心肌肽素在小鼠体内的分布与排泄
作者：张海松 胡军高 张淑莲 刘卫红 周治发
单位：张海松 胡军高 张淑莲 刘卫红(广州空军医院肝病研究所 广州 510602)；周治发(广州分析测试中心)
关键词：心肌肽素；125I标记；分布
广东药学000435 摘要 心肌肽素经125I标记后给小鼠静脉注射，观察其在体内的分布。结果显示，心肌肽素主要分布在肾、肝和血中，脑中的量几乎为零。排泄结果表明，药物主要以肾组织从尿中排出。
心肌肽素是采用膜分离技术从健康乳猪心脏提取的具有生物活性的多肽类物质[1]。它可以促进离体心肌细胞DNA合成，有利于心肌细胞的生长、增殖，表现出“心肌生长因子”样作用。临床上主要用于治疗心功能不全，心律失常等疾病[2]。为了解心肌肽素的体内分布，本文用氯胺T法对它进行标记，研究其在动物体内的分布和排泄情况。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器和试剂
SN-682放射免疫γ计数器(中科院上海原子核研究所日环仪器厂)。
心肌肽素，参考国外类似产品[1]，采用超滤方法本所自制；NIH小鼠(广东医学实验动物中心)，20±1g，雌雄随机；125I-碘化钠(中国原子能研究院同位素室)；氯胺T(广东顺德生物化学研究所)。
其余试剂均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 心肌肽素的标记 采用氯胺T蛋白标记法[3]。在盛有1ml 0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)和110μg心肌肽素的带盖反应瓶中，加入Na125I 0.74GBq和新配制的氯胺T 100μl(2mg/ml)反应3min后用偏重亚硫酸钠终止反应。
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1.2.2 标记物的分离 将上述反应液转移至Sephadex G25柱上分离，0.015mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)洗脱，1ml/min，1ml/管收集，分别在γ计数器上测定cpm值。以管数为横坐标，cpm为纵坐标绘制曲线，收集第一个放射性高峰洗脱液(125I标记的心肌肽素)，测得收集液的比放射性为1.56×108cpm/ml。
1.2.3 125I标记的心肌肽素体内分布试验 将125I标记的心肌肽素按1.56×107cpm/鼠静脉注射，分别在0.5、1、2、4、6、8、12h眼眶放血处死小鼠，取出各脏器吸干称重，测定放射性。另收集一组老鼠的尿和粪，测定放射性。每一时间点使用6只小鼠。
2 结果
以氯胺T法标记的心肌肽素，经Sephadex G25柱将标记物与游离125I-碘化钠分离，结果见图1。组分A为125I标记的心肌肽素，标记率为43.8%。
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图1 125I-碘化钠标记心肌肽素经Sephadex G25层析图
A：125I标记心肌肽素 B：125I-碘化钠
125I标记的心肌肽素在小鼠体内的分布见表1。在各脏器中的分布大小依次为肾>肝>血>肺>脾>肠>心>肌肉>脑。静注药物12h，总注射剂量的54.1%由粪和尿排出，47.8%通过尿排泄，6.3%由粪排泄。
表1 小鼠静注125I标记的心肌肽素后各脏器、血及粪尿的放射性计数(n=5，cpm/g组织)
0.5h
1h
2h
, 百拇医药
4h
6h
8h
12h
血
4700±487
2700±700
2200±320
1100±203
853±104
642±83
520±23
脑
, http://www.100md.com
240±34
142±27
77±47
58±41
48±14
29±12
27±10
肌肉
540±78
500±99
310±78
252±67
121±57
, 百拇医药
81±24
63±21
骨
3200±1080
2800±440
2500±400
2103±382
1063±123
1403±57
1103±67
心
1500±270
, 百拇医药
1100±160
800±110
690±32
331±37
250±15
207±95
肺
3100±450
2100±390
1400±210
1107±291
640±121
, 百拇医药
430±46
372±52
肝
5200±440
3200±270
3100±950
3010±875
2703±352
1607±127
1307±153
脾
2200±370
, http://www.100md.com
1700±200
1400±430
1009±441
990±137
563±78
540±23
肾
22000±1400
19000±5900
18107±3203
17003±5754
15073±3421
, http://www.100md.com
13072±2178
12073±2603
胃
5500±1200
4500±320
3307±961
3593±390
1007±178
760±191
647±152
肠
2100±575
, 百拇医药
1300±220
891±190
791±87
563±123
322±151
279±87
粪
—
150±31
791±23
2700±342
3903±413
, 百拇医药 4403±489
5703±477
尿
—
2800±140
7301±1203
9018±677
12452±2013
15137±2783
19732±5781
3 讨论
本研究用125I-碘化钠对心肌肽素进行标记，标记率为43.8%，比雷丹青等[4]的标记率55%和陈明等[5]的60%都低，这可能与心肌肽素本身的分子结构、加入放射性同位素的量和样品量的多少、反应条件等因素有关。
, 百拇医药
通过观察标记物在动物体内不同脏器的放射性分布，125I标记的心肌肽素在肾中一直最高，结合粪和尿的放射性计数结果，说明心肌肽素的代谢产物绝大部分经肾组织通过尿而排泄，这与雷丹青等[4]和刘秀文等[6]报道的多肽类因子的排泄结果一致。
结果显示，心肌肽素静注后能到达心肌部位，放射性强度虽然不高，但它的降低速度慢，有助于较长时间发挥作用。脑和肌肉中的放射性强度很低，提示心肌肽素可能不易通过血脑屏障或在疏水性组织中分布低。
参考文献
1.Bold De Flynn,A J. Cardio native I-A novel heart peptide with potent diuretic and natriuretic properties. Life Science. 1983，33：297～299
, 百拇医药
2.张修建，韩范锡，丁清明，等.心肌肽素的生化性质及其对心肌细胞DNA的影响.药物生物技术.1996，3(2)：98～99
3.王浩丹，周申主编.生物医学标记示踪技术.人民卫生出版社，1995：9～11
4.雷丹青，李晓飚，廖共山.中华眼镜蛇蛇毒生长因子在大鼠体内分布的研究.中国生化药物杂志.1997，18(3)：137～139
5.陈明.碘-125标记蝮蛇蛋白在小鼠体内的分布.动物学研究.1981，2(4)：99～100
6.刘秀文，汤肿明，柴彪新，等.家兔注射125I标记重组人表皮生长因子后的药代动力学.军事医学科学院院刊.1997，21(2)14～16
(收稿：1999-11-24；修回：2000-03-22), http://www.100md.com
单位：张海松 胡军高 张淑莲 刘卫红(广州空军医院肝病研究所 广州 510602)；周治发(广州分析测试中心)
关键词：心肌肽素；125I标记；分布
广东药学000435 摘要 心肌肽素经125I标记后给小鼠静脉注射，观察其在体内的分布。结果显示，心肌肽素主要分布在肾、肝和血中，脑中的量几乎为零。排泄结果表明，药物主要以肾组织从尿中排出。
心肌肽素是采用膜分离技术从健康乳猪心脏提取的具有生物活性的多肽类物质[1]。它可以促进离体心肌细胞DNA合成，有利于心肌细胞的生长、增殖，表现出“心肌生长因子”样作用。临床上主要用于治疗心功能不全，心律失常等疾病[2]。为了解心肌肽素的体内分布，本文用氯胺T法对它进行标记，研究其在动物体内的分布和排泄情况。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器和试剂
SN-682放射免疫γ计数器(中科院上海原子核研究所日环仪器厂)。
心肌肽素，参考国外类似产品[1]，采用超滤方法本所自制；NIH小鼠(广东医学实验动物中心)，20±1g，雌雄随机；125I-碘化钠(中国原子能研究院同位素室)；氯胺T(广东顺德生物化学研究所)。
其余试剂均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 心肌肽素的标记 采用氯胺T蛋白标记法[3]。在盛有1ml 0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)和110μg心肌肽素的带盖反应瓶中，加入Na125I 0.74GBq和新配制的氯胺T 100μl(2mg/ml)反应3min后用偏重亚硫酸钠终止反应。
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1.2.2 标记物的分离 将上述反应液转移至Sephadex G25柱上分离，0.015mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)洗脱，1ml/min，1ml/管收集，分别在γ计数器上测定cpm值。以管数为横坐标，cpm为纵坐标绘制曲线，收集第一个放射性高峰洗脱液(125I标记的心肌肽素)，测得收集液的比放射性为1.56×108cpm/ml。
1.2.3 125I标记的心肌肽素体内分布试验 将125I标记的心肌肽素按1.56×107cpm/鼠静脉注射，分别在0.5、1、2、4、6、8、12h眼眶放血处死小鼠，取出各脏器吸干称重，测定放射性。另收集一组老鼠的尿和粪，测定放射性。每一时间点使用6只小鼠。
2 结果
以氯胺T法标记的心肌肽素，经Sephadex G25柱将标记物与游离125I-碘化钠分离，结果见图1。组分A为125I标记的心肌肽素，标记率为43.8%。
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图1 125I-碘化钠标记心肌肽素经Sephadex G25层析图
A：125I标记心肌肽素 B：125I-碘化钠
125I标记的心肌肽素在小鼠体内的分布见表1。在各脏器中的分布大小依次为肾>肝>血>肺>脾>肠>心>肌肉>脑。静注药物12h，总注射剂量的54.1%由粪和尿排出，47.8%通过尿排泄，6.3%由粪排泄。
表1 小鼠静注125I标记的心肌肽素后各脏器、血及粪尿的放射性计数(n=5，cpm/g组织)
0.5h
1h
2h
, 百拇医药
4h
6h
8h
12h
血
4700±487
2700±700
2200±320
1100±203
853±104
642±83
520±23
脑
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240±34
142±27
77±47
58±41
48±14
29±12
27±10
肌肉
540±78
500±99
310±78
252±67
121±57
, 百拇医药
81±24
63±21
骨
3200±1080
2800±440
2500±400
2103±382
1063±123
1403±57
1103±67
心
1500±270
, 百拇医药
1100±160
800±110
690±32
331±37
250±15
207±95
肺
3100±450
2100±390
1400±210
1107±291
640±121
, 百拇医药
430±46
372±52
肝
5200±440
3200±270
3100±950
3010±875
2703±352
1607±127
1307±153
脾
2200±370
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1700±200
1400±430
1009±441
990±137
563±78
540±23
肾
22000±1400
19000±5900
18107±3203
17003±5754
15073±3421
, http://www.100md.com
13072±2178
12073±2603
胃
5500±1200
4500±320
3307±961
3593±390
1007±178
760±191
647±152
肠
2100±575
, 百拇医药
1300±220
891±190
791±87
563±123
322±151
279±87
粪
—
150±31
791±23
2700±342
3903±413
, 百拇医药 4403±489
5703±477
尿
—
2800±140
7301±1203
9018±677
12452±2013
15137±2783
19732±5781
3 讨论
本研究用125I-碘化钠对心肌肽素进行标记，标记率为43.8%，比雷丹青等[4]的标记率55%和陈明等[5]的60%都低，这可能与心肌肽素本身的分子结构、加入放射性同位素的量和样品量的多少、反应条件等因素有关。
, 百拇医药
通过观察标记物在动物体内不同脏器的放射性分布，125I标记的心肌肽素在肾中一直最高，结合粪和尿的放射性计数结果，说明心肌肽素的代谢产物绝大部分经肾组织通过尿而排泄，这与雷丹青等[4]和刘秀文等[6]报道的多肽类因子的排泄结果一致。
结果显示，心肌肽素静注后能到达心肌部位，放射性强度虽然不高，但它的降低速度慢，有助于较长时间发挥作用。脑和肌肉中的放射性强度很低，提示心肌肽素可能不易通过血脑屏障或在疏水性组织中分布低。
参考文献
1.Bold De Flynn,A J. Cardio native I-A novel heart peptide with potent diuretic and natriuretic properties. Life Science. 1983，33：297～299
, 百拇医药
2.张修建，韩范锡，丁清明，等.心肌肽素的生化性质及其对心肌细胞DNA的影响.药物生物技术.1996，3(2)：98～99
3.王浩丹，周申主编.生物医学标记示踪技术.人民卫生出版社，1995：9～11
4.雷丹青，李晓飚，廖共山.中华眼镜蛇蛇毒生长因子在大鼠体内分布的研究.中国生化药物杂志.1997，18(3)：137～139
5.陈明.碘-125标记蝮蛇蛋白在小鼠体内的分布.动物学研究.1981，2(4)：99～100
6.刘秀文，汤肿明，柴彪新，等.家兔注射125I标记重组人表皮生长因子后的药代动力学.军事医学科学院院刊.1997，21(2)14～16
(收稿：1999-11-24；修回：2000-03-22), http://www.100md.com