高效液相色谱法测定滋心阴口服液中芍药甙的含量
作者：萧雪梅 黄坚彤
单位：萧雪梅(528300 广东省顺德市第一人民医院)；黄坚彤(529100 广东省新会市第一人民医院)
关键词：滋心阴口服液；芍药甙；色谱法，高压液相
实用医学杂志000543 摘 要 目的：探讨高效液相色谱法测定滋心阴口服液中芍药甙的含量。方法：色谱柱为YWG-C18(10 μ m，4.6 mm×300 mm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液-异丙醇(15∶85∶0.5)；在230 nm波长处检测。结果：在0.04～1.02 μ g范围内具有良好线性关系(r=0.9998)，样品平均回收率为97.3%(n=5，RSD为2.0%)。结论：该法结果准确，专属性强。
滋心阴口服液由赤芍、麦冬、北沙参、三七4味中药加工制成，具有滋养心阴，活血止痛之功效。质量标准收载于《中国药典》1995年版、1997年增补本[含量测定]项下为总皂甙的测定，而方中赤芍、麦冬、三七都含有皂甙类成份，因此含量测定专属性不强，笔者应用高效液相色谱法对方中赤芍所含芍药甙进行了含量测定，并进行了方法学考察。
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1 材料与方法
1.1 仪器与试药 Waters 510输液泵，Waters 490紫外检测器，Rheodyne 7125定量进样阀，Waters 740色谱数据处理机。芍药甙对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：0736-9811)。样品购于市场。乙腈为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件 色谱柱：YWG-C18(10 μ m，4.6 mm×300 mm)大连物化所；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液-异丙醇(15∶85∶0.5)；检测波长230 nm；柱温：室温；流速：10 ml/min；进样量：20 μ l。
1.3 实验方法
1.3.1 线性关系 精密称取芍药甙对照品10.2 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再分别精密吸取1，5，10，15，20，25 ml置50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；照上述色谱条件进样20 μ l，测定峰面积。以芍药甙的峰面积(Y)对其浓度(X)作图，得一直线，其回归方程为：Y=23314.1X-1233；r=0.9998。结果表明：芍药甙进样量在0.04～1.02 μ g范围内具有良好线性关系。对照品和样品色谱图见图1。
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图1 高效液相色谱图
1.3.2 精密度试验 取芍药甙高、中、低浓度的流动相稀释液，于同一天内重复测定5次，每次20 μ l，相对标准偏差(RSD)为0.8%～1.6%。
1.3.3 重现性 取本品(批号980816)，按样品测定项下方法重复提取测定5次，芍药甙含量为2.5，2.6，2.5，2.5，2.5 mg/10 ml，RSD为1.8%。
1.3.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液，于24 h内不同时间进样检测。结果表明稳定性良好，RSD为1.2%，n=10。
1.3.5 加样回收试验 精密量取已知含量的滋心阴口服液，分别精密加入芍药甙对照品。各份均按样品测定项下方法操作，计算回收率，5次测定结果，平均回收率为97.3%，RSD为2.0%。
, http://www.100md.com 1.3.6 样品测定 精密量取滋心阴口服液10 ml，置分液漏斗中，加水饱和正丁醇提取4次(每次10 ml)，合并正丁醇提取液，加氨试液10 ml洗涤，弃去氨试液层，正丁醇层置水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解并置50 ml置瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密吸取上述溶液10 ml，置25 ml置瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得，按上述色谱条件测定。
2 结果
芍药甙含量测定结果见表1。
表1 芍药甙含量测定结果(n=5) 批号
含量(mg/10 ml)
RSD(%)
980816
2.5
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1.8
970711
2.8
1.3
980215
3.5
1.8
3 讨论
正丁醇提取液颜色较深，加氨试液洗涤，可除去提取液中黄酮等酚酸性杂质，清洁供试液，减少供试液对色谱柱的污染。
供试品曾采用氧化铝柱，D-101大孔树脂进行纯化前处理，但比较繁琐，不利于快速测定，且回收率偏低，所以采用了溶剂萃取方法。
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流动相曾经摸索过甲醇：水(35∶65)[1]，乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)[2]，乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾(15∶85)[2]，但芍药甙色谱峰峰形不对称；在流动相中加入异丙醇可对芍药甙的色谱峰进行修饰，使色谱峰峰形对称且基线分离。
试验表明，芍药甙在0.04～1.02 μ g范围内具有良好线性关系。本法测定滋心阴口服液中芍药甙含量能排除方中其它成份干扰，方法准确，专属性强，可作为质量控制的方法。
参考文献
1，梁 宏，王春芳. 高效液相色谱法测定. 八珍丸中芍药甙的含量. 药物分析杂志，1999，19(1)：44.
2，王宝琴. 中成药质量标准与标准物质研究. 北京：中国科技出版社，1994. 34，389., 百拇医药
单位：萧雪梅(528300 广东省顺德市第一人民医院)；黄坚彤(529100 广东省新会市第一人民医院)
关键词：滋心阴口服液；芍药甙；色谱法，高压液相
实用医学杂志000543 摘 要 目的：探讨高效液相色谱法测定滋心阴口服液中芍药甙的含量。方法：色谱柱为YWG-C18(10 μ m，4.6 mm×300 mm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液-异丙醇(15∶85∶0.5)；在230 nm波长处检测。结果：在0.04～1.02 μ g范围内具有良好线性关系(r=0.9998)，样品平均回收率为97.3%(n=5，RSD为2.0%)。结论：该法结果准确，专属性强。
滋心阴口服液由赤芍、麦冬、北沙参、三七4味中药加工制成，具有滋养心阴，活血止痛之功效。质量标准收载于《中国药典》1995年版、1997年增补本[含量测定]项下为总皂甙的测定，而方中赤芍、麦冬、三七都含有皂甙类成份，因此含量测定专属性不强，笔者应用高效液相色谱法对方中赤芍所含芍药甙进行了含量测定，并进行了方法学考察。
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1 材料与方法
1.1 仪器与试药 Waters 510输液泵，Waters 490紫外检测器，Rheodyne 7125定量进样阀，Waters 740色谱数据处理机。芍药甙对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：0736-9811)。样品购于市场。乙腈为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件 色谱柱：YWG-C18(10 μ m，4.6 mm×300 mm)大连物化所；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液-异丙醇(15∶85∶0.5)；检测波长230 nm；柱温：室温；流速：10 ml/min；进样量：20 μ l。
1.3 实验方法
1.3.1 线性关系 精密称取芍药甙对照品10.2 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再分别精密吸取1，5，10，15，20，25 ml置50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；照上述色谱条件进样20 μ l，测定峰面积。以芍药甙的峰面积(Y)对其浓度(X)作图，得一直线，其回归方程为：Y=23314.1X-1233；r=0.9998。结果表明：芍药甙进样量在0.04～1.02 μ g范围内具有良好线性关系。对照品和样品色谱图见图1。
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图1 高效液相色谱图
1.3.2 精密度试验 取芍药甙高、中、低浓度的流动相稀释液，于同一天内重复测定5次，每次20 μ l，相对标准偏差(RSD)为0.8%～1.6%。
1.3.3 重现性 取本品(批号980816)，按样品测定项下方法重复提取测定5次，芍药甙含量为2.5，2.6，2.5，2.5，2.5 mg/10 ml，RSD为1.8%。
1.3.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液，于24 h内不同时间进样检测。结果表明稳定性良好，RSD为1.2%，n=10。
1.3.5 加样回收试验 精密量取已知含量的滋心阴口服液，分别精密加入芍药甙对照品。各份均按样品测定项下方法操作，计算回收率，5次测定结果，平均回收率为97.3%，RSD为2.0%。
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2 结果
芍药甙含量测定结果见表1。
表1 芍药甙含量测定结果(n=5) 批号
含量(mg/10 ml)
RSD(%)
980816
2.5
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1.8
970711
2.8
1.3
980215
3.5
1.8
3 讨论
正丁醇提取液颜色较深，加氨试液洗涤，可除去提取液中黄酮等酚酸性杂质，清洁供试液，减少供试液对色谱柱的污染。
供试品曾采用氧化铝柱，D-101大孔树脂进行纯化前处理，但比较繁琐，不利于快速测定，且回收率偏低，所以采用了溶剂萃取方法。
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流动相曾经摸索过甲醇：水(35∶65)[1]，乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)[2]，乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾(15∶85)[2]，但芍药甙色谱峰峰形不对称；在流动相中加入异丙醇可对芍药甙的色谱峰进行修饰，使色谱峰峰形对称且基线分离。
试验表明，芍药甙在0.04～1.02 μ g范围内具有良好线性关系。本法测定滋心阴口服液中芍药甙含量能排除方中其它成份干扰，方法准确，专属性强，可作为质量控制的方法。
参考文献
1，梁 宏，王春芳. 高效液相色谱法测定. 八珍丸中芍药甙的含量. 药物分析杂志，1999，19(1)：44.
2，王宝琴. 中成药质量标准与标准物质研究. 北京：中国科技出版社，1994. 34，389., 百拇医药