PMA促进CD18表达的信号转导通路及机制
作者：何晓文 刘宇健 钟纪根 卢建
单位：第二军医大学基础部病理生理教研室，上海 200433
关键词：
中国病理生理杂志0010281
细胞激活剂肉豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)是蛋白激酶C(PKC)的特异性激动剂，PMA具有促进U937细胞和HL-60细胞分化的作用，能使U937细胞和HL-60细胞膜上的整合素β2亚族CD18蛋白增多。但PMA诱导作用的机制尚未明了。目的：进一步阐明PMA促进CD18表达的信号传导通路及机制。方法：定量RT-PCR法、Northern杂交法、流式细胞术研究了细胞激活剂PMA对人组织淋巴瘤细胞系U937细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60 CD18表达的作用及有关的信号传导通路。结果：U937细胞经不同浓度的PMA(5 ng/mL～200 ng/mL)处理8 h后，CD18 mRNA表达水平均有明显提高，且具有明显的剂效关系。50 ng/mL PMA可使CD18 mRNA表达水平达最高，约为对照的3倍。50 ng/mL PMA对CD18 mRNA表达水平的诱导作用具有明显的时相性，随着作用时间延长，PMA诱导作用逐渐加强，作用24 h后，mRNA表达水平可达对照组的12.14倍。PMA还能引起U937细胞、HL-60细胞CD18膜蛋白的数量的增多。在HL-60细胞，伴随CD18膜蛋白数量的增多，细胞的粘附表型也由悬浮、分散变成贴壁、聚集状。PMA的诱导作用能被PKC或转录因子NF-κB的抑制剂十四烷基化多肽抑制剂Myr (Myr. Arg-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-Lys-Asn-Val)和pyrrolidinedithiocarbamate(APDC)所抑制，但不能被AP-1的抑制剂curcumin所阻断。本实验还发现PMA能诱导U937细胞的IL-8的mRNA表达，这种作用能被NF-κB的抑制剂所抑制。结论：PMA促进CD18表达的作用是通过激活该细胞的PKC，进而激活转录因子NF-κB实现的。由于CD18基因中缺乏NF-κB的结合元件，提示NF-κB的作用可能是间接的。尽管PMA可激活AP-1，CD18基因启动子上也有AP-1的结合位点，但AP-1不是促进CD18表达所必需的转录因子。IL-8有可能参与了PMA对CD18表达的诱导作用。, http://www.100md.com
单位：第二军医大学基础部病理生理教研室，上海 200433
关键词：
中国病理生理杂志0010281
细胞激活剂肉豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)是蛋白激酶C(PKC)的特异性激动剂，PMA具有促进U937细胞和HL-60细胞分化的作用，能使U937细胞和HL-60细胞膜上的整合素β2亚族CD18蛋白增多。但PMA诱导作用的机制尚未明了。目的：进一步阐明PMA促进CD18表达的信号传导通路及机制。方法：定量RT-PCR法、Northern杂交法、流式细胞术研究了细胞激活剂PMA对人组织淋巴瘤细胞系U937细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60 CD18表达的作用及有关的信号传导通路。结果：U937细胞经不同浓度的PMA(5 ng/mL～200 ng/mL)处理8 h后，CD18 mRNA表达水平均有明显提高，且具有明显的剂效关系。50 ng/mL PMA可使CD18 mRNA表达水平达最高，约为对照的3倍。50 ng/mL PMA对CD18 mRNA表达水平的诱导作用具有明显的时相性，随着作用时间延长，PMA诱导作用逐渐加强，作用24 h后，mRNA表达水平可达对照组的12.14倍。PMA还能引起U937细胞、HL-60细胞CD18膜蛋白的数量的增多。在HL-60细胞，伴随CD18膜蛋白数量的增多，细胞的粘附表型也由悬浮、分散变成贴壁、聚集状。PMA的诱导作用能被PKC或转录因子NF-κB的抑制剂十四烷基化多肽抑制剂Myr (Myr. Arg-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-Lys-Asn-Val)和pyrrolidinedithiocarbamate(APDC)所抑制，但不能被AP-1的抑制剂curcumin所阻断。本实验还发现PMA能诱导U937细胞的IL-8的mRNA表达，这种作用能被NF-κB的抑制剂所抑制。结论：PMA促进CD18表达的作用是通过激活该细胞的PKC，进而激活转录因子NF-κB实现的。由于CD18基因中缺乏NF-κB的结合元件，提示NF-κB的作用可能是间接的。尽管PMA可激活AP-1，CD18基因启动子上也有AP-1的结合位点，但AP-1不是促进CD18表达所必需的转录因子。IL-8有可能参与了PMA对CD18表达的诱导作用。, http://www.100md.com