采用间接免疫荧光法监测流行性出血热疫苗接种3年后的人群抗体水平
作者：王培 杨庆民
单位：(银川铁路分局卫生防疫站，银川 750011)
关键词：出血热；疫苗；接种；抗体；间接荧光抗体
宁夏医学院学报000208 摘要：目的：研究接种疫苗3年后人群抗体水平及间接免疫荧光抗体检测方法在流行性出血热免疫抗体检测中的应用。方法：采用间接免疫荧光法测定特异性IgG抗体，并对266例血清样本进行分析。结果：全程接种与未加强者抗体阳性率分别为70.63%，59.79%，并拍摄到抗原抗体免疫荧光结合物。结论：全程接种疫苗3年后人群抗体保持较高水平，加强接种后免疫效果更佳。
中图分类号：R392.11 文献标识码：A
文章编号：1005-8486(2000)02-0097-02
, http://www.100md.com
Application of Indirect Immunofluorescent Antibody to Antibody Level Determination
WANG Pei, YANG Qing-min
(Yinchuan Railway Health and Anti-Epidemic Station, Yinchuan 750011)
Abstract: Objective: To study antibody level in population vaccinated with vaccine against epidemic Hemorrhagic Fever. Methods: The particular antibody IgG in 266 sera was determined with IFAT method. Results: The positive rates of IgG antibody in population after full dose vaccination with or without booster were 70.63%, 59.79% respectively. Conclusion: After three years of vaccination, the antibody levels following full dose voccination maintain higher, booster seems to be necessary for raising the antibody titre.
, http://www.100md.com
Key words: epidemic; hemorrhagic fever; vaccine; indirect immunofluorescent antibody
我们采用流行性出血热灭活疫苗，于1995年11月至1996年1月对宝中铁路沿线流行性出血热流行疫区的铁路职工、家属3千余人进行了疫苗接种。为了了解疫苗接种3年后人群抗体水平，我们采用间接免疫荧光法对其中266人进行了血清抗体检测，报告如下。
1 材料与方法
1.1 疫苗 采用卫生部兰州生物制品所生产，以流行性出血热(HFRS)I型(野鼠型)病毒感染新生乳鼠，取脑组织提纯HFRS病毒糖囊膜蛋白(G1G2)和核壳蛋白(NP)有效成分，经灭活并加佐剂制成具有免疫活性的亚单位组分疫苗。疫苗批号为950403。
1.2 研究区域及对象 对宝中线固原、平凉、同心等HFRS流行区域内无HFRS病史的健康人群随机选择接种3针以上的职工家属266人作为观察对象。
, http://www.100md.com
1.3 接种方法 于0(当天)、14、35d各用一次性注射器抽取振荡摇匀的HFRS疫苗1ml，注入经局部消毒的上臂三角肌肌肉内注射，1年后加强1针，剂量1ml，方法同上。
1.4 血清学效果评价 疫苗接种后3年，每人无菌采集静脉血3ml，分离血清，用间接免疫荧光法(IFAT)测定特异性IgG荧光抗体并进行免疫荧光照相。
1.5 试剂 Vero-E6细胞抗原片(浙江省卫生防疫站出血热室)批号为980317，羊抗人IgG荧光抗
体(浙江省卫生防疫站出血热室)批号为980521。伊文斯兰(浙江省卫生防疫站出血热室)批号为980318。出血热阳性血清(西安铁路中心卫生防疫站)。
1.6 操作方法 从低温冰箱中取出所需EHF病毒细胞抗原片，冷风吹干。将待检人疫苗免疫血清从1∶10开始，做倍量稀释，至1∶160(健康人调查血清稀释至1∶20)，再将各稀释度血清5～10μl按顺序分别滴加抗原片，并放37℃小浴箱作用30min，反应后的抗原片用蒸馏水漂洗后，用pH 7.2，0.01mol/L PBS震荡轻洗2次(3min/次，中间换液1次)后，再用漂洗1次，冷风吹干。在抗原片上各孔滴加羊抗人IgG荧光血清或同种动物血清制成的荧光血清(1ml荧光抗体，加1ml PBS、2ml 1∶4000伊文斯兰PBS液，即成1∶4的荧光体，内含伊文斯兰1∶8000)后，置37℃水浴箱中，作用30min。然后按照漂洗步骤振洗，冷风吹干。在抗原片上滴加甘油PBS封片后，荧光显微镜观察结果[1]。
, http://www.100md.com
1.7 质量控制
每次实验做(1)样本的自发荧光对照；(2)特异性对照；(3)阳性对照；(4)阴性对照；(5)同一样本做双份染色，对比观察；(6)温度、湿度及实验用器具做全面的室内质量控制。
1.8 血清抗原片的判断标准
荧光位于抗原细胞的质内及周围。在已经掌握抗原特征的情况下，可以不作免疫荧光阻断实验。
结果判断标准 以1∶10出现抗原抗体特异性的荧光结合物为阳性(即保护性抗体)，以出现特异性荧光颗粒的最高稀释度为该血清的抗体滴度。
2 结果
2.1 接种情况 所采观察样本266人中4针全程接种者165人，占样本总数的62.03%，接种3针而未接种加强针者101人，占样本总数的37.97%。
, 百拇医药
2.2 人群分布 观察样本中男性152人，占57.14%，女性114人，占42.86%；职业以干部职工为主，为210人，占观察总数的78.95%，其余是学生，为56人，占观察总数的21.05%。
2.3 抗体测定266人份血清中抗体阳转180人，阳转率为67.67%，其中接种4针者165人，阳转118人，阳转率为71.51%，接种3针者101人，阳转62人，阳转率为59.41%。经t检验，P<0.05，有显著性差异。
3 讨论
建德市在研究中发现，疫苗接种1年后血清抗体阳性率降至24%[2]，罗兆庄等[3]发现接种疫苗180d后血清抗体阳性率降至36.36%，360d后降至4.55%。龚震宇等[4]研究显示，全程接种疫苗1年对人群的保护率为100%，加强针后一个流行高峰对人群的保护率也为100%。这说明用疫苗预防HFRS的近期和中期的效果是明显的。
, http://www.100md.com
本次结果表明，全程接种疫苗后，抗体阳性率已由1年后的100%降至3年后的70.63%，未加强者则降至59.79%。有研究结果表明[3]疫苗全程接种后血清抗体持续时间较短，加强针后血清抗体阳性率明显上升，加强接种十分必要。本次研究表明全程接种3年后抗体阳性率与注射加强针3年后的抗体阳性率有显著性差异，从疫苗预防远期效果看，虽然抗体阳性率有所下降，但是加强注射后的预防效果还是很明显，对人群的保护率能保持较高水平，这一结论与国家“八五”课题攻关协作组的研究结果相一致。疫苗接种3年来，在研究区域周边地区年年有新发病例的情况下，研究区域未发生1例出血热疫情也证明了这一点。
建议HFRS生产厂家运用先进技术，在保持原有效价的基础之上对疫苗进行提纯、浓缩技术改造，减少免疫针次，增强长远免疫力。为现场全程及加强接种创造条件。
本次研究在没有参考资料的情况下，经过多方摸索和实验操作，成功地采用IFAT进行了抗原抗体结合物测定。荧光显微镜为日本产奥林帕斯BX40型(带自动照相装置)。对抗原抗体结合物进行了目测鉴定及定点拍摄，拍摄到的结合物有个体、团聚体，形态清楚，边缘清晰，便于观察和资料保存。
, http://www.100md.com
(本课题得到银川铁路分局总工办的大力支持和帮助，谨表谢意)
宁夏科委立项课题
参考文献：
[1] 李影林.中华医学检验全书[M].北京：人民卫生出版社，1996
[2] 叶克龙.建德市流行性出血热Ⅰ型灭活疫苗的安全性及免疫效果观察[J].中国媒介生物学及控制杂志，1996，7(4)：248
[3] 罗兆庄.安徽省流行性出血热Ⅰ型灭活疫苗的安全性免疫性及其流行病学效果考核[J].中国媒介生物学及控制杂志，1996，7(4)：257
[4] 龚震宇，赵芝雅，翁景清，等.流行性出血热Ⅰ型灭活疫苗血清学免疫效果研究[J].中国公共卫生杂志，1998，5：266
[5] 陈冬星，程 夷.流行性出血热免疫球蛋白的研制[J].微生物学免疫学进展，1994，(3)：1
收稿日期：1999-08-08, 百拇医药
单位：(银川铁路分局卫生防疫站，银川 750011)
关键词：出血热；疫苗；接种；抗体；间接荧光抗体
宁夏医学院学报000208 摘要：目的：研究接种疫苗3年后人群抗体水平及间接免疫荧光抗体检测方法在流行性出血热免疫抗体检测中的应用。方法：采用间接免疫荧光法测定特异性IgG抗体，并对266例血清样本进行分析。结果：全程接种与未加强者抗体阳性率分别为70.63%，59.79%，并拍摄到抗原抗体免疫荧光结合物。结论：全程接种疫苗3年后人群抗体保持较高水平，加强接种后免疫效果更佳。
中图分类号：R392.11 文献标识码：A
文章编号：1005-8486(2000)02-0097-02
, http://www.100md.com
Application of Indirect Immunofluorescent Antibody to Antibody Level Determination
WANG Pei, YANG Qing-min
(Yinchuan Railway Health and Anti-Epidemic Station, Yinchuan 750011)
Abstract: Objective: To study antibody level in population vaccinated with vaccine against epidemic Hemorrhagic Fever. Methods: The particular antibody IgG in 266 sera was determined with IFAT method. Results: The positive rates of IgG antibody in population after full dose vaccination with or without booster were 70.63%, 59.79% respectively. Conclusion: After three years of vaccination, the antibody levels following full dose voccination maintain higher, booster seems to be necessary for raising the antibody titre.
, http://www.100md.com
Key words: epidemic; hemorrhagic fever; vaccine; indirect immunofluorescent antibody
我们采用流行性出血热灭活疫苗，于1995年11月至1996年1月对宝中铁路沿线流行性出血热流行疫区的铁路职工、家属3千余人进行了疫苗接种。为了了解疫苗接种3年后人群抗体水平，我们采用间接免疫荧光法对其中266人进行了血清抗体检测，报告如下。
1 材料与方法
1.1 疫苗 采用卫生部兰州生物制品所生产，以流行性出血热(HFRS)I型(野鼠型)病毒感染新生乳鼠，取脑组织提纯HFRS病毒糖囊膜蛋白(G1G2)和核壳蛋白(NP)有效成分，经灭活并加佐剂制成具有免疫活性的亚单位组分疫苗。疫苗批号为950403。
1.2 研究区域及对象 对宝中线固原、平凉、同心等HFRS流行区域内无HFRS病史的健康人群随机选择接种3针以上的职工家属266人作为观察对象。
, http://www.100md.com
1.3 接种方法 于0(当天)、14、35d各用一次性注射器抽取振荡摇匀的HFRS疫苗1ml，注入经局部消毒的上臂三角肌肌肉内注射，1年后加强1针，剂量1ml，方法同上。
1.4 血清学效果评价 疫苗接种后3年，每人无菌采集静脉血3ml，分离血清，用间接免疫荧光法(IFAT)测定特异性IgG荧光抗体并进行免疫荧光照相。
1.5 试剂 Vero-E6细胞抗原片(浙江省卫生防疫站出血热室)批号为980317，羊抗人IgG荧光抗
体(浙江省卫生防疫站出血热室)批号为980521。伊文斯兰(浙江省卫生防疫站出血热室)批号为980318。出血热阳性血清(西安铁路中心卫生防疫站)。
1.6 操作方法 从低温冰箱中取出所需EHF病毒细胞抗原片，冷风吹干。将待检人疫苗免疫血清从1∶10开始，做倍量稀释，至1∶160(健康人调查血清稀释至1∶20)，再将各稀释度血清5～10μl按顺序分别滴加抗原片，并放37℃小浴箱作用30min，反应后的抗原片用蒸馏水漂洗后，用pH 7.2，0.01mol/L PBS震荡轻洗2次(3min/次，中间换液1次)后，再用漂洗1次，冷风吹干。在抗原片上各孔滴加羊抗人IgG荧光血清或同种动物血清制成的荧光血清(1ml荧光抗体，加1ml PBS、2ml 1∶4000伊文斯兰PBS液，即成1∶4的荧光体，内含伊文斯兰1∶8000)后，置37℃水浴箱中，作用30min。然后按照漂洗步骤振洗，冷风吹干。在抗原片上滴加甘油PBS封片后，荧光显微镜观察结果[1]。
, http://www.100md.com
1.7 质量控制
每次实验做(1)样本的自发荧光对照；(2)特异性对照；(3)阳性对照；(4)阴性对照；(5)同一样本做双份染色，对比观察；(6)温度、湿度及实验用器具做全面的室内质量控制。
1.8 血清抗原片的判断标准
荧光位于抗原细胞的质内及周围。在已经掌握抗原特征的情况下，可以不作免疫荧光阻断实验。
结果判断标准 以1∶10出现抗原抗体特异性的荧光结合物为阳性(即保护性抗体)，以出现特异性荧光颗粒的最高稀释度为该血清的抗体滴度。
2 结果
2.1 接种情况 所采观察样本266人中4针全程接种者165人，占样本总数的62.03%，接种3针而未接种加强针者101人，占样本总数的37.97%。
, 百拇医药
2.2 人群分布 观察样本中男性152人，占57.14%，女性114人，占42.86%；职业以干部职工为主，为210人，占观察总数的78.95%，其余是学生，为56人，占观察总数的21.05%。
2.3 抗体测定266人份血清中抗体阳转180人，阳转率为67.67%，其中接种4针者165人，阳转118人，阳转率为71.51%，接种3针者101人，阳转62人，阳转率为59.41%。经t检验，P<0.05，有显著性差异。
3 讨论
建德市在研究中发现，疫苗接种1年后血清抗体阳性率降至24%[2]，罗兆庄等[3]发现接种疫苗180d后血清抗体阳性率降至36.36%，360d后降至4.55%。龚震宇等[4]研究显示，全程接种疫苗1年对人群的保护率为100%，加强针后一个流行高峰对人群的保护率也为100%。这说明用疫苗预防HFRS的近期和中期的效果是明显的。
, http://www.100md.com
本次结果表明，全程接种疫苗后，抗体阳性率已由1年后的100%降至3年后的70.63%，未加强者则降至59.79%。有研究结果表明[3]疫苗全程接种后血清抗体持续时间较短，加强针后血清抗体阳性率明显上升，加强接种十分必要。本次研究表明全程接种3年后抗体阳性率与注射加强针3年后的抗体阳性率有显著性差异，从疫苗预防远期效果看，虽然抗体阳性率有所下降，但是加强注射后的预防效果还是很明显，对人群的保护率能保持较高水平，这一结论与国家“八五”课题攻关协作组的研究结果相一致。疫苗接种3年来，在研究区域周边地区年年有新发病例的情况下，研究区域未发生1例出血热疫情也证明了这一点。
建议HFRS生产厂家运用先进技术，在保持原有效价的基础之上对疫苗进行提纯、浓缩技术改造，减少免疫针次，增强长远免疫力。为现场全程及加强接种创造条件。
本次研究在没有参考资料的情况下，经过多方摸索和实验操作，成功地采用IFAT进行了抗原抗体结合物测定。荧光显微镜为日本产奥林帕斯BX40型(带自动照相装置)。对抗原抗体结合物进行了目测鉴定及定点拍摄，拍摄到的结合物有个体、团聚体，形态清楚，边缘清晰，便于观察和资料保存。
, http://www.100md.com
(本课题得到银川铁路分局总工办的大力支持和帮助，谨表谢意)
宁夏科委立项课题
参考文献：
[1] 李影林.中华医学检验全书[M].北京：人民卫生出版社，1996
[2] 叶克龙.建德市流行性出血热Ⅰ型灭活疫苗的安全性及免疫效果观察[J].中国媒介生物学及控制杂志，1996，7(4)：248
[3] 罗兆庄.安徽省流行性出血热Ⅰ型灭活疫苗的安全性免疫性及其流行病学效果考核[J].中国媒介生物学及控制杂志，1996，7(4)：257
[4] 龚震宇，赵芝雅，翁景清，等.流行性出血热Ⅰ型灭活疫苗血清学免疫效果研究[J].中国公共卫生杂志，1998，5：266
[5] 陈冬星，程 夷.流行性出血热免疫球蛋白的研制[J].微生物学免疫学进展，1994，(3)：1
收稿日期：1999-08-08, 百拇医药