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丙型肝炎产妇乳汁中HCV RNA和HCV抗体检测
作者：胡敏
单位：安徽省铜陵市妇幼保健院，244000
关键词：肝炎；丙型；RNA；病毒；分离和提纯；初乳
安徽医科大学学报000436
中图分类号 R342.24；R373.2；R977
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)04-0324-02
应用多聚酶链反应(PCR)对产妇血清中HCV RNA检测，以及用酶免疫方法对其乳汁和血清中抗HCV抗体的检测，以探讨乳汁和血清中HCV RNA和抗HCV-IgG、IgA、IgM的关系。
1 材料与方法
1.1 检测对象 均来自本院1996年～1999年产前检查产妇1 612例，其中有189例曾有输血史或献血浆史的产妇。住本院31例血清HCV RNA阳性产妇，年龄24～32岁，以及64例血清HCV RNA阴性产妇，年龄23～32岁。
1.2 检测标本 血清均为产妇分娩前清晨静脉血。乳汁标本处理：先用温水清洗一下，再用消毒巾消毒乳头，然后挤出3～6 ml乳汁放入无菌试管，4℃过夜后吸取中间乳清层，离心取上清液-20℃冻存待检。
1.3 方法
1.3.1 HCV RNA 采用多聚酶联(PCR)反应的方法进行检测。HCV RNA提取采用Chomczynski的异硫氰酸胍一步法〔1〕。套式PCR引物：在HCV RNA的5末端非编码区内选择内外引物，用AB199 Ⅰ型DNA合成仪合成并转化。逆转录反应：在样品RNA中加入逆转录反应混合液，42℃反应45 min,95℃ 5 min为逆转录产物cDNA。第1次PCR引物为外引物，模板为逆转录产物cDNA，第2次PCR引物为内引物，模板为第2次PCR产物，按常规进行PCR反应。
1.3.2 抗HCV抗体 抗HCV-IgG，ELISA间接法，试剂由上海科华公司提供；抗HCV-IgM，试剂由全军医学检验中心提供；HCV-IgA，EIA法，上海科华公司产品(HRP抗人IgA是DaKo公司产品)。
1.4 统计学处理 显著性差异采用χ2检验。
2 结果
2.1 31例HCV RNA阳性产妇的乳汁中抗HCV抗体IgG阳性为5例(16.1%)，IgA阳性为17例(54.8%)，IgM阳性为2例(6.45%)，并且乳汁抗体(至少一种抗体)阳性为22例(71.0%)，乳汁中HCV RNA阳性为1例(3.23%)，而血清中抗HCV抗体，IgG阳性为29例(93.5%)，IgA阳性数为13例(41.9%)，IgM阳性数为2例(6.45%)。并且血清中抗体(至少一种抗体)阳性数为30例(96.8%)(表1)。
表1 95例产妇乳汁和血清中抗HCV抗体阳性数(%) HCV RNA
n
乳汁
血清
IgG
IgA
IgM
IgG
IgA
IgM
+
31
5(16.1%)
17
(54.8%)
2
(6.45%)
29
(93.5%)
13
(41.9%)
2
(6.45%)
-
64
0
1
(1.56%)
0
2
(3.13%)
1
(1.56%)
0
2.2 64例HCV RNA阴性产妇的乳汁中，只有抗HCV-IgA阳性1例(1.56%)，IgG、IgM和HCV RNA阳性均为0，而血清中抗HCV-IgG阳性为2例(3.13%)，IgA阳性为1例(1.56%)，IgM均没有检出阳性。
2.3 31例HCV RNA阳性产妇中，有23例曾有输血史和2例曾有献血浆史。3 讨论
HCV RNA阳性产妇的乳汁中含抗HCV抗体数(71.0%)明显多于HCV RNA阴性产妇乳汁(1.56%)，其主要存在是以抗HCV-IgA为主的抗体〔2〕，并且三种抗体各自阳性率都明显高于HCV RNA阴性产妇(P<0.05)，反而HCV RNA阳性产妇乳汁中含抗HCV抗体数(71.0%)低于其血清中存在抗HCV抗体数(96.8%)。
由于HCAg刺激乳腺浆细胞，生成分泌型抗HCV IgA抗体，因而乳汁此三种抗体是以HCV-IgG为主的抗体。31例HCV RNA阳性产妇主要是慢性稳定型肝患者，因而无论是血清中还是乳汁中抗HCV IgG阳性率都高于抗HCV IgM阳性率。
作者简介：胡敏，男，33岁，主治医师
参考文献
1，冯明和.血清抗-HCV与HCV RNA检测临床意义的探讨.肝脏病杂志，1995；3(3)：154
2，苏建明.丙型肝炎产妇初乳中HVB-IgA的检测.临床检验杂志，1995；13(5)：252
2000-02-22收稿，2000-07-20修回