞与内皮细胞的粘附〔2〕。由于Jurkat细胞是1株急性T淋巴细胞白血病细胞系，不能完全反映正常活化T细胞与内皮细胞的关系，为进一步探讨正常状态下PTA1的功能，我们用形态学方法，初步观察了外周血活化淋巴细胞与活化内皮细胞粘 附过程中PTA1分子的作用。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 人脐静脉内皮细胞的培养 按文献〔3〕进行操作。简言之，培养瓶内加入少量2g/L明胶(覆盖瓶底)，置37℃包被30min。弃去瓶内明胶溶液，接种分离的人脐静脉内皮细胞，加入200mL/LFCS199培养基(内含内皮细胞生长因子和肝素)。待内皮细胞长至近单层，用1g/L胰酶-0.2g/LEDTA消化培养的内皮细胞， 并用上述培养基传代扩增。
1.2 活化淋巴细胞的制备 取肝素抗凝人外周血，叠加于淋巴细胞分离液上，离心(2000r/min)20min。取单个核细胞层，以无血清RPMI1640洗2次，再以100mL/LFCS-RPMI1640重悬细胞。加入PHA2mg/L，置37℃50mL/LCO2条件下培养72h后，加等体积含rHuIL-2105U/L的培养基。隔天再同上扩增1次，取PHA活化5～7d的淋巴 细胞备用。
, 百拇医药 1.3 内皮细胞与淋巴细胞的粘附阻断实验 在96孔平底培养板中，以HUVEC作为铺底细胞(1×104/孔)，于37℃50mL/LCO2条件下培养24h，使之紧密贴附。实验前6h，加入TNF-α(106U/L)刺激内皮细胞使之活化。再加入经PHA刺激活化的淋巴细胞(1×105/孔)，于37℃50mL/LCO2条件下培养2h。用PBS轻柔洗去未粘附的活化淋巴细胞，于Leica倒置显微镜下观察并照相。粘附阻断实验中，在加入活化淋巴细胞时，分别加入PTA1/Ig融合蛋白或人IgG对照，观察其对活化内皮细胞与活化淋巴细胞粘附的特异性阻断 作用。
2 结果
本文结果表明，活化内皮细胞与外周血中的活化淋巴细胞之间产生紧密粘附,可见活化淋巴细胞紧密粘附在活化内皮细胞表面。加入PTA1/Ig融合蛋白后，可显著降低活化内皮细胞与活化淋巴细胞间的粘附，发现每个活化内皮细胞仅粘附数量极少的活化淋巴细胞，且活化内皮细胞的形态亦从长梭形变为椭圆形，并伸出许多细长的突起。加入人IgG对二者间的粘附 作用无显著影响。
, 百拇医药
3 讨论
我们用形态学方法初步证实，PTA1/Ig融合蛋白可显著降低活化内皮细胞与外周血中活化淋巴细胞间的粘附，表明PTA1分子以直接或间接的方式参与了活化内皮细胞与活化淋巴细胞间的粘附。Shibuya等发现，DNAM-1(PTA1)参与了T淋巴细胞杀伤过程中的粘附，并证明其在发挥粘附作用的过程中需LFA-1参与〔3〕。为此我们推测，PTA1是一种参与淋巴细胞与血管内皮细胞间粘附的重要分子。本实验的结果可为进一步深入研究PTA1 分子的功能提供一定的实验依据。
基金项目:全军九五科研基金资助，No.96-M-141
作者简介：郭衍，男，30岁，硕士生安市长乐西路15号，Tel.(029)3375330 2000byJCellMolImmunolPresswww.immunology.net/jcmi;Email.immuedit@fmmu.edu.cn 返回主列表(ReturntoMainList)
, 百拇医药
参考文献：
〔1〕Shherrington PD,Scott JL,Jin B,etal.TLis A1(PTA1) activationantigen implicated in T cell differentiation and platelet activati on is a member of the immunoglobulin superfamily exhibiting distinctiveregulation of expression〔J〕.J Biol Chem,1997；272(35)：21735-21744.
〔2〕陈丽华，金伯泉，贾卫，等.一种新的人内皮细胞可诱导性粘附分子PTA1的表达、调变及粘附功能的研究〔J〕.细胞 与分子免疫学杂志，2000；16(1)：21-25.
〔3〕Quinlan K L,Song IS,Naik SM,etal.VCAM-1 expression on hman dermal microvascular endothelial cells is directly and specifically upregulatedbysubstanceP〔J〕.Immunology,1999;162:1656-1661.
〔4〕Shibuya K,Lanier LL,Phillips JH,etal.Physical and functional association of LFA-1 with DNAM-1 adhesion molecule〔J〕.Immunity ,1999;11:615-623.
收稿日期：1999-09-22
修回日期：1999-10-25, 百拇医药
单位：佘恒(第四军医大学口腔医学院)；陈丽华(基础部免疫学教研室，陕西西安710032)；金伯泉(基础部免疫学教研室，陕西西安710032)
关键词：PTA1；内皮细胞；淋巴细胞；粘附；形态学
细胞与分子免疫学杂志000215
关键词：PTA1；内皮细胞；淋巴细胞；粘附；形态学 中图号：Q343.6
文献标识码：B
文章编号：1007-8738(2000)02-0138-01
血小板T细胞活化抗原1(platelet and T cell activation antigen1,PTA1)是1997年基因克隆的新分子，主要表达于血小板、活化T细胞和NK细胞表面，参与血小板的凝集、CTL的分化和NK细胞的杀伤等功能〔1〕。新近研究发现，PTA1在TNF-α和LPS活化的内皮细胞表面表达明显增强，且PTA1/Ig融合蛋白(10mg/L)可显著阻断活化Jurkat细胞与内皮细胞的粘附〔2〕。由于Jurkat细胞是1株急性T淋巴细胞白血病细胞系，不能完全反映正常活化T细胞与内皮细胞的关系，为进一步探讨正常状态下PTA1的功能，我们用形态学方法，初步观察了外周血活化淋巴细胞与活化内皮细胞粘 附过程中PTA1分子的作用。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 人脐静脉内皮细胞的培养 按文献〔3〕进行操作。简言之，培养瓶内加入少量2g/L明胶(覆盖瓶底)，置37℃包被30min。弃去瓶内明胶溶液，接种分离的人脐静脉内皮细胞，加入200mL/LFCS199培养基(内含内皮细胞生长因子和肝素)。待内皮细胞长至近单层，用1g/L胰酶-0.2g/LEDTA消化培养的内皮细胞， 并用上述培养基传代扩增。
1.2 活化淋巴细胞的制备 取肝素抗凝人外周血，叠加于淋巴细胞分离液上，离心(2000r/min)20min。取单个核细胞层，以无血清RPMI1640洗2次，再以100mL/LFCS-RPMI1640重悬细胞。加入PHA2mg/L，置37℃50mL/LCO2条件下培养72h后，加等体积含rHuIL-2105U/L的培养基。隔天再同上扩增1次，取PHA活化5～7d的淋巴 细胞备用。
, 百拇医药 1.3 内皮细胞与淋巴细胞的粘附阻断实验 在96孔平底培养板中，以HUVEC作为铺底细胞(1×104/孔)，于37℃50mL/LCO2条件下培养24h，使之紧密贴附。实验前6h，加入TNF-α(106U/L)刺激内皮细胞使之活化。再加入经PHA刺激活化的淋巴细胞(1×105/孔)，于37℃50mL/LCO2条件下培养2h。用PBS轻柔洗去未粘附的活化淋巴细胞，于Leica倒置显微镜下观察并照相。粘附阻断实验中，在加入活化淋巴细胞时，分别加入PTA1/Ig融合蛋白或人IgG对照，观察其对活化内皮细胞与活化淋巴细胞粘附的特异性阻断 作用。
2 结果
本文结果表明，活化内皮细胞与外周血中的活化淋巴细胞之间产生紧密粘附,可见活化淋巴细胞紧密粘附在活化内皮细胞表面。加入PTA1/Ig融合蛋白后，可显著降低活化内皮细胞与活化淋巴细胞间的粘附，发现每个活化内皮细胞仅粘附数量极少的活化淋巴细胞，且活化内皮细胞的形态亦从长梭形变为椭圆形，并伸出许多细长的突起。加入人IgG对二者间的粘附 作用无显著影响。
, 百拇医药
3 讨论
我们用形态学方法初步证实，PTA1/Ig融合蛋白可显著降低活化内皮细胞与外周血中活化淋巴细胞间的粘附，表明PTA1分子以直接或间接的方式参与了活化内皮细胞与活化淋巴细胞间的粘附。Shibuya等发现，DNAM-1(PTA1)参与了T淋巴细胞杀伤过程中的粘附，并证明其在发挥粘附作用的过程中需LFA-1参与〔3〕。为此我们推测，PTA1是一种参与淋巴细胞与血管内皮细胞间粘附的重要分子。本实验的结果可为进一步深入研究PTA1 分子的功能提供一定的实验依据。
基金项目:全军九五科研基金资助，No.96-M-141
作者简介：郭衍，男，30岁，硕士生安市长乐西路15号，Tel.(029)3375330 2000byJCellMolImmunolPresswww.immunology.net/jcmi;Email.immuedit@fmmu.edu.cn 返回主列表(ReturntoMainList)
, 百拇医药
参考文献：
〔1〕Shherrington PD,Scott JL,Jin B,etal.TLis A1(PTA1) activationantigen implicated in T cell differentiation and platelet activati on is a member of the immunoglobulin superfamily exhibiting distinctiveregulation of expression〔J〕.J Biol Chem,1997；272(35)：21735-21744.
〔2〕陈丽华，金伯泉，贾卫，等.一种新的人内皮细胞可诱导性粘附分子PTA1的表达、调变及粘附功能的研究〔J〕.细胞 与分子免疫学杂志，2000；16(1)：21-25.
〔3〕Quinlan K L,Song IS,Naik SM,etal.VCAM-1 expression on hman dermal microvascular endothelial cells is directly and specifically upregulatedbysubstanceP〔J〕.Immunology,1999;162:1656-1661.
〔4〕Shibuya K,Lanier LL,Phillips JH,etal.Physical and functional association of LFA-1 with DNAM-1 adhesion molecule〔J〕.Immunity ,1999;11:615-623.
收稿日期：1999-09-22
修回日期：1999-10-25, 百拇医药